一种辣椒多酚在制药中的应用及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种辣椒活性多酚在制药中的应用及其制备方法，特别是在制备抗菌剂和抗肿瘤的药物中的应用。辣椒多酚具有抑菌、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抑制胆固醇上升等功效，应用前景广泛。辣椒多酚的制备方法是将辣椒茎、叶经粉碎，采用乙醇-超声提取法获得多酚粗提物，再经高速逆流色谱富集。该制备方法时间短，效率高，能耗少；纯化过程不需固体填料，条件温和，损失少、无污染，能高效、快速、低成本富集辣椒活性多酚，是一种适合工业化生产的方法。
【专利说明】一种辣椒多酚在制药中的应用及其制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种辣椒活性多酚在制药中的应用及其辣椒 活性多酚的制备方法。 技术背景：
[0002] 中国是世界辣椒第一生产国和主要消费国，种植和食用历史悠久。辣椒为一年 生草本植物，其成熟植株茎、叶与果实的产量相当，也就是生产1公斤辣椒果实，就会产生 1公斤左右的辣椒茎叶。然而，由于辣椒茎、叶口感不宜直接食用，长时间以来未能得到 有效的利用，通常被当作废弃物燃烧还地或者直接丢弃，造成了严重的环境污染和资源浪 费。因此寻找一种高效经济，绿色环保的辣椒茎、叶利用方法迫在眉睫。研究发现辣椒茎、 叶中含有多种活性成份，如：辣椒碱、多酚等。中国专利201210136560. 0从辣椒叶中提取 的黄酮苷具有α -葡萄糖苷酶抑制活性，但其含量极低，不足0. 2%。，辣椒叶中大部分活性 成分没有得到利用。植物多酚热稳定性差，易变性，常规制备手段产物易失活。中国专利 201010181740. 1和201210229217. 0分别采用了传统的提取植物多酚的方法：渗漉法和搅 拌浸提法，二者提取耗时长，耗能高、产率低，且获得的多酚生物活性差。近年来兴起的辅助 提取手段，如超临界流体萃取法和微波辅助法等，多酚提取率虽有提高，但是设备要求高， 投资大，成本高，不适应大生产要求。辣椒叶多酚生物活性好，但其含量较其它植物偏低，目 前尚无有效制备辣椒叶活性多酚的方法，严重制约了辣椒叶资源的开发利用。也没有辣椒 叶活性多酚在制备治疗和预防抗肿瘤药物中的应用，以及在制备抗菌剂中的应用的报道。
【发明内容】
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[0003] 本发明的目的在于提供一种辣椒多酚在制备抗菌剂以及抗肿瘤药物中的应用及 其该辣椒多酚的制备方法。本发明方法比传统实验室提取植物多酚的方法更优越，设备采 用聚能式超声波循环提取仪，可放大至工业化生产；使用高速逆流色谱富集辣椒多酚，整个 过程不需要使用固体填料，没有不可逆吸附，样品无损失、无污染，能高效、快速、低成本富 集辣椒活性多酚；获得的辣椒多酚具有抗菌、抗肿瘤活性。
[0004] 为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：
[0005] -种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用。
[0006] -种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0007] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其中所述的辣椒多酚是以辣椒 茎、叶粉末为原料，以乙醇-水溶液为溶剂，经过超声提取法提取，经高速逆流色谱富集所 得。
[0008] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其中所述的辣椒多酚是以辣椒 茎、叶粉末为原料，将辣椒茎、叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎叶粉，置于通风干燥 处保存待用；然后将前一步骤所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30 %?80 %的乙醇-水溶液， pH值为1?7,在超声波提取罐中混合，料液比为1:5?30,提取温度为30°C?60°C，超声功 率为200w?lOOOw，超声时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s，超声时间20?80min ;提 取结束，过滤得滤液，滤液经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进而通过高速逆流色谱富 集纯化，得到辣椒多酚；所述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统由乙酸乙酯-甲醇-水 10:1:10组成，进一步加入酸调PH值为1?7 ;将上述溶剂系统置于分液漏斗中充分振摇 后静置分层，取上相溶剂为固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度5?60°C时使逆流色谱 仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样品用上下相混合溶剂溶 解，由进样阀进样；根据检测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
[0009] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其中所述的抗菌剂中的菌是指枯 草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、青霉、大肠杆菌、黑曲霉。
