本发明涉及一种缩短注射用紫杉醇脂质体组合物冻干周期的冻干工艺方法。
背景技术：
紫杉醇注射液于1992年由美国fda批准上市肿瘤一线治疗药物，但紫杉醇难溶于水及许多药用溶媒，因此，目前在国内外上市的注射液是将紫杉醇溶于聚氧乙基代蓖麻油与无水乙醇的复合溶媒中而制成的制剂。复合溶媒中的聚氧乙基代蓖麻油在体内会促进组织胺释放，使人体产生过敏反应，中等程度过敏反应的发生率高达50％，甚至危及生命，并能加重紫杉醇的外周神经毒性、产生肝脏毒性、影响抗肿瘤效果等毒副反应，限制了传统紫杉醇注射液的临床应用。
脂质体的靶向、低毒、高效等优点，越来越被人们所认识.但是由于脂质体存在稳定性差的问题，贮存期间易发生聚集、融合及药物渗透，且主要膜材料容易氧化、水解。为了解决上述脂质体稳定性不高的问题，目前公开的冻干制剂及其制备方法多为真空冷冻干燥、喷雾干燥、超临界流体技术等。
其中，采用冷冻干燥法将脂质体制成冻干粉针剂，不仅能大大延长其在体外的保存时间，同时也能避免药物产生变性，使药物中易氧化的物质得到保护，且微生物几乎无法进行，从而提高脂质体的物理和化学稳定性。如上海艾力斯医药科技有限公司的发明专利cn200610028725.7a中公开了一种稳定的脂质体组合物，由饱和磷脂和胆固醇作为成膜脂质，加入维生素e作为抗氧剂，以蔗糖作为冻干赋形剂，采用薄膜蒸发-冷冻干燥的方法制备，这种脂质体可作为抗癌药物紫杉醇的载体。青岛东辉医药科技发展有限公司的发明专利cn201310376983.4公开了一种注射用多西他赛纳米粒及其制备方法，采用冷冻干燥法制备。
但是，上述冻干方法还存在以下问题：
冻干周期长，影响产能，所需的投入成本高，此外，因为实际生产过程中大都以实际制品温度为主要控制温度，存在较大变量很难做到前后批次产品质量稳定可控，造成批与批之间产品质量不均一，进而还影响产品外观色泽、形状和包封率等，生产过程中废品率高。
本发明针对上述技术问题，提供了一种冻干周期短、成本低、质量稳定均一、产品外观佳、提高得率并适合生产的注射用紫杉醇脂质体组合物，该组合物工艺简单，而且冻干后制剂稳定，有利于大规模工业化生产，降低了生产成本，避免了脂质体粒径的波动变化，保证药效的发挥，提高了临床用药的安全性。
技术实现要素：
本发明提供一种新的预冻方法制得的注射用紫杉醇脂质体组合物。
本发明提供的制备注射用紫杉醇脂质体的冻干方法，包含下列步骤：
先将处方量的紫杉醇原料、卵磷脂、胆固醇溶于异丙醇或乙醇溶剂中，50～60℃恒温除去溶剂，加入溶有处方量的氨基酸和甘露醇或葡萄糖的水溶液，溶解后，用超声波或高压匀浆泵处理，定量分装入30ml西林瓶容器内，放置冷冻干燥机中，将溶液在0.5～2小时内迅速降至-50℃～-80℃，并保温4～8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.1～2小时内升温至-5℃，保温1～4小时，再将冻结体在1～2小时内升温至30℃，保温3～6小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂。
本发明提供的冻干方法，优选为包含下列步骤：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴50～60℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在0.5～2小时内迅速降至-60℃～-70℃，并保温6～8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.1～0.5小时内升温至-5℃，保温1～4小时，再将冻结体在1～2小时内升温至25～35℃，保温4～6小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂。
更优选：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴50～60℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在1小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.5小时内升温至-5℃，保温2小时，再将冻结体在1小时内升温至30℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得到外观均匀、类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量100％，包封率99％，体积平均粒径130nm，过氧化物2％，水分1％，整体冻干周期16.5小时。
本发明通过对药液的降温处理，缩短了冻干周期，降低生产成本，提高了产品质量和得率，有利于工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴50℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的 5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在1小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.3小时内升温至-5℃，保温4小时，再将冻结体在1小时内升温至30℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂，得外观均匀的类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量100％，包封率99％，平均粒径130nm，过氧化物2％，整体冻干周期18.3小时。
实施例2：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴60℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在0.5小时内迅速降至-50℃，并保温7小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在1.5小时内升温至-5℃，保温3小时，再将冻结体在1小时内升温至35℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂，得外观均匀的类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量98％，包封率99％，平均粒径119nm，过氧化物1％，整体冻干周期17小时。
实施例3：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴55℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在1小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在1小时内升温至-5℃，保温2小时，再将冻结体在1小时内升温至30℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂，得外观均匀的类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量99％，包封率99％，平均粒径125nm，过氧化物2％，整体冻干周期17小时。
实施例4：
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴50～60℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％葡萄糖溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在2小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.1小时内升温至-5℃，保温3小时，再将冻结体在1小时内升温至25℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩 气，得紫杉醇脂质体制剂。紫杉醇含量100％，包封率100％，平均粒径110nm，过氧化物2％，整体冻干周期18.1小时。
实施例5
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴55℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％甘露醇溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在2小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.3小时内升温至-5℃，保温3小时，再将冻结体在1小时内升温至25℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂，得外观均匀的类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量98％，包封率98％，平均粒径140nm，过氧化物3％，整体冻干周期18.3小时。
实施例6
先将处方量的紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴55℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％甘露醇溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将溶液在1小时内迅速降至-65℃，并保温8小时，得到冻结体，真空处理，使真空度小于10pa，再将冻结体在0.5小时内升温至-5℃，保温2小时，再将冻结体在1小时内升温至30℃，保温4小时，通入氮气、氦气或氩气，得紫杉醇脂质体制剂，得外观均匀的类白色块状紫杉醇脂质体制剂，紫杉醇含量99％，包封率99％，平均粒径130nm，过氧化物2％，整体冻干周期16.5小时。
比较例1：
按照中国发明专利cn201310376983说明书具体实施方式中提供的冻干工艺方法制备注射用紫杉醇脂质体：
称取注射用紫杉醇6.0g，精制卵磷脂72g及胆固醇10.8g置圆底烧瓶内，加适量乙醇至上述混合物中使完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴50℃减压干燥成膜，加含赖氨酸1.4g的5％甘露醇溶液溶解膜，用超声波仪超声粉碎或高压匀浆泵进行匀浆，再用0.2μm滤膜过滤除菌，分装于30ml西林瓶内，放置冷冻干燥机中，将冻干箱隔板的温度降低至-40℃以下，迅速将装有制剂的托盘放入冻干箱内，维持过夜12小时，然后进行真空处理，使箱内真空度小于10pa，再按-40℃保持48小时，-35℃保持24小时，-30℃保持12小时，-25℃保持12小时，-20℃保持6小时，-10℃保持6小时，-5℃保持6小时，0℃保持6小时，4℃保持4小时，通入氮气、氦气或氩气，得类白色块状紫杉醇脂质体制剂。紫杉醇含量99％，包封率99％， 平均粒径130nm，过氧化物2％，整体冻干周期136小时。
由本申请实施例1-6与比较例1比较可以看出，本申请专利提供的冻干工艺制备同一质量标准的紫杉醇脂质体，冻干周期大大缩短，产能大幅提高，有效地降低生产成本。