含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖作为有效成分的用于抗氧化的组合物的制作方法

本发明涉及一种用于抗氧化的组合物，所述用于抗氧化的组合物含有如下有效成分：由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物。
背景技术：
：自由基(freeradical)是化学上非常不稳定状态的化合物，所以想从周围的其他化合物夺取电子从而成为稳定状态的化合物的性质强烈。其结果，不仅自由基周围的分子容易失去电子从而受到氧化的损伤，而且会连续发生其本身再成为自由基从而攻击周围的化合物的一系列反应。所述自由基也在人体内通过生命活动自然地生成，作为代表性的自由基，有如超氧自由基(superoxideradical(o2-))、羟基自由基(hydroxylradical(ho·))、过氧化氢(hydrogenperoxide(h2o2))以及单线态氧(singletoxygen(1o2))一样的反应性非常强的自由基的活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ros)，所述超氧自由基来自于生成能量(energy)所必须的氧(稳定的分子状态的基态三线态氧(groundstatetripletoxygen))，所述能量为维持生命所需要的。如此生成的活性氧簇使得构成人体的脂肪和蛋白质以及基因因氧化而受到损伤从而成为引起以老化和癌症为首的脑卒中、帕金森病(parkinson’sdisease)等的脑病和心脏疾病、缺血、动脉硬化、皮肤损伤、炎症、风湿病(rheumatism)、自身免疫病等的各种疾病的原因，作为用于保护人体不受所述活性氧簇的危害的手段，人体具有如超氧物歧化酶(sod:superoxidedismutase)、过氧物酶(peroxidase)、过氧化氢酶(catalase)以及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase)一样的抗氧化酶系统(antioxidantenzymesystem)。然而，最近，因为伴随公害和环境污染的各种化学物质、食品添加物、吸烟、饮酒、紫外线以及精神性压力等的各种环境性要因，我们身体的平衡(balance)被打破的同时以过多地多于人体的正常的生命活动所需要的量的形式生成活性氧簇，从而脱离人体的自我抗氧化保护体系的能力，由此，各种疾病的发生以及老化速度正在增加。抗氧化活性是指如下能力：其不仅如上所述能够防止在生物体内过多地生成活性氧，而且能够防止引起细胞中不可恢复的损伤的氧化现象。具有所述抗氧化活性的物质叫做抗氧化剂，所述抗氧化剂大致可分为由人为合成的合成抗氧化剂以及存在于自然界的天然抗氧化剂。抗氧化剂被广泛利用于医药品、食品、化妆品以及饲料领域等多种领域。到目前为止，作为开发的合成抗氧化剂，有bha(butylatedhydroxyanisole，叔丁基羟基茴香醚)、bht(butylatedhydroxytoluene，丁羟甲苯)以及ndga(nordihydroguaiareticacid，去甲二氢愈创木酸)等，作为天然抗氧化剂，有超氧物歧化酶、过氧物酶、过氧化氢酶以及谷胱甘肽过氧化物酶等的抗氧化酶和抗坏血酸(ascorbicacid)(维生素c)、生育酚(tocopherol)(维生素e)以及类胡萝卜素(carotenoid)等的非酶性抗氧化物质。然而，由于合成抗氧化剂具有如下缺点：其怕热，如果加热的话就容易被破坏，不仅如此，生物体内的活性氧清除作用不充分且也能够在人体内诱发如过敏反应(allergy)或癌症一样的各种疾病，所以，限制对人体长期使用。因此，想从天然物中寻找抗氧化活性高且完全对人体无害的抗氧化物质的尝试正在积极地进行中。作为所述的天然抗氧化材料，绿茶、刺五加皮、臭椿、甘菊、柿叶、黄芩、海州常山、野蔷薇、荸荠、蒲公英、红花、樟树等的植物提取物等的效果广为人知，并且正在研究开发利用所述天然抗氧化材料的食品添加物、化妆品组合物以及药学组合物等(韩国专利第1258696号以及韩国专利第0682319号)。然而，尽管有所述努力，但是自然界中仍然存在未被知道的无数的抗氧化物质，因此，针对具有更加优秀的抗氧化活性的天然抗氧化材料的研究以及开发的必要性正在日渐增加。众所周知，撕裂蜡孔菌作为白腐菌(white-rotfungi)的一种，为了在生态界利用纤维素(cellulose)、半纤维素(hemicellulose)、其他多糖以及甘油(glycerol)等的碳源，执行被称为木质素(lignin)分解的共代谢(cometabolism)。然而，并未报告过撕裂蜡孔菌有优秀的抗氧化活性，也未报告过它们的提取物也具有抗氧化活性。