[0010] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤细胞是人神 经胶质瘤U251细胞和人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞。
[0011] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的辣椒多酚是以辣 椒茎、叶粉末为原料，以乙醇-水溶液为溶剂，经过超声提取法提取，经高速逆流色谱富集 所得。
[0012] 如所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的辣椒多酚是以辣 椒茎、叶粉末为原料，将辣椒茎、叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎叶粉，置于通风干 燥处保存待用；然后将前一步骤所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30%?80%的乙醇-水溶 液，pH值为1?7,在超声波提取罐中混合，料液比为1:5?30,提取温度为30°C?60°C，超 声功率为200w?lOOOw，超声时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s，超声时间20?80min ; 提取结束，过滤得滤液，滤液经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进而通过高速逆流色 谱富集纯化，得到辣椒多酚；所述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统由乙酸乙酯-甲 醇-水10:1:10组成，进一步加入酸调pH值为1?7 ;将上述溶剂系统置于分液漏斗中充 分振摇后静置分层，取上相溶剂为固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度5?60°C时使逆 流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样品用上下相混合 溶剂溶解，由进样阀进样；根据检测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
[0013] 本发明同时提供了一种辣椒多酚的制备方法，该方法以辣椒茎、叶粉末为原料，将 辣椒茎、叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎叶粉，置于通风干燥处保存待用；然后将 前一步骤所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30%?80 %的乙醇-水溶液，pH值为1?7,在 超声波提取罐中混合，料液比为1:5?30,提取时温度为30°C?60°C，超声功率为200w? 1000W，超声时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s，超声时间20?80min ;提取结束，过滤 得滤液，滤液经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进而通过高速逆流色谱富集纯化，得到 辣椒多酚；所述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统由乙酸乙酯-甲醇-水10:1:10组 成，进一步加入酸调pH值为1?7 ;将上述溶剂系统置于分液漏斗中充分振摇后静置分层， 取上相溶剂为固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度5?60°C时使逆流色谱仪柱子中充 满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样品用上下相混合溶剂溶解，由进样 阀进样；根据检测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
【具体实施方式】
[0014] 下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容,但并不以此来限定本 发明。
[0015] 实施例1 :
[0016] 精密称量8L配置好的50%乙醇注入提取缸中，升温至60°C。将辣椒茎、叶粉末按 料液比1:25投入提取缸中，搅匀。设定提取的条件：超声波功率800w、超声时间30min、超 声间隙4s?8s、pH值2,进行提取。提取结束后，将提取液抽滤，将滤液减压脱溶并干燥， 得到辣椒多酚提取物粉末98. 5g。
[0017] 采用上海同田TBE-300C半制备型高速逆流色谱系统富集辣椒多酚，柱的容积为 300mL，溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水10:1:10,柱温：25°C。辣椒多酚的富集分两步进行 ： ①将体积比为10:1:10的乙酸乙酯-甲醇-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静止分层。取其 上层溶液（上相）为固定相，下层溶液（下相）为流动相。进样前，先用固定相充满整个柱 子，调整主机转速为890rpm，以5. OmL/min的流速将流动相泵入柱内，建立整个体系的动态 平衡。②用1:1的上相和下相混合液10mL溶解取得的辣椒多酚提取物500mg，由进样阀进 样，然后根据检测器254nm紫外图谱，接收目标成分辣椒多酚。
[0018] 实施例2:
