本申请要求先前提交的未决申请的权益和优先权∶2015年8月5日提交的美国专利申请号14/818,810，2015年7月23日提交的欧洲专利申请号EP15178106.9和2015年7月3日提交的加拿大专利申请号2,896,038，其公开的内容以引用的方式整体并入本文。
技术领域：
本发明涉及包含透明质酸钠的聚合物基质组合物。更具体的，本发明涉及包含透明质酸钠的聚合物基质组合物，所述透明质酸钠源自细菌源，且所述组合物用于治疗创口和切口，治疗疼痛，透皮递送活性成分，持续释放活性成分和制备个人润滑剂。
背景技术：
：透明质酸(HA)是天然存在的黏多糖(也通常称为糖胺聚糖)。已经通过各种方法从许多组织源中将其分离，所述组织源包括玻璃体液、皮肤、关节液、血清、鸡冠、鲨鱼皮、脐带、肿瘤、来自猪皮的溶血性链球菌、鲸软骨和静脉和动脉壁。然而，HA也可以人工合成，或通过重组技术方式来制备。此外，众所周知HA也可以通过所选择的兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)菌株发酵来生产(参见颁发给Bracke等的US.Pat.No.4,517,295)，且能够轻易地转变为它的钠盐。HA分子的重复单元是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基葡糖组成的二糖。因为HA在中性pH下具有负电荷，所以它是可溶于水的，在水中形成高度粘稠溶液。已知当与非离子的聚合物例如羟乙基纤维素或羟基丙基纤维素组合时，HA的级分(fraction)(包括它的钠盐)形成稳定的聚合物基质。已知这样的聚合物基质制剂可用于制备人类和动物使用的各种应用的组合物。例如，包含透明质酸钠和羟乙基纤维素的制剂先前以IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGelfor的名称销售，其敷于创口来促进创口愈合。此外，已知以其它活性成分配制的HA聚合物基质可用作局部药物制剂，用于递送所述活性成分到皮肤真皮层下的位置。例如在US.Pat.5,897,880，US.Pat.6120,804，US.Pat.6,387,407和US.Pat.6,723,345中公开用于透皮递送活性成分的HA聚合物基质局部用活性成分制剂。以其它的活性成分配制的HA聚合物基质已知用作用于持续释放药物试剂的制剂。US.Pat.6,063,405，US.Pat.6,335,035和US.Pat.6,007,843公开用于持续释放递送活性成分的HA聚合物基质制剂。制备透明质酸钠聚合物基质制剂存在多种挑战。初始，在二十世纪八十年代仅从动物源获得的HA是市售的，且多种制剂通过注射递送，或用作眼睛中的滴剂，而不是用于针对皮肤病症的外用。用于各种制剂的所述天然HA通常是从公鸡冠中获得的。所述公鸡冠(亦称鸡冠)是禽类来源因此是动物来源。因此，已知使用来自公鸡冠的透明质酸钠所生产的透明质酸钠制剂导致过敏并携带与动物来源产品相关的其它风险，即传染动物疾病到人类的风险。因此，目前市场上可获得的经批准的包含透明质酸钠制剂的局部应用产品对于那些对动物来源的透明质酸钠过敏的病患是禁忌的。此外，由于难以生产当储存在试管中时，维持稳定性且对于正常使用不过于粘稠的制剂，透明质酸钠难以以超过1.5％w/w的高浓度配制。为此，许多销售的商用制剂具有HA或透明质酸钠的浓度远低于1％w/w，且实际上许多具有大约0.2％w/w的浓度。据发明人所知，目前没有销售包含超过1.5％w/w透明质酸钠的产品。当没有适当地混合和加工时，高HA或透明质酸钠浓度制剂将迅速地分解，因此在所述制剂中的HA或透明质酸钠的百分比将下降到低于容许极限(原始数量的+/-10％)，导致产品的非常短的货架寿命。因此，由于基质的不稳定，包含高浓度的透明质酸钠的制剂存在挑战。这导致在基质制剂中的不一致性和削弱透明质酸钠制剂执行它们的功能的能力。例如，当敷于创口来促进愈合时，透明质酸钠聚合物基质制剂有助于维持湿润的伤口环境，其效果取决于维持高透明质酸钠浓度的制剂。普遍认识到湿润伤口环境的维持肯定有助于伤口愈合。然而，由于它们的不稳定性和致使的透明质酸钠水平的下降随着制剂的分解而发生，高浓度透明质酸钠制剂在维持湿润环境方面是没有效果的。当配制用于递送药物时，高浓度透明质酸钠制剂的不一致性减少这样的制剂施用时允许药物扩散通过组织的能力，因此削弱它们达到治疗剂量的能力。此外，由于制剂的问题，之前以IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel销售的所述透明质酸钠聚合物基质制剂产品从市场撤出。因此，对用于配制包含高浓度透明质酸钠的透明质酸钠聚合物基质的方法存在需要，所述透明质酸钠聚合物基质可以被生产和商业销售。技术实现要素：本发明涉及稳定的聚合物基质组合物，其优选为药物组合物，其包括获得自细菌源诸如兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)或枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)源的高浓度(例如从大约1.5％到大约3.5％w/w)的透明质酸钠。从细菌源获得的透明质酸钠以下被称为“生物发酵”透明质酸钠。所述组合物进一步包括量选择性地为从大约0.1％到大约2％w/w的非离子的聚合物，聚乙二醇，对羟基苯甲酸甲酯和水。如本文使用的“稳定的”，意味着在40℃，75％相对湿度(加速稳定性条件)在至少6个月的时期，和/或在25℃，60％相对湿度(长期稳定性条件)在至少18个月的时期，所述制剂中的透明质酸钠的量相对于在所述组合物中提供的原始量没有变化超过+/-10％(w/w)℃℃。