对此，本发明的发明者们发现由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物具有抗氧化效果，并完成了本发明，本发明涉及含有所述物质作为有效成分的用于抗氧化的组合物。技术实现要素：本发明的目的在于，提供一种含有由撕裂蜡孔菌生成的药理活性成分的用于抗氧化的组合物。本发明的又另外的目的在于，提供一种含有由撕裂蜡孔菌生成的药理活性成分的具有抗氧化效能的添加剂。为了达成所述目的，本发明提供一种含有如下成分作为有效成分的用于抗氧化的组合物：由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物。为了达成所述目的，本发明提供一种含有如下成分作为有效成分的具有抗氧化效能的添加剂：由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物。为了达成所述目的，本发明提供一种抗氧化方法，所述抗氧化方法包括将如下成分用药于需要抗氧化能力的对象：由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物。为了达成所述目的，本发明提供一种用来制造用于抗氧化的药剂的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物的用途。根据本发明的含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物作为有效成分的组合物因为抗氧化活性非常优秀，所以能够有效地用作以抗氧化活性为基础的用于各种疾病的预防或者治疗的药学组合物、健康功能食品组合物、功能性化妆品组合物或者动物用饲料，或者用作所述组合物的抗氧化用添加剂。附图说明图1是表示由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖的dpph(1，1-diphenyl-2-pycrylhydrazyl；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)清除活性的图表(graph)。图2是表示由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖的abts(2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)；2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)清除活性的图表。具体实施方式以下，对本发明进行详细说明。本发明提供一种用于抗氧化的组合物，所述用于抗氧化的组合物含有如下有效成分：由撕裂蜡孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物。本发明的用于抗氧化的组合物能够用于医药品、食品、化妆品以及饲料领域等的多种领域。就根据本发明的组合物而言，所述胞外多糖可以包含约40～60重量％的糖和约30～40重量％的蛋白质、约40～50重量％的糖和约32～38重量％的蛋白质、或者约43～47重量％的糖和约33～36重量％的蛋白质，优选地，可以包含约45重量％的糖和约34重量％的蛋白质。所述糖可以含有甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)以及葡萄糖(glucose)。所述胞外多糖可以具有约100～150kda、约110～140kda或者约115～125kda的分子量，优选地，可以具有约120kda的分子量。作为一个优选的具体例子，所述胞外多糖可以通过包括如下步骤的制造方法制造：(a)对撕裂蜡孔菌菌丝体进行液体培养，从而制造撕裂蜡孔菌菌丝体培养液；(b)使得撕裂蜡孔菌菌丝体培养液干燥从而进行粉末化；以及(c)通过溶剂提取撕裂蜡孔菌菌丝体培养液粉末后，对其进行过滤并减压浓缩。在所述(a)步骤中的用于撕裂蜡孔菌菌丝体的液体培养的培养基包含糖、葡萄糖、淀粉、高粱粉、大麦粉、大豆粉、硫酸镁(mgso4)、磷酸二氢钾(kh2po4)、磷酸氢二钾(k2hpo4)以及水，氢离子浓度可以是4.5～6.0。作为一个优选的具体例子，所述培养基可以包含糖0.2～3重量％、葡萄糖0.2～3重量％、淀粉0.2～4重量％、高粱粉0.1～0.5重量％、大麦粉0.1～0.5重量％、大豆粉0.2～3重量％、硫酸镁(mgso4)0.05～0.1重量％、磷酸二氢钾(kh2po4)0.05～0.25重量％、磷酸氢二钾(k2hpo4)0.05～0.25重量％，剩余为水。在所述(a)步骤中的液体培养可以在蓝色led光源下进行，并可以在将二氧化碳的浓度保持在1,000～2,000ppm的状态下进行。