[0019] 精密称量8L配置好的60%乙醇注入提取缸中，升温至50°C。将辣椒茎、叶粉末按 料液比1:20投入提取缸中，搅匀。设定提取的条件：超声波功率600w、超声时间50min、超 声间隙4s?6s、pH值3,进行提取。提取结束后，将提取液抽滤，将滤液减压脱溶并干燥， 得到辣椒多酚提取物粉末，得到辣椒多酚提取物粉末95. 5g。
[0020] 采用上海同田TBE-300C半制备型高速逆流色谱系统富集辣椒多酚，柱的容积为 30011^，溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水10 :1:10，加入冰醋酸调？!14.5，柱温：351：。辣椒多 酚的富集分两步进行：①将体积比为10:1:10的乙酸乙酯-甲醇-水混溶于分液漏斗中，力口 入冰醋酸调PH4.5,摇匀后静止分层。取其上层溶液（上相）为固定相，下层溶液（下相） 为流动相。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为890rpm，以7. OmL/min的流 速将流动相泵入柱内，建立整个体系的动态平衡②用1:1的上相和下相混合液10mL溶解取 得的辣椒多酚提取物500mg，由进样阀进样，然后根据检测器254nm紫外图谱，接收目标成 分辣椒多酚。
[0021] 实施例3:
[0022] 精密称量8L配置好的70%乙醇注入提取缸中，升温至40°C。将辣椒茎、叶粉末按 料液比1:10投入提取缸中，搅匀。设定提取的条件：超声波功率400W、超声时间70min、超 声间隙4s?4s、pH值4,进行提取。提取结束后，将提取液抽滤，将滤液减压脱溶并干燥， 得到辣椒多酚提取物粉末，得到辣椒多酚提取物粉末92. 5g。
[0023] 采用上海同田TBE-300C半制备型高速逆流色谱系统富集辣椒多酚，柱的容积为 30011^，溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水10 :1:10，加入冰醋酸调？!13.0，柱温：351：。辣椒多 酚的富集分两步进行：①将体积比为10:1:10的乙酸乙酯-甲醇-水混溶于分液漏斗中，力口 入冰醋酸调PH3. 0,摇匀后静止分层。取其上层溶液（上相）为固定相，下层溶液（下相） 为流动相。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为890rpm，以5. OmL/min的流 速将流动相泵入柱内，建立整个体系的动态平衡。②用1:1的上相和下相混合液10mL溶解 取得的辣椒多酚提取物500mg，由进样阀进样，然后根据检测器254nm紫外图谱，接收目标 成分辣椒多酚。
[0024] 实施例4 :
[0025] 辣椒活性多酚的抗菌活性测定：
[0026] 试验菌：
[0027] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus coureus)，G+
[0028] 大肠杆菌（Escherichia coli)，G-
[0029] 枯草芽抱杆菌（Bacillus subtills)，G+
[0030] 青霉（PeniciIlium)
[0031] 黑曲霉（Aspergillus niger)
[0032] 酵母菌（yeast)
[0033] 培养基：
[0034] 细菌：牛肉膏琼脂培
[0035] 霉菌：马铃薯葡萄糖琼脂
[0036] 酵母菌：酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基 [0037] 多酚溶液配制：
[0038] 精密称取实施例1所得辣椒活性多酚，以乙醇：水：二甲基亚砜（DMS0) = 2:2:1 的溶剂，以2倍稀释法，从50mg/mL，依次配置到最低浓度为0. 196mg/mL的溶液，过滤除菌备 用。
[0039] 菌悬液制备：
[0040] 细菌在营养肉汁琼脂固体培养基平板上活化，取1-2个单菌落加入到营养肉汤液 体培养基中制成种子液，适宜温度（蜡样芽孢杆菌30°C，金黄色葡萄球菌37°C，枯草杆菌芽 胞杆菌30°C，大肠杆菌37°C )、200rpm培养6-8h，使细菌处于对数生长期。通过测量0D值 调节菌液浓度使细菌的菌浓度为106cfu/mL。
[0041] 实验方法：
[0042] 采用平皿打孔法：将活化后供试菌用无菌环挑取1-2环放入盛装有15mL的无菌 生理盐水中，在振动器震荡均匀。将灭菌后的固体培养基加热后倒入平皿内，每个平皿约 20mL。待培养基凝固后，在无菌条件下用灭菌枪头吸取0. 2mL摇匀的菌悬液加入平皿内，再 用灭菌的玻璃涂布棒迅速将菌液涂抹均匀，制成含菌平板。待菌液被琼脂吸收后，用外径 6mm的灭菌不锈钢打孔器在培养基上打5个等距离的孔，再用微量加样器分别吸取融化的 培养基，每孔加入一滴融化的培养基封底，随后滴加0. 03mL试验液体或溶剂作阴性对照。 每种样品4次重复。把处理过的培养皿细菌放到37°C培养箱中培养24h，霉菌和肠膜明串 珠菌30°C培养48h。用游标卡尺测定抑菌圈的直径大小，并以此判断辣椒叶多酚对供试菌 的抑制效果。辣椒叶多酚的的抑菌作用结果如表1。
[0043] 表1辣椒叶多酚对供试菌的抑菌效果
[0044]
【权利要求】
1. 一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用。
2. -种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用。
3. 如权利要求1所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其特征在于所述的辣椒 多酚是以辣椒茎、叶粉末为原料，以乙醇-水溶液为溶剂，经过超声提取法提取，经高速逆 流色谱富集所得。