通过在药物开发领域中已知的HPLC技术可以检测透明质酸钠的量。在本发明的一个方面，本发明的所述聚合物基质组合物包括药典级(USP或Ph.Eur.)和/或医药级的组分。这些术语在下文被进一步论述。优选地，所有的组合物的组分是药典级和/或医药级。在本发明的另一个方面，所述聚合物基质组合物包括一定规格的组分。在一个方面，本发明的所述聚合物基质组合物可以用于治疗创伤、烧伤和某些皮肤病症。在本发明的另一个方面，所述聚合物基质组合物包括活性成分。在本发明的这个方面，所述聚合物基质组合物可以用于透皮递送，局部递送，和持续释放递送所述活性成分。在一些方面，所述聚合物基质组合物可以用于治疗肌肉骨骼痛。本发明进一步的方面涉及所述聚合物基质组合物在治疗阴道干燥中的用途。在进一步的方面，本发明涉及用于制备本发明的稳定的聚合物基质组合物的方法。具体实施方式因为产品IPMWoundGel是由天然来源的透明质酸钠(“天然透明质酸钠”)制成，并且所述测试方案不充分和原材料没有足够的质量，发明人确定该产品不能成功地配制。所述天然的透明质酸钠由公鸡鸡冠生产(其为动物来源)并且属于化妆品级。已发现所述天然的透明质酸钠更易于有包括来自生产设备和周围环境的微生物污染。这导致产品的微生物损坏(microbiologicalfailure)，致使所述产品不安全和没有可用性。此外，所述产品IPMWoundGel使用不足够的或不相容的级别的成分。同样，测定IPMWoundGel产品质量的测试不足以确保足够的质量的稳定产品。发明人出人意料地发现可以使用获得自兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)或枯草芽胞杆菌细菌菌株的生物发酵透明质酸钠有利于配制透明质酸钠聚合物基质组合物。发明人进一步确定使用足够质量的，即药典(USP或Ph.Eur.)级和/或医药级的成分(包括生物发酵透明质酸钠)可以有利地配制透明质酸钠聚合物基质组合物。如本文提供的，医药级的成分或组分可以定义为具有至少99％纯度的成分或组分，优选不包含粘合剂、填充剂、赋形剂、染料或未知的物质。在一些实施例中，医药级的成分还满足一个或多个下列标准∶所述成分具有的内毒素水平为0.5EU/mg或更少(或对于液体成分为0.5EU/ml或更少)，所述成分具有总好氧微生物计数(TAMC)为少于100cfu/g(或对于液体成分为少于100cfu/ml)，所述成分具有总酵母菌和霉菌计数(TYMC)为少于10cfu/g(或对于液体成分为少于10cfu/ml)，所述成分具有核酸含量为0.5％w/w或更少，和所述成分具有蛋白质含量为0.3％w/w或更少。测量内毒素水平、TAMC、TYMC、核酸水平和蛋白水平的方法是制药领域技术人员所已知的。药典级的成分或组分指的是具有适当地对于USP(美国药典)，NF(国家处方集(NationalFormulary))，BP(英国药典)或Ph.Eur.(欧洲药典)的完整药典测试级别的成分，因此满足化学纯度标准，其是通过这些认可的国家的或区域的药典当局建立。典型地，药典级的成分或组分也将是医药级的。用于测试在所述制剂中透明质酸钠和对羟基苯甲酸甲酯的量的经确认的测定方法，以及通过符合细菌内毒素测试(BacterialEndotoxinTest)(“BET”)和微生物试验限度(包括针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门氏菌(Salmonellasp.))，以及符合其它的参数，已经用于证实本发明所述制剂的质量。本发明人出人意料地发现，相对于包括天然透明质酸钠的可比较的组合物，根据本发明的组合物具有改进的稳定性(即在40℃，75％相对湿度(加速稳定性条件)在至少6个月的时间，和/或在25℃，60％相对湿度(长期稳定性条件)在至少18个月的时间，在所述制剂的透明质酸钠的浓度变化相对于组合物中提供的原始的数量没有超过+/-10％(w/w))、改进的伤口愈合性能、和减少的细胞毒性效果，所述天然透明质酸钠可以获得自禽类来源和非药品和/或非药典级组分(例如IPMWoundGel)。认为本发明的组合物的稳定性，伤口愈合性能和细胞毒性借助于生物发酵透明质酸钠得到改善，并且借助于药典级和/或医药级的组分得到甚至进一步的改善。发明人进一步开发用于配制聚合物基质组合物(其包含高浓度(即在大约1.5％w/w到大约3.5％w/w之间)的透明质酸钠)的方法，并且生产包含依据本发明的高浓度的透明质酸钠的稳定的聚合物基质组合物。此外，本文提供了通过所述方法获得的制剂。在一些实施例中，所述方法包括这些步骤：a)加入对羟基苯甲酸甲酯到水中，并混合以产生对羟基苯甲酸甲酯溶液，b)加入生物发酵透明质酸钠到所述对羟基苯甲酸甲酯溶液，并混合以产生透明质酸钠溶液，c)分开地溶解所述非离子的聚合物(任选为羟基纤维素)在水中以产生非离子的聚合物溶液，d)合并所述透明质酸钠溶液与所述非离子聚合物溶液，并混合以产生均匀的透明质酸钠非离子聚合物溶液，e)加入聚乙二醇到所述透明质酸钠非离子聚合物溶液，并混合以形成所述聚合物基质组合物。典型地，通过所述方法获得的聚合物基质组合物除包括聚乙二醇，对羟基苯甲酸甲酯和水之外，还包括大约1.5％w/w到大约3.5％w/w的生物发酵透明质酸钠和大约0.1％w/w到大约2.0％w/w非离子的聚合物。所述方法可以进一步包括加入至少一种活性成分的步骤，所述活性成分选自：泛酸、双氯芬酸钠、烟酸和甘油。用于所述方法的每一种组分可以是如本文定义的药典级和/或医药级。优选地，组合物的所有组分是药典级和/或医药级。