此时，就液体培养而言，例如，在20～25℃下、氢离子浓度(ph)为4.5～6.0、光源为蓝色led、光照度保持0.5lux，并且空气以0.5～1.5kgf/cm2注入，二氧化碳的浓度保持为1,000～2,000ppm的同时可以进行8～13天，在22℃、ph5.0、1.0kgf/cm2、1,500ppm的条件下进行10天，此时胞外多糖的含量高，所以是优选的。作为所述(a)步骤的亲株(parentstrain)能够使用经过如下培养过程的物质：将以马铃薯葡萄糖琼脂(potatodextroseagar，pda)培养基状态在4℃下保管中的1个优良菌株，在锥形瓶中使用马铃薯葡萄糖肉汤(potatodextrosebroth，pdb)培养基，并在振荡培养器中保持25℃的恒温，培养7～9天。此时，作为接种体(inoculum)要投入的菌丝体的量以将要培养的溶液的量为基准，优选为0.5％(w/v)左右。不是说菌丝体量(％/100ml)多，胞外多糖的含量也一起升高，因此优选地，培养基的组成适用使得胞外多糖的含量形成得最高的选择性培养条件，而不是适用对菌丝体的生长最良好的营养比例以及环境条件。所述培养液能够分离精制为菌丝体和水溶液。为了所述分离精制，可以通过多片压滤机(multi-sheetfilterpress)和振动离心膜分离机(pallsep)对通过离心分离机去除菌丝体的溶液进行反复精制后，进行1分钟紫外线(uv)照射。此外，溶液需要在去除氧后进行密封保管，这是因为，溶液中存在菌丝的情况下，氧使得菌丝生长，并致使有效成分的含量发生变化。在所述(b)步骤中，使得在所述(a)步骤制造出的菌丝体培养液得到真空干燥或者冷冻干燥，从而能够进行粉末化。为了防止有效物质的消失，所述干燥在40℃以下的温度，优选地，在30℃以下的温度下进行48～96小时。并且，就在(b)步骤的干燥而言，与将蒸发温度设置为相对较高的真空干燥机相比，使用真空冷冻干燥机使得有效物质含量变化最小化，所以是优选的。在所述(c)步骤中，通过溶剂对在(b)步骤中得到的菌丝体培养液干燥粉末进行提取后，对作为根据本发明的组合物的有效成分的胞外多糖进行分离、制造。具体地，将蒸馏水100ml添加于干燥粉末5g，充分悬浮后，进行离心分离(8,000rpm,20min)，并将相当于分离出的上清液的量的2～3倍的提取溶剂添加于分离出的上清液，放进冰箱(4℃)，可以静置12小时。仅对所述的静置物中的上清液重新进行离心分离(8,000rpm,20min)后，回收沉淀物，从而能够制造粗制(crude)胞外多糖。优选地，在30℃以下对所述粗制胞外多糖进行真空冷冻干燥。所述提取溶剂可以是从由如下物质组成的组中选出的溶剂或者它们的混合溶剂：水、乙醇(ethanol)、甲醇(methanol)、丙酮(acetone)、丁醇(butanol)以及乙酸乙酯(ethylacetate)，优选地，可以是水或者50％(w/w)～80％(w/w)的乙醇水溶液。在根据本发明的含有由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物作为有效成分的用于抗氧化的药学组合物中还可以包括通常使用的适当的载体、赋形剂以及稀释剂。相对于组合物总重量，所述胞外多糖可以包含0.1至80重量％，优选地，可以包括0.1至50重量％，并且撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物能够以相当于所述胞外多糖的含量的量适当地被包含。然而，最为优选的胞外多糖或者包含胞外多糖的培养液、培养液的干燥粉末或者提取物的有效含量能够根据药学组合物的使用方法以及目的得到适当地调节。能够根据通常的方法分别对根据本发明的药学组合物进行剂型化并得以使用。适合的剂型有片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖衣片剂、硬质或软质的胶囊(capsule)、溶液剂、悬浮剂或者乳化液剂、注射剂、栓剂等，但并非限定于此。根据本发明的药学组合物能够利用药学上非活性的有机或者无机载体来制造适当的剂型。换句话说，剂型是片剂、被包层的(coating)片剂、糖衣片剂以及硬胶囊剂的情况，可以使用乳糖(lactose)、蔗糖(sucrose)、淀粉或者淀粉衍生物、滑石(talc)、碳酸钙(calciumcarbonate)、明胶(gelatin)、硬脂酸(stearicacid)或者硬脂酸盐。此外，剂型是软胶囊剂的情况，能够使用植物性油(oil)、蜡(wax)、脂肪、半固体以及液体的多元醇(polyol)。此外，剂型是溶液或者糖浆(syrup)形态的情况，可以使用水、多元醇、甘油、以及植物性油等。根据本发明的药学组合物除了所述的载体外，也还能够包括保存剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、溶解剂、甜味剂、着色剂、渗透压调节剂、抗氧化剂等。根据本发明的药学组合物的用药方法能够根据剂型而易于选择，并且能够进行口服或非口服用药。