4. 如权利要求1所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其特征在于所述的辣椒 多酚是以辣椒茎、叶粉末为原料，将辣椒茎、叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎叶粉， 置于通风干燥处保存待用；然后将前一步骤所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30%?80% 的乙醇-水溶液，pH值为1?7,在超声波提取罐中混合，料液比为1:5?30,提取温度为 30°C?60°C，超声功率为200w?lOOOw，超声时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s，超声 时间20?80min ;提取结束，过滤得滤液，滤液经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进而通 过高速逆流色谱富集纯化，得到辣椒多酚；所述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统由乙 酸乙酯-甲醇-水10:1:10组成，进一步加入酸调pH值为1?7 ;将上述溶剂系统置于分 液漏斗中充分振摇后静置分层，取上相溶剂为固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度5? 60°C时使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样品用 上下相混合溶剂溶解，由进样阀进样；根据检测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
5. 如权利要求1所述的一种辣椒多酚在制备抗菌剂中的应用，其特征在于所述的抗菌 剂中的菌是指枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、青霉、大肠杆菌、黑曲霉。
6. 如权利要求2所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的 肿瘤细胞是人神经胶质瘤U251细胞和人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞。
7. 如权利要求2所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的 辣椒多酚是以辣椒茎、叶粉末为原料，以乙醇-水溶液为溶剂，经过超声提取法提取，经高 速逆流色谱富集所得。
8. 如权利要求2所述的一种辣椒多酚在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的 辣椒多酚是以辣椒茎、叶粉末为原料，将辣椒茎、叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎 叶粉，置于通风干燥处保存待用；然后将前一步骤所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30 %? 80%的乙醇-水溶液，pH值为1?7,在超声波提取罐中混合，料液比为1:5?30,提取温 度为30°C?60°C，超声功率为200w?lOOOw，超声时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s， 超声时间20?80min ;提取结束，过滤得滤液，滤液经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进 而通过高速逆流色谱富集纯化，得到辣椒多酚；所述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统 由乙酸乙酯-甲醇-水10:1:10组成，进一步加入酸调pH值为1?7 ;将上述溶剂系统置 于分液漏斗中充分振摇后静置分层，取上相溶剂为固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度 5?60°C时使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样 品用上下相混合溶剂溶解，由进样阀进样；根据检测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
9. 一种辣椒多酚的制备方法，其特征在于该方法以辣椒茎、叶粉末为原料，将辣椒茎、 叶洗净，干燥，粉碎，过20目筛，得辣椒茎叶粉，置于通风干燥处保存待用；然后将前一步骤 所得辣椒茎、叶粉与体积分数为30%?80%的乙醇-水溶液，pH值为1?7,在超声波提取 罐中混合，料液比为1:5?30,提取时温度为30°C?60°C，超声功率为200w?1000W，超声 时间与空化时间间隙为4s-4s?4s-8s，超声时间20?80min ;提取结束，过滤得滤液，滤液 经减压脱溶并干燥，制得粗提物浸膏，进而通过高速逆流色谱富集纯化，得到辣椒多酚；所 述的高速逆流富集步骤中，分离溶剂系统由乙酸乙酯-甲醇-水10:1:10组成，进一步加入 酸调pH值为1?7 ;将上述溶剂系统置于分液漏斗中充分振摇后静置分层，取上相溶剂为 固定相，下相溶剂为流动相，在体系温度5?60°C时使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后 使其主机转动，再将流动相泵入柱内；样品用上下相混合溶剂溶解，由进样阀进样；根据检 测器谱图接收目标成份辣椒多酚。
【文档编号】A61P35/00GK104208269SQ201410389258
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】黄昀, 金达明, 白光伟, 高春春, 陈本科, 唐劲天, 张松豹, 张子成 申请人:北京龙程菁华生物科技有限公司