每一组分也可以以本文定义的量提供并且可以具有本文定义的性能(例如纯度)。透明质酸钠(CAS号:9067-32-7，分子式[C14H20N11Na]n)由直链多糖组成，其基本单元是通过葡糖醛酸(glucuronidic)(1-3)键连接的D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-葡糖胺的二糖。所述二糖单元是通过如式1所示的氨基己糖苷(hexosaminidic)(1-4)连接基团来直链聚合的∶透明质酸钠是白色或几乎白色，非常吸湿的粉末或纤维状集合体。它是无嗅的和5％溶液的pH在5.0-8.5范围之内。透明质酸钠易溶于冷水且在有机溶剂中不溶。高质量的透明质酸钠，即BET≤0.5EU/g微生物质量，可以从商业供应商获得。获得生物发酵透明质酸钠的方法可以不同，但一般而言，所述制备包括下列步骤∶发酵所选的兽疫链球菌菌株；选择从发酵中获得的透明质酸钠粗制品；通过过滤纯化所述粗制品；利用有机溶剂析出透明质酸钠；和干燥。从兽疫链球菌中获得的生物发酵透明质酸钠可以从供应商诸如QUFU，Freda和Contipro等商业途径获得。举例来说，Bracke等的U.S.Pat.No.4,517,295公开了以高产率从链球菌制备透明质酸，其通过在缺氧状态下CO2富集的生长培养基中发酵所述细菌，从产生的培养液中分离细菌和从培养液的余留组分中分离透明质酸而进行制备。通过用三氯乙酸杀死所述细菌，促进从所述透明质酸分离微生物。在去除细菌细胞和浓缩更高分子量发酵产品之后，通过沉淀、再悬浮和再沉淀而分离和纯化所述透明质酸。根据本发明展现极好的基质构造的生物发酵透明质酸钠的一种具体的级分是具有平均分子量在大约600,000道尔顿到大约800,000道尔顿之间的透明质酸钠。同样发现具有平均分子量500,000到1,000,000道尔顿的生物发酵透明质酸钠在本发明的制剂中是可接受的。除了生物发酵透明质酸钠之外，本发明的聚合物基质制剂还包括非离子的聚合物。适用于本发明的制剂的非离子的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、共聚维酮、聚乙烯醇、纤维素衍生物、山梨醇基聚合物、刺槐豆胶、瓜尔胶、麦芽糊精、乙烯基吡咯烷酮共聚物、聚丙烯酰胺、聚氧化乙烯共聚物、中和的聚丙烯酸、聚山梨醇酯、乙氧基化物、聚醇(polyalcohols)、聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇(MPEG)和α，ω-二烃基-乙氧基化物或其混合物(alpha,omega-dialkyl-ethoxylates)。适用于本发明的聚乙烯吡咯烷酮包括PVPK-90、PVPK-17和聚乙烯基吡咯烷酮-醋酸乙烯酯(PVP-VA)共聚物。适用于本发明的纤维素衍生物包括羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基(羟乙基)纤维素和甲基纤维素。适用于本发明的山梨醇基聚合物包括Neosorb。适用于本发明的聚丙烯酸包括，但不限制于中和的Carbopol980、Carbopol940和Carbomer981(旧型Carbomer941)。适用于本发明的聚山梨醇酯包括聚山梨醇酯20(USP/Ph.Eur.)、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40(USP/Ph.Eur.)、聚山梨醇酯60(USP/Ph.Eur.)、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80(USP/Ph.Eur.)、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85和聚山梨醇酯120。适用于本发明的非离子的聚合物特别优选为羟乙基纤维素(“HEC”)。人们认为有许多这样的非离子的聚合物可成功用于形成本发明的聚合物基质制剂。照此，包括在本发明中的是任何可以成功地与透明质酸钠形成聚合物基质的非离子聚合物。用于生产本发明的聚合物基质组合物的其它合适成分包括稳定剂和填充剂诸如对羟基苯甲酸甲酯、苯甲醇、聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇和纯净水。优选地，用于本发明的生物发酵透明质酸钠聚合物基质组合物的成分符合药典标准(USP或Ph.Eur.)。在优选的实施例中，用于本发明的组合物的生物发酵透明质酸钠是药典或医药级质量。更优选地，所有用于本发明的制剂的原材料是高微生物安全性的(highmicrobiologicalquality)(即药典和/或医药级)。相反，在包括动物来源的透明质酸钠IPMWoundGel中，各个组分不满足药典和/或医药级标准。下列表格1对比了从产品IPMWoundGel中所用的配方到本发明的配方在原材料的规格方面所做出的变化。表格1.相较于产品IPMWoundGel中所用原材料的规格，用于本发明制剂的原材料的规格变化用于IPMWoundGel的PEG的级别是断续地PEG400，其可以降低产品的稳定性。形成的基质比本发明的制剂更不稳定。用于本发明的制剂的优选实施例的PEG具有更好的纯度，因为限定物质,就是乙二醇和二乙二醇，被更好控制。选择性地，用于本发明制剂和具体地说，在制备所述制剂的方法中的PEG，包括以少于0.25％w/w的结合量的乙二醇和二乙二醇。优选地，用于本发明的制剂和在制备所述组合物的方法中的PEG的平均分子量(质量平均数和/或数量平均)是200道尔顿。(下文称作“PEG200级别”。)