用药量虽然根据患者的年龄、性别、体重、病情、用药途径而可以不同，但是通常以有效成分胞外多糖为基准，可以将5至500mg/kg的量，优选地，100至250mg/kg的量分成一天一次至三次进行服用。然而，所述用药量无论从任何方面来讲都不对本发明的范围构成限定。根据本发明的药学组合物不仅提供优秀的抗氧化效果，而且也几乎没有由药物导致的毒性及副作用，从而作为抗氧化剂而长期服用时也能够放心服用。由此，就预防或者治疗而言，本发明的药学组合物能够用于预防以及治疗需要抗氧化效果的多种疾病，例如，老化、癌症、脑卒中、帕金森病、心脏疾病、缺血、动脉硬化、皮肤损伤、炎症、风湿病、自身免疫病等。此外，本发明提供具有抗氧化效能的健康功能食品，所述健康功能食品含有如下有效成分：由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物。根据本发明的健康功能食品可以是粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料的形态，可以是糖果、巧克力、饮料、口香糖、茶、维他命复合剂、健康辅助食品等。此时，所述食品中的根据本发明的胞外多糖或者包含胞外多糖的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物通常以整体食品重量的0.01至50重量％，优选地，以0.1至20重量％的形式被包含，健康饮料组合物的情况，以100ml为基准，能够以0.02至10g，优选地，以0.3至1g的比例被包含。所述食品中，与根据本发明的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或提取物一起，还可以包括食品学上能够允许使用的食品辅助添加剂。根据本发明的化妆品组合物除了包括显示抗氧化活性的有效成分的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物以外，化妆品组合物一般所利用的成分可以包含如下所述的通常的辅助剂以及载体，例如：稳定剂、溶解剂、表面活性剂、维生素、色素以及香料。所述化妆品组合物能够被制造为在该
技术领域：
一般所制造的任何剂型，例如，可以剂型化为：溶液、悬浮液、乳状液、膏(paste)、凝胶、霜、乳液、粉末(powder)、肥皂、含有表面活性剂的清洁(cleansing)产品、油、粉末粉底(foundation)、乳状液粉底、蜡粉底以及喷雾(spray)等。更为详细地，可以制造为柔软化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华、眼霜、洁面霜(cleansingcream)、洗面乳(cleansingfoam)、洁肤水(cleansingwater)、面膜(pack)、喷雾或者粉末的剂型，但并非限定于此。根据本发明的饲料组合物可以单独服用给动物或在食用载体中与其它饲料组合物相混合后给动物服用。此外，所述饲料组合物作为追肥(top-dressing)或者将饲料组合物直接混合于动物饲料或者用饲料和另外的口服剂型易于向动物用药。将所述饲料组合物和动物饲料区分开进行用药的情况，正如该
技术领域：
众所周知的，可以与药剂学上能够允许使用的食用载体相调和，从而制造为立刻释放或者放出性剂型。所述食用载体可以是固体或者液体，例如：玉米粉、乳糖、蔗糖、豆片(flake)、花生油、橄榄油(oliveoil)、芝麻油以及丙二醇(propyleneglycol)。使用固体载体的情况，饲料添加剂可以是片剂、胶囊剂、散剂、糖锭剂(troche)或者含糖片剂或者未分散形态的追肥，使用液体载体的情况，饲料添加剂可以是明胶(gelatin)软胶囊、或者糖浆剂或悬浮剂、乳剂、或者溶液剂的剂型。本发明的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物，以用于表示抗氧化效果为目的，可以作为添加剂用于各种医药品、食品、化妆品以及饲料等，此时，使用量以及使用形态可以根据目的进行适当地调节。本发明提供抗氧化方法，所述方法包括将由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物用药于需要抗氧化能力的对象。所述需要抗氧化能力的对象可以是哺乳动物，具体地可以是人类。此外，本发明提供用于制造抗氧化药剂的由撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物的用途。由所述撕裂蜡孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蜡孔菌的菌丝体培养液、菌丝体培养液的干燥粉末或者提取物同所述一样。此外，所述抗氧化能力可以用于预防以及治疗需要抗氧化效果的多种疾病，例如：老化、癌症、脑卒中、帕金森病、心脏疾病、缺血、动脉硬化、皮肤损伤、炎症、风湿病、自身免疫病等。