一种分离纯化桑叶中绿原酸类成分的方法与流程

本发明属于天然药物有效成分的制备分离领域，具体涉及一种利用大孔吸附树脂制备分离桑叶中绿原酸类成分的工艺。

背景技术：

桑叶，为桑科植物桑的干燥叶，又名家桑、荆桑、桑椹树、黄桑等，全国大部分地区多有生产。具有降血压、血脂、抗炎等作用，主要功能为疏散风热，清肺润燥，清肝明目。用于风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。《神农本草经》中称桑叶为“神仙草”，具有补血、疏风、散热、益肝通气、降压利尿之功效。《本草纲目》中明确记载：“煎汁代茗，能止消渴”。现代科学实验发现桑叶中含有黄酮类、生物碱、多糖、多酚类、植物甾醇、脂类、挥发油、氨基酸、维生素及微量元素等多种活性化学成分，具有降血糖、降血脂、降血压、抗菌和抗病毒、抗氧化等多种药理作用。

有关桑叶中有效成分的提取方法的报道和专利已有不少，但通过文献查询，从桑叶中分离纯化绿原酸类成分的专利较少。中国专利申请号为201210255122.6公开了“一种具有抑菌活性的桑叶酚酸提取物制备方法和应用”，该专利涉及采用超声提取、树脂分离桑叶多酚的方法以及应用。中国专利申请号为200810219728.8公开了“一种桑叶多酚的制备方法及其微胶囊和应用，”采用超声-微波协调萃取、超滤、大孔吸附树脂纯化等工艺获得桑叶多酚并用微胶囊技术制备多酚微胶囊，应用于抗氧化和护肝功效的功能食品。上述方法中，多酚类成分的监控未能有具体的指标成分，而是以大类总体成分作为指标，比较粗糙。现有的专利未涉及以绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸为指标来监控桑叶提取物的质量。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种桑叶中绿原酸类成分的大孔树脂分离纯化方法，是将桑叶提取液经树脂吸附、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，获得桑叶提取物。

本发明提供的一种提取分离桑叶中绿原酸类成分的树脂纯化方法，通过以下步骤实现：

（1）将桑叶粉碎，用10～16倍一定浓度的乙醇回流提取1～3小时，提取2～3次，合并提取液。

（2）将醇提取液加酸调Ph至2～5，快速通过大孔树脂吸附，先用1～5倍树脂体积的纯化水冲洗，柱下液弃去，再用1～4倍树脂体积的碱溶液洗脱，再用2～5倍纯化水洗脱，收集碱以及水洗脱液。

（3）将步骤（2）中的碱以及水洗脱液加酸调Ph至2～5后，上大孔树脂吸附，再用50%～80%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液。

（4）将醇洗脱液减压浓缩，喷雾干燥，既得桑叶提取物。

步骤（1）中的乙醇浓度为50%～90%

步骤（2）中的碱可选碳酸钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸氢钙。大孔树脂型号可以为AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD427、HPD600、HPD722、HPD826中的一种；酸可选盐酸、磷酸或硫酸的一种；药材重量:树脂体积为1:1～1:3。

步骤（3）中的酸可选盐酸、磷酸或硫酸的一种。大孔树脂型号可以为AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD427、HPD600、HPD722、HPD826中的一种。药材重量:树脂体积为1:0.5～1:1。乙醇用量为树脂体积的2～5倍。

本发明具有以下优点：

1、本发明提供的桑叶中绿原酸类成分的树脂纯化方法操作简便、快捷；

2、所选用的大孔树脂具有吸附量大、解析率大，可再生重复使用；

3、用本发明纯化桑叶，经高效液相色谱法检测，绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸三种成分总量能达到40%以上。

附图说明

图1为桑叶中绿原酸类成分的纯化工艺流程图。

图2为三种绿原酸类成分的高效液相色谱检测图谱。

具体实施方式

实施例1

将桑叶药材10kg，粉碎，用12倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，加硫酸调节Ph至3，用15L的HPD826大孔树脂吸附，用20L纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用1%的碳酸氢钙溶液20L洗脱，并加60L纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将洗脱液加硫酸调Ph至4，用10L的HPD600大孔树脂吸附，再用80%乙醇30L洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得桑叶提取物121g，三种绿原酸类成分（绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸）含量之和为52%。

实施例2

将桑叶药材10kg，粉碎，用10倍量90%乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，加盐酸调Ph至4，用20L的D101大孔树脂吸附，用30L纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用2%的碳酸纳溶液40L洗脱，并加50L纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将洗脱液加盐酸调Ph至3，用8L的HPD400大孔树脂吸附，再用60%乙醇24L洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得桑叶提取物103g，三种绿原酸类成分（绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸）含量之和为47%。

实施例3

将桑叶药材10kg，粉碎，用14倍量60%乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，加磷酸调Ph至5，用10L的HPD100大孔树脂吸附，用10L纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用3%的碳酸氢钠溶液40L洗脱，并加50L纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将洗脱液加磷酸调Ph至2，用6L的HPD427大孔树脂吸附，再用70%乙醇30L洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得桑叶提取物116g，三种绿原酸类成分（绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸）含量之和为43%。

实施例4

将桑叶药材10kg，粉碎，用16倍量50%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，加盐酸调Ph至2，用25L的HPD722大孔树脂吸附，用25L纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用2%的氨水溶液50L洗脱，并加60L纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将洗脱液加盐酸调Ph至5，用7L的AB-8大孔树脂吸附，再用50%乙醇35L洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得桑叶提取物136g，三种绿原酸类成分（绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸）含量之和为42%。