在一些实施例中，所述PEG的平均分子量(质量平均和/或数量平均)不小于190或大于210。在一些实施例中，具有至少400道尔顿分子量的PEG的量少于PEG总重量的5wt％,4wt％,3wt％,2wt％或1wt％。在一些实施例中，存在于所述制剂的PEG的量为从大约0.5％到大约10％w/w，或大约1％到大约5％w/w，或大约2％到大约4％w/w，或大约3％w/w。IPMWoundGel中使用的透明质酸钠是化妆品级的且不满足本文定义的药典和/或医药级要求。在优选的实施例中，本发明运用具有一致质量的医药级和/或药典级的透明质酸钠。优选地，所述透明质酸钠具有低含量的核酸和蛋白质(例如核酸含量为0.5％w/w或更少，和/或蛋白质含量0.3％w/w或更少)。在本发明的优选的实施例中，TYMC微生物计数被更好控制(例如10cfu/g或更少)，并且测试所有特定微生物确保它们不存在。另外，在本发明的优选的实施例中，测试BET且其为0.5EU/mg或更少，并且透明质酸钠的蛋白质含量显著地减少(例如从对于IPMWoundGel的5％/w或更少，到对于本发明的优选实施例的0.3％w/w或更少)。论及在本发明的优选实施例中使用的HEC，相较于原料供应商提供的IPMWoundGel所使用的HEC(例如所述HEC具有的TAMC少于1000cfu/g)，对微生物计数有更好的控制(例如HEC具有的TAMC少于100cfu/g)。因此，发现在优选实施例中本发明的制剂显著地具有更好的质量。在本发明优选的实施例中，针对TAMC和TYMC试验测试了对羟基苯甲酸甲酯原料来确保仅优质的原料用于本发明的优选实施例的制剂的生产中。例如，对羟基苯甲酸甲酯的TAMC和TYMC优选为10cfu/ml或更少。存在于本发明制剂中的对羟基苯甲酸甲酯是大约0.01到大约0.3％w/w，大约0.1到大约0.3％w/w或大约0.2％w/w的量。另外，在本发明的优选实施例中，通过进行附加测试TAMC和BET来更好控制纯净水的微生物。例如，水的TAMC是100cfu/ml或更少，和/或水的BET是0.25EU/ml或更少。所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂是透明的粘性的，无嗅的，水性凝胶，其主要由为透明质酸的衍生物盐的透明质酸钠组成。生物发酵透明质酸钠的制剂是由带负电荷的聚合物(即透明质酸钠)和非离子的聚合物(诸如HEC)组成的聚合物基质。换言之，透明质酸钠(作为带负电荷的聚合物)与非离子的聚合物(诸如HEC)结合形成所述聚合物基质的部分，并且它通过所述基质有助于维持湿润的环境。在所述聚合物基质中的透明质酸钠的浓度为大约1.5％到大约3.5％w/w，或大约2％到大约3％w/w，或大约2.3％到2.7％w/w，或大约2.5％w/w。除了HEC，所述非离子的聚合物的浓度为大约0.1％w/w到大约2.0％w/w，优选地大约0.5％到1.5％w/w，和更优选大约0.7％w/w到大约1.3％w/w。在一些实施例中，所述非离子的聚合物的量为大约1％w/w。HEC的浓度可以为大约0.1％w/w到大约2.0％w/w，或大约0.1％w/w到大约1.5％w/w，优选地大约0.5％到1.5％w/w，和更优选，大约0.7％w/w到大约1.3％w/w。优选地，如上文定义的，非离子的聚合物诸如HEC是药典或医药级的。其中当无法获得药典或医药级的非离子聚合物，应该使用可获得的最佳质量的非离子的聚合物。生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的粘度应该在可接受限值或范围，以便所述基质是稳定的和容易应用在皮肤，伤口，或其它的组织上。所述制剂同样应该具有可以在生产和填充期间方便操作的粘度。已经研究所述粘度范围。当在室温(23℃，77°F)下测试时，已确定本发明的制剂应该具有的粘度为大约10,000到50,000cps(cP)℃。制剂的治疗有效pH范围设定在5.0到7.0。在优选的实施例中，本发明的聚合物基质组合物可以包括的生物发酵透明质酸钠的量为约2.3到约2.7％w/w，包括的所述非离子的聚合物，优选地为羟基纤维素，量为从约0.5到约1.5％w/w，包括的所述聚乙二醇的量为大约1到大约4％w/w，和包括的所述对羟基苯甲酸甲酯的量为大约0.1到约0.3％w/w。最优选地，所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂包括透明质酸钠(2.5％,w/w)，HEC(1％w/w)，对羟基苯甲酸甲酯(0.2％w/w)，聚乙二醇(3％，w/w)和纯净水，USP(大约93％w/w)。在优选的实施例中，所有的组分/成分是如本文定义的药典级和/或医药级的。所述试验结果发现在一个具体的实施例中，在室温下，这个生物发酵透明质酸钠制剂的平均粘度是30,000cps，即刚好在范围(10,000-50,000cps)中间。众所周知，透明质酸钠的分子量和浓度对于产品粘度具有直接影响。用于制备本发明的凝胶的溶液可以以多种方式制备。所述非离子的聚合物，如HEC可以溶于水中，与阴离子的或带负电荷的透明质酸钠溶液混合来形成透明质酸钠/非离子的聚合物基质，然后加入或载入任选的活性成分到系统中。所述制备方法可以包括以低速(大约25rpm到少于大约400rpm)到中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)以几个小时(大约1到大约2小时)溶解非离子的聚合物(诸如HEC)于水中。