以下，通过以下实施例对本发明进行更加详细的说明。但是，以下实施例只是用于对本发明进行示例，本发明的范围并非只限定为此。【实施例】制造例1.撕裂蜡孔菌培养液、其的干燥粉末、提取物及胞外多糖(exopolysaccharide；以下称“eps”)的制造1.1撕裂蜡孔菌培养液的制造使得从柞树活组织中分离的撕裂蜡孔菌通过传代培养而培养的毛霉菌在-80℃进行冷冻保管，所述柞树采集于庆尚北道尚州市，并将保管中的菌株在pda(potatodextroseagar)培养基(87塑料培养皿；difco，bectondickinsonandcompany)中传代2～3次后，仅将充分数量的完整菌株在4℃冰箱中保管后进行使用。并且在锥形瓶中形成pdb(potatodextrosebroth)培养基(difco，bectondickinsonandcompany)600ml后，放入一个pda培养菌株，并在25℃下进行8天振荡培养，从而获得pdb培养菌株。之后，将液体培养培养基在800l发酵槽中以121℃、1.5kgf/cm2杀菌20分钟后，在冷却至23℃的状态下，接种作为起子(starter)进行使用的pdb培养菌株600ml，并以0.5～1.5kgf/cm2进行通气的同时，在光源为蓝色led、光照度保持0.5lux、二氧化碳的浓度为2,000ppm的条件下使得撕裂蜡孔菌菌丝体在23℃的恒温下进行10天的液体培养，从而制造撕裂蜡孔菌菌丝体培养液，所述液体培养培养基包括：糖1.5重量％、葡萄糖0.5重量％、土豆淀粉0.5重量％、高粱粉0.25重量％、大麦粉0.25重量％、大豆粉0.75重量％、硫酸镁(mgso4)0.05重量％、磷酸二氢钾(kh2po4)0.05重量％、磷酸氢二钾(k2hpo4)0.05重量％，剩余为水。1.2撕裂蜡孔菌培养液干燥粉末的制造利用真空冷冻干燥机使得在制造例1.1中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液在25℃下进行72小时的冷冻干燥，并使其粉末化，因此，制造了撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的干燥粉末。1.3撕裂蜡孔菌培养液提取物的制造向在制造例1.2中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的干燥粉末5g中添加蒸馏水100ml，进行充分悬浊后，以8,000rpm进行20分钟离心分离后，向离心分离所得的上清液中加入相当于其量的2～3倍的乙醇，并在4℃下静置12小时。从所述的静置物中提取上清液，从而制造了撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的提取物。1.4从撕裂蜡孔菌培养液制造eps对在制造例1.3中所制造的撕裂蜡孔菌菌丝体培养液的提取物重新以8,000rpm进行20分钟离心分离后，回收沉淀物，从而获得粗制(crude)的eps。使得所述粗制的eps在真空冷冻干燥机中在25℃下进行72小时真空冷冻干燥，从而获得了由撕裂蜡孔菌生成的eps。实施例1.eps的特性评价1.1利用凝胶渗透色谱法(gelpermeationchromatography，gpc)进行的eps的分子量测定使得制造例1中所制造的eps在0.1mna2so4/0.05mnan3(通过冰醋酸(glacialaceticacid)将ph调整为4)溶液中以成为1％(w/v)的形式溶解后，进行离心分离，之后通过0.45μm针筒式过滤器(syringefilter)仅过滤上清液，从而通过gpc进行分析。具体地，gpc分析条件通过检测器利用折射指数，gpc柱(column)利用ohpaksb805hq(shodex，japan)，流动相使用0.1mna2so4/0.05mnan3(通过冰醋酸将ph调整为4)，流动相的流速以1.0ml/分进行流动。标准曲线利用具有各自不同的分子量(130、400、770、1200kda)的葡聚糖(dextran)(americanpolymercorporation，usa)来制作，并且利用折射指数(refractivityindex，ri)测定器knauerk-2310(germany)来测定eps的分子量。对测定条件进行整理如下表1所示。【表1】分子重的测定hplc系统knauerk-501系统柱ohpaksb805hq(shodex，japan)流动相0.1mna2so4/0.05mnan3/ph4流速1.0ml/min测定器ri(knauerk-2310)结果显示，本发明的eps的分子量约为120kda。1.2eps的糖及蛋白质含量测定对制造例1中所制造的eps进行二次精制后，用蛋白质水解酶进行处理，从而测定糖及蛋白质含量。