分开地，可以边高速搅拌，边缓慢地添加透明质酸钠到水中，继之以中速搅拌(大约400rpm到少于大约2000rpm)几个小时(大约2小时)，继之以低速度大约25rpm到少于大约400rpm以长时间搅拌(整夜，或大约8小时到大约15小时)直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在混合物中并形成透明似水晶的粘稠溶液。可以添加所述非离子的聚合物(诸如HEC)溶液到透明质酸钠溶液中并以中速混合(大约400rpm到少于大约2000rpm)，继之以低到中速(大约25rpm到少于大约2000rpm)以长时间(大约4小时到大约15小时)混合直到产生均匀的溶液。然后可以添加常规的药学上可接受的乳化剂、悬浮剂、溶剂(诸如聚乙二醇200)、抗氧化剂(诸如连二亚硫酸钠(sodiummeta-bisulfate))和防腐剂(诸如苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯)到该系统中。当使用安全技术，用活性成分配制成用于透皮或持续释放所述活性成分的系统时，可以一边增加速度到高速(从大约2000rpm到约3000rpm)，一边缓慢添加所述活性成分(例如3％双氯芬酸钠)到上述透明质酸钠/非离子的聚合物基质混合物，并且所述活性成分全部数量的添加应该在短时期(大约15分钟)内完成。一旦所有组分混合在一起，如以低速(大约25rpm到少于大约400rpm)到中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)混合大约2小时到20小时，则填充所述系统到试管中。所得到的系统是澄清的到略微混浊，无色，粘稠，无臭的凝胶，发现凝胶储存几年(从18个月到4年)后仍是稳定的。优选地，根据本发明的生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂根据如下进行制备。首先，在合适的容器中加入对羟基苯甲酸甲酯到水中并以中速混合(大约400rpm到少于大约2000rpm)数小时(大约2小时)。确保对羟基苯甲酸甲酯完全地溶解。然后以稳流慢慢地加入透明质酸钠到混合物中，同时在以约1小时将透明质酸钠装入合适的容器时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)到高速(大约2000rpm到少于大约3000rpm)逐渐地增加搅拌速度。以中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)混合数小时(大约2小时)。继续以低速(大约25rpm到少于大约400rpm)长时间(大约8小时)混合直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在混合物中，并形成透明似水晶的粘稠溶液。在分开的容器中溶解HEC(例如1％)在纯净水中，同时以中速搅拌(大约400rpm到少于大约2000rpm)并搅匀。继续搅拌数小时(大约1到大约2小时)。添加所产生的HEC溶液到透明质酸钠溶液中并以中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)混合，继之以低速(大约25rpm到少于大约400rpm)以长段时间(大约4小时)混合直到产生均匀的溶液。加入聚乙二醇到混合物中，同时以中速(大约400rpm到少于大约2000rpm)混合。继续以中速混合大约1小时。减速和继续以低速混合(大约25rpm到少于大约400rpm)数小时(最少大约3小时)。然后可以填充块状凝胶在试管或瓶子中，并且加盖(capped)。进一步提供通过该方法获得的聚合物基质组合物。在一些实施例中，如本文定义的本发明的制剂进一步包括活性成分。因此，本文定义的制剂的制备方法可以包括另外的加入活性成分的步骤。例如，特别提供稳定的聚合物基质组合物，其包括1.5％w/w生物发酵透明质酸钠，1.0％w/w羟乙基纤维素，3.0％w/w聚乙二醇，0.2％w/w对羟基苯甲酸甲酯，1.5％w/w泛酸和水。优选地，每个组分是药典级和/或医药级的。更优选地，所述生物发酵透明质酸钠是根据欧洲药典的医药级，其具有的核酸含量小于或等于0.5％，具有的蛋白质含量小于或等于0.3％，TYMC小于或等于10cfu/g，BET计数(BETscore)小于或等于0.5IU/mg，且测试不存在金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门氏菌(Salmonellasp.)；所述羟乙基纤维素具有的TAMC少于100cfu/g；所述聚乙二醇是PEG200级别和具有的结合的乙二醇和二乙二醇含量小于或等于0.25％，TAMC少于100cfu/mL和TYMC小于或等于10cfu/mL；所述对羟基苯甲酸甲酯具有少于100cfu/mL的TAMC和小于或等于10cfu/mL的TYMC；且所述水是纯化的，其具有少于100cfu/mL的TAMC和少于0.25EU/mL的BET计数。制造这样的组合物的方法包括下列步骤：加入对羟基苯甲酸甲酯到水中，以中速混合大约2小时直到完全溶解来产生对羟基苯甲酸甲酯溶液；以稳流加入生物发酵透明质酸钠到所述对羟基苯甲酸甲酯溶液中，同时在装入透明质酸钠装时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速；以中速混合大约2小时，继之以低速混合大约8小时-15小时；分开地，溶解羟乙基纤维素在水中，同时以中速搅拌和混匀；搅拌所述羟乙基纤维素混合物大约1到大约2小时来产生羟乙基纤维素溶液；加入所述羟乙基纤维素溶液到透明质酸钠溶液中；以中速混合直到产生均匀的溶液，继之以中速混合大约8小时到15小时；加入聚乙二醇到所述透明质酸钠羟乙基纤维素溶液中，同时以中速混合大约1小时；和加入泛酸并以中速均匀混合大约2小时直到溶解且所述凝胶是均匀的。“低”、“中”和“高”速如上定义。进一步提供通过所述方法获得的聚合物基质组合物。本文定义的或本文描述的方法获得的所述稳定的聚合物基质组合物可以用于治疗破损皮肤和/或治疗特应性皮炎，所述组合物包括1.5％w/w生物发酵透明质酸钠，1.0％w/w羟乙基纤维素，3.0％w/w聚乙二醇，0.2％w/w对羟基苯甲酸甲酯，1.5％w/w泛酸和水。进一步提供稳定的聚合物基质组合物，其包括:2.3％w/w生物发酵透明质酸钠，0.7％w/w羟乙基纤维素，10％w/w甲氧基聚乙二醇，0.3％w/w对羟基苯甲酸甲酯，3.0％w/w双氯芬酸钠和水。优选地，每个组分是药典级/或医药级的。更优选地，所述生物发酵透明质酸钠是根据欧洲药典的医药级，其具有小于或等于0.5％的核酸含量，具有小于或等于0.3％的蛋白质含量，小于或等于10cfu/g的TYMC，小于或等于0.5IU/mg的BET计数，且测试不存在金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门氏菌(Salmonellasp.)；所述羟乙基纤维素具有的TAMC少于100cfu/g；所述甲氧基聚乙二醇是USP药典级；所述对羟基苯甲酸甲酯具有少于100cfu/mL的TAMC和小于或等于10cfu/mL的TYMC；和所述水是纯净的，其具有少于100cfu/mL的TAMC和少于0.25EU/mL的BET计数。制造这样的组合物的方法包括下列步骤：加入对羟基苯甲酸甲酯到水中，以中速混合大约2小时直到完全溶解来产生对羟基苯甲酸甲酯溶液；以稳定流动加入生物发酵透明质酸钠到所述对羟基苯甲酸甲酯溶液中，同时在装入透明质酸钠时，随着混合物稠化和旋转保持(stays)而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速；以中速混合大约2小时，继之以低速混合大约8小时直到所有透明质酸钠溶解以产生透明质酸钠溶液；分开地，溶解羟乙基纤维素在水中，同时以低到中速搅拌和混匀；搅拌所述羟乙基纤维素混合物大约1到2小时来产生羟乙基纤维素溶液；加入羟乙基纤维素溶液到所述透明质酸钠溶液；以中速混合大约10到大约15小时直到产生均匀的溶液；加入甲氧基聚乙二醇到透明质酸钠羟乙基纤维素溶液中，同时以高速混合；以中速混合大约3到大约4小时；和在大约15分钟的期间内，慢慢地加入双氯芬酸钠，同时以高速混合；和以中速混合大约15到20小时。“低”、“中”和“高”速如上定义。进一步提供通过所述方法获得的聚合物基质组合物。如本文定义或通过本文定义的方法获得的所述稳定的聚合物基质组合物可以用于治疗光化性角化病/或用于治疗肌肉骨胳的疼痛，所述组合物包括:2.3％w/w生物发酵透明质酸钠，0.7％w/w羟乙基纤维素，10％w/w甲氧基聚乙二醇，0.3％w/w对羟基苯甲酸甲酯，3.0％w/w双氯芬酸钠和水。进一步提供稳定的聚合物基质组合物，其包括:1.5％w/w生物发酵透明质酸钠，0.7％w/w羟乙基纤维素，3％w/w聚乙二醇，0.2％w/w对羟基苯甲酸甲酯，0.85％w/w烟酸，3％w/w甘油和水。优选地，每个组分是药典级或医药级。更优选地，所述生物发酵透明质酸钠是根据欧洲药典的医药级，其具有核酸含量小于或等于0.5％，具有蛋白质含量小于或等于0.3％，TYMC小于或等于10cfu/g，BET计数小于或等于0.5IU/mg，且测试不存在金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门氏菌(Salmonellasp.)；所述羟乙基纤维素具有TAMC少于100cfu/g；所述聚乙二醇是PEG200级别和具有结合乙二醇和二乙二醇含量小于或等于0.25％，TAMC少于100cfu/mL和TYMC小于或等于10cfu/mL；所述对羟基苯甲酸甲酯具有TAMC少于100cfu/mL和TYMC小于或等于10cfu/mL；和所述水是纯净的，其具有TAMC少于100cfu/mL和BET计数少于0.25EU/mL。制造这样的组合物的方法包括下列步骤：加入对羟基苯甲酸甲酯到水中，以中速混合大约2小时直到完全溶解来产生对羟基苯甲酸甲酯溶液；以稳流缓慢加入生物发酵透明质酸钠到所述对羟基苯甲酸甲酯溶液中，同时在装入透明质酸钠时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速；以中速混合大约2小时，继之以低速混合大约8小时到15小时直到所有透明质酸钠溶解来产生透明质酸钠溶液；分开地，溶解羟乙基纤维素在水中，同时以低到中速搅拌和混匀；搅拌所述羟乙基纤维素混合物大约1到约2小时来产生羟乙基纤维素溶液；加入羟乙基纤维素溶液到所述透明质酸钠溶液；以中速混合大约8到大约15小时以产生均匀的透明质酸钠羟乙基纤维素溶液；加入聚乙二醇到透明质酸钠羟乙基纤维素溶液；以中速混合大约2.5小时；加入烟酸和甘油；以低速度搅拌大约2小时。“低”、“中”和“高”速如上定义。进一步提供通过所述方法获得的聚合物基质组合物。如本文定义或通过上文定义的方法获得的所述稳定的聚合物基质组合物可以用于治疗阴道的干燥，所述组合物包括1.5％w/w生物发酵透明质酸钠，0.7％w/w羟乙基纤维素，3％w/w聚乙二醇，0.2％w/w对羟基苯甲酸甲酯，0.85％w/w烟酸，3％w/w甘油和水。本发明所述生物发酵透明质酸钠配制的聚合物基质组合物可被用于生产药物组合物，医疗用具组合物，天然的健康产品组合物，和膳食补充剂组合物。在局部施用中，本发明所述的聚合物基质组合物用来维持湿润的伤口环境。