具体而言，将一次精制的eps重新溶入蒸馏水后，以8,000rpm进行20分钟离心分离，从而分离上清液后，向所分离的上清液添加相当于其量的2～3倍的乙醇，并放进4℃的冰箱，静置12小时。之后，在静置物中再次以8,000rpm仅对上清液进行20分钟离心分离后，回收沉淀物，从而获得2次精制的eps。使得所述2次精制的eps溶解于蒸馏水后，用作为蛋白质水解酶的碱性蛋白酶(alcalase)以0.5％(w/v)的浓度在50℃下进行30分钟处理。糖含量通过酚-硫酸法(phenol-sulfuricacidmethod)进行测定。具体地，向按照不同浓度稀释的样品1ml中添加80％酚25μl后，添加硫酸2.5ml，从而在室温下进行冷却，并在465nm下测定吸光度，从而计算糖含量。此外，蛋白质含量通过bca方法(smithpk等，analyticalbiochemistry，150(1)：76-85，1985)得到测定，并作为标准物质使用牛血清白蛋白(albumin)。如上所述，测定的糖含量以及蛋白质含量如以下表2所示，糖含量表现为45～51重量％，蛋白质含量表现为33～34重量％。【表2】*酶处理：碱性蛋白酶(alcalase(0.5％，50℃，30分钟各数值为平均±se(n≥3)此外，eps的糖构成分析结果显示，eps主要含有甘露糖、半乳糖及葡萄糖。实施例2.eps的抗氧化效果验证2.1.dpph自由基清除活性测定为了验证从撕裂蜡孔菌菌丝体培养液分离的eps的抗氧化效果，对利用dpph(1，1-diphenyl-2-picryhydrazyl)的自由基清除活性进行了测定(关联文献：thaipongkriengsak.等，journaloffoodcompositionandanalysis，vol.19，pp669～675，2006)。具体地，dpph自由基的清除活性通过利用如下所述的方法进行测定：dpph自由基通过样品的抗氧化物质得到去除，从而自由基特有的颜色紫色得以脱色。将eps按照不同浓度(100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm及1,000ppm)每2ul地放入96孔板(wellplate)的孔后，添加100um的dpp溶液198ul并充分混合后，在常温下进行30分钟温育(incubation)。接下来，为了掌握剩余的dpph的量，测定540nm中的吸光度，从而确认不同浓度的dpph自由基清除活性。之后，表3及图1表示出将根据本实施例的样品的吸光度与未放入dpph的对照组的吸光度进行比较的自由基清除率(％)。所述自由基清除率(％)计算为[1-(样品的吸光度/对照组的吸光度)]x100。【表3】如表3所示，能够确认随着根据本发明的eps的浓度从100ppm增加至1,000ppm，dpph自由基清除活性渐渐增加。尤其，eps的浓度为1,000ppm时，表示为平均52.64％的dpph自由基清除率。因此，所述结果显示根据本发明的eps具有强烈的抗氧化活性。2.2.abts自由基清除活性测定为了验证从撕裂蜡孔菌菌丝体培养液分离的eps的抗氧化效果，对利用abts(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate)的自由基清除活性进行了测定(关联文献：thaipongkriengsak.等,journaloffoodcompositionandanalysis,vol.19,pp669～675,2006)。具体地，abts自由基清除活性通过利用如下所述的方法进行测定：由和过硫酸钾(potassiumpersulfate)的反应生成的深的青绿色的abts自由基通过样品的抗氧化物质得以去除，从而使得自由基特有的颜色青绿色得以脱色。使得2.6mm过硫酸钾混合于7.4mmabts溶液后，使得其在暗室中反应约24小时。用磷酸盐缓冲盐水(phosphatebufferedsaline)进行稀释，以便使其在732nm中的吸光度为0.700±0.030，之后和100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm及1,000ppm浓度的eps混合，使其在暗处反应10分钟。接下来，为了掌握剩余的abts的量，测定732nm中的吸光度。之后，表4及图2表示出将根据本实施例的样品的吸光度与未放入abts的对照组的吸光度进行比较的自由基清除率(％)。所述自由基清除率(％)计算为[1-(样品的吸光度/对照组的吸光度)]x100。【表4】如表4所示，能够确认随着根据本发明的eps的浓度从100ppm增加至1,000ppm，样品的吸光度减少的同时abts自由基清除活性渐渐增加。尤其，eps的浓度为1,000ppm时，表示平均37.67％的abts自由基清除率，从而表示出了具有强烈的抗氧化活性。因此，所述结果显示根据本发明的eps具有强烈的抗氧化活性。当前第1页12