维持湿润的伤口环境被广泛认为肯定有助于伤口愈合过程，并减轻某些皮肤病症。本发明所述的用生物发酵透明质酸钠配制的聚合物基质组合物可以用于局部施用或透过皮肤施用。例如，本发明所述的用生物发酵透明质酸钠配制的聚合物基质组合物可以局部用于治疗许多类型的溃疡(创口)(包括静脉淤滞(venousstasis)，糖尿病性创口和糖尿病性溃疡，手术后伤口)和用于抗衰老治疗。本发明组合物对难愈合创口有特别地效果，尤其是本发明所述组合物有效促进糖尿病患者手术切口愈合。例如，本发明所述组合物可有效促进足趾切断(digitamputations)后糖尿病患者尤其是患有骨髓炎的糖尿病患者的手术切口愈合。更特别地，用本发明的生物发酵透明质酸盐配制的所述聚合物基质组合物已经显示可用于局部施用来处理/治疗皮肤病症，烧伤(1度烧伤)，轻微的擦伤，轻微的割伤，和有助于缓解伴随干燥皮肤情况的干燥蜡质皮肤刺激。此外，用本发明的生物发酵透明质酸盐配制的所述聚合物基质组合物已经显示可用于局部施用来处理渗出性创口诸如腿部溃疡，褥疮，糖尿病溃疡，外科手术的创口(手术后和供区(donorsite))，机械或外科手术清除创口，二度烧伤，及治疗和缓解伴随各种类型皮肤病的烧伤、瘙痒和疼痛，其包括特应性皮炎，过敏性接触性皮炎和放射性皮炎。在其它的方面，用本发明的生物发酵透明质酸钠配制的所述聚合物基质组合物也可以用于生产用于持续释放递送活性成分的系统，和用于生产用于局部施用，局部递送或透皮递送活性成分的系统。在另外的方面，用本发明的生物发酵透明质酸钠配制的聚合物基质组合物能够用于生产个人润滑剂，用于处理女性性机能障碍症状。当用活性成分配制作为用于透皮递送活性成分的系统时，认为所述生物配制的透明质酸钠聚合物基质制剂形成微胶囊包裹(microencapsulates)，悬浮(suspends)，和/或截留(entrap)所述活性成分的基质，以便当施用它时，其缓慢释放进入全身循环系统或肌肉组织，提供通过皮肤递送活性成分到体内的受影响部位的方法。可以直接添加所述活性成分到透明质酸钠和非离子的聚合物(诸如HEC)的均匀溶液或胶体中，或者它在添加到透明质酸钠和非离子的聚合物(诸如HEC)的均匀溶液或胶体之前，分开溶解或分散入水中，并混匀。所述活性成分必须溶解在聚合物基质溶液中以便局部施用。本领域的技术人员熟知的常规的药学上可接受的赋形剂，诸如表面活性剂，悬浮剂，乳化渗透增强剂，增充剂(extender)和稀释剂(dilutants)，pH调节剂以及芳香剂，染色剂，风味剂及其它添加剂可以添加到该系统。一种用于增溶水不溶性药物的具体非限制性有效的材料是甲氧基聚乙二醇(MPEG)。一旦所有的组分混合一起，以中速混合1到4小时，所述系统被填充入试管或瓶子中，如果需要，进行杀菌，并储存用于将来使用。用于局部施用、或用于局部递送活性成分或透皮递送活性成分的利用活性成分配制的本发明的制剂，可以潜在用于治疗多种哺乳动物和动物病症和身体状况。这些系统对疼痛处理可具有特殊的应用，也就是治疗和减轻与任何疾病，病况或身体状况有联系的疼痛。不限制于治疗的具体的疼痛，用于局部施用/递送或用于透皮递送的利用活性成分配制的本发明的制剂，可以治疗下列在皮肤的真皮层下的疼痛的非限制性位置或来源，包括但不限于膝，踝关节，手，脚和颈。除了治疗与皮肤真皮层下的疼痛有联系的疾病之外，利用活性成分配制的用于局部施用/递送或用于透皮递送的本发明的制剂可以用于治疗各式各样的皮肤疾病以及许多溃疡类型(创口)，其包括静脉淤滞和糖尿病的创口。本发明已经显示在难于愈合的伤口中特别有效。举例来说，使用活性成分配制的用于局部施用或透皮递送的本发明的制剂可潜在地治疗的非限制性疾病包含皮炎病症，诸如∶接触性皮炎；特应性皮炎；放射性皮炎；脂溢性皮炎；钱币状皮炎；手足慢性皮炎；泛发性剥脱性皮炎(GeneralizedExfoliativeDermatitis)；瘀滞性皮炎；和局部擦伤皮炎；皮肤细菌感染，诸如∶皮肤的葡萄球菌疾病，葡萄球菌性烧伤样皮肤综合征；丹毒；毛囊炎；疔疮；痈；化脓性汗腺炎；甲沟炎感染和红癣；浅表真菌感染诸如∶皮肤癣菌感染；酵母菌感染；念珠菌病；和花斑癣；皮肤的寄生虫感染诸如∶疥疮；虱病；和匐行疹；毛囊和皮脂腺疾病诸如∶粉刺；红斑痤疮；口周皮炎；多毛症；脱发；须部假性毛囊炎(PseudofolliculitisBarbae)；和角质囊肿；鳞屑性丘疹(scalingpapular)疾病，诸如∶牛皮癣；玫瑰糠疹(PityriasisRosea)；和扁平苔癣；褥疮；良性肿瘤和恶性肿瘤。可局部施用的各式各样的活性成分可以用于本发明的局部或透皮递送系统。这些可以包括所有主要种类的药物并且没有限制，例如麻醉药包括苯佐卡因，丁卡因，卡波卡因，丙胺卡因，依替卡因，丁哌卡因和利多卡因；镇痛药诸如醋氨酚，布洛芬，氟比洛芬(fluriprofen)，酮基布洛芬，扶他林(US.Pat.No.3,652,762)，非那西汀和水杨酰胺；选自由下列组成的组的非甾体抗炎药(NSAIDS)：甲氧萘丙酸，醋氨酚，布洛芬，氟吡洛芬，酮基布洛芬，非那西汀，水杨酰胺，和吲哚美辛；抗生素包括抗阿米巴药，广谱和中谱真菌药物，单环β-内酰胺类和病毒药剂和具体地说包括诸如红霉素，青霉素和头孢菌素和它们的衍生物；中枢神经系统药物诸如硫利达嗪，地西泮，氯苯甲嗪，甲磺酸二氢麦角碱，氯丙嗪，甲基多巴肼和左旋多巴；金属盐诸如氯化钾和碳酸锂；选自由下列组成的组的矿物质：铁，铬，钼和钾；免疫调节剂；免疫抑制剂；甲状腺制剂诸如人造的甲状腺激素，和甲状腺素钠；包括下述的甾体和激素：ACTH，合成代谢物，雄激素和雌激素组合，雄激素，皮质激素和镇痛药，雌激素，糖皮质激素，促性腺激素，促性腺激素释放，人生长激素，低血钙，促生育素，甲状旁腺，黄体酮，孕激素，孕激素和雌激素组合，类生长抑素化合物，尿促卵泡素，抗利尿激素及其它；和选自下述的维生素：水溶性维生素，诸如复合维生素B(包括维生素B5和B3(烟酸))，维生素C，维生素B12和叶酸和兽医制剂。剂量可以根据病患变化，这取决于治疗的病症的类型和严重性以及施用的活性成分。通常，可以施用为1ml到75ml的剂量，其中优选的剂量使用2到25ml的凝胶化基质系统。当与另一种活性成分配制作为用于持续释放活性成分的系统，所述生物配制的透明质酸钠聚合物基质制剂可以允许在至少24小时到几天的间隔施用一次有效治疗水平得到活性成分。认为生物配制的透明质酸钠聚合物基质制剂形成微胶囊包裹，悬浮和/或截留所述活性成分的基质，以便当施用它时，其缓慢释放到全身循环系统或肌肉组织，来提供持续和延长的活性成分释放率(releaserate)。各式各样的活性成分可以用于依据本发明的持续递送系统。这些可以包括所有主要种类的药物，并且不受限制，例如麻醉药，其包括那些用于尾部的，硬脑膜外的，吸入，可注射的，眼球后的和脊骨的应用的药物，诸如丁哌卡因和利多卡因；镇痛药，诸如对乙酰氨基酚，布洛芬，氟比洛芬，酮基布洛芬，扶他林(US.Pat.No.3,652,762)，非那西汀和水杨酰胺；选自下列组成的组的抗炎药，甲氧萘丙酸和吲哚美辛；抗组胺剂，诸如马来酸氯苯那敏，酒石酸芬宁胺，马来酸吡拉明，琥珀酸多西拉敏，枸橼酸苯托沙敏，盐酸苯海拉明，异丙嗪，马来酸溴苯吡胺，马来酸右旋溴苯吡胺，富马酸氯马斯汀和苯丙烯啶；选自下列组成的组的止咳药，氢溴酸右美沙芬和愈创甘油醚；祛痰药诸如愈创甘油醚；减充血剂，诸如盐酸苯肾上腺素，盐酸去甲麻黄碱，假麻黄碱氢氯化物，麻黄素；抗生素包括抗阿米巴药，广谱和中谱真菌药物，单环β-内酰胺类和病毒药剂和具体地说包括诸如红霉素，青霉素和头孢菌素和它们的衍生物；支气管扩张药诸如茶碱，沙丁胺醇和间羟叔丁肾上腺素；心血管的制剂诸如地尔硫卓，心得安，硝苯吡啶和可乐宁包括肾上腺素受体激动剂，α受体阻滞剂，α和β受体阻滞剂，血管紧张肽转化酶抑制剂，β阻滞剂，钙通道阻断剂和强心苷；中枢神经系统药物诸如硫利达嗪，地西泮，氯苯甲嗪，二氢麦角毒甲磺酸盐，氯丙嗪，甲基多巴肼和左旋多巴；金属盐诸如氯化钾和碳酸锂；矿物质选自由下列组成的组，铁，铬，钼和钾；免疫调节剂；免疫抑制剂；甲状腺制剂诸如人造的甲状腺激素，和甲状腺素钠；甾体和激素包括ACTH，合成代谢物，雄激素和雌激素组合物，雄激素，皮质激素和镇痛药，雌激素，糖皮质激素，促性腺激素，释放促性腺激素，人生长激素，低血钙，促生育素，甲状旁腺，黄体酮，孕激素，孕激素和雌激素组合物，生长激素抑制素类似化合物，尿促卵泡素，抗利尿激素及其它；和选自水溶性维生素的维生素，诸如复合维生素B，维生素C，维生素B12和叶酸和兽医制剂。剂型也可以包括使用丁哌卡因，利多卡因，维生素B12，甲基氢化泼尼松和腺苷-5-单磷酸钠。可以直接添加所述活性成分到透明质酸钠和非离子的聚合物(诸如HEC)的均匀溶液或胶体中，或者在添加到透明质酸钠和非离子的聚合物(诸如HEC)的均匀溶液或胶体之前，它可以分别溶解或浸入水中。本领域的技术人员熟知的常规的药学上可接受的赋形剂，诸如表面活性剂，悬浮剂，乳化渗透增强剂，增充剂和稀释剂，pH调节剂以及芳香剂，染色剂，风味剂及其它添加剂可以添加到该系统。一旦所有的组分混合一起，以中速混合1到4小时，所述系统被填充入试管或瓶子中，杀菌并储存用于将来使用。本发明的剂型，以溶液或混悬剂形式，可以局部使用或通过肌内注射，硬膜外的或皮下注射。剂量可以根据病患变化，取决于治疗病症的类型和严重性以及施用的药物。所述活性成分必须溶解在聚合物基质溶液中以便局部施用。利用活性成分配制的本发明的制剂用于持续递送活性成分，可以潜在用于治疗多种动物情况和身体状况。这些系统对疼痛处理可能具有特殊的应用，也就是治疗和减轻与任何病况或身体状况有联系的疼痛。没有限制于治疗的具体的疼痛，当与活性成分一起配制的用于持续递送活性成分的本发明的制剂可以潜在地治疗下列非限制性疼痛位置或来源：腹部的，诸如阑尾炎，痛经，肌骨胳的，骨盆的，消化性溃疡，心因性，和泌尿的；急性的；臂；背痛；癌症；心脏的(心肌缺血)；胸；牙齿的；耳朵；食道的；眼睛；面部；头；和颈；纤维肌痛；脚；和腿；脚后跟；缺血性的疼痛诸如在心肌的，周边动脉的，腰骶部，二尖瓣脱垂，心肌梗死，肌筋膜的疼痛综合症(纤维肌痛，纤维肌炎)，颈，神经性的，神经递质反常，疼痛的，和夜间痛；骨盆的；心包的，外周动脉疾病；幻肢；胸膜炎的；多神经性的；乳房切除术后的综合症；手术后的；心因性；肺栓塞；肾病，诸如绞痛；根性撕脱伤；肩；残干；丘脑的；脚趾；和牙痛。本发明所述的持续递送所需活性成分的制剂除了注射于慢性的和难治的疼痛之外，该持续递送制剂可能被用于帮助手术后疼痛治疗。关于外科手术后应用，所述制剂可用于腹部的，子宫颈的，胸的或心脏手术之后，其中利用所述系统治疗被缝回一起的多层组织。这样的治疗可以帮助患者恢复，其不仅避免使用吗啡等上瘾药物，还导致快速和长期的疼痛缓解以实现快速的复原。本发明所述的制剂通过所述制药领域中已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。所述系统的有效但无毒的剂量被用于治疗。该用于施用药物或治疗各种病症的给药方案可以根据多种因素选择，包括受试者的类型，年龄，体重，性别，和身体状况，以及施用途径和采用的活性成分的具体制剂或组合。特定情况的适当的剂量的确定在本领域的技术范围内。通常所述活性成分的量按照所述系统的重量计算，可以从0.0001％到大约50％。各种的测试诸如细菌内毒素测试(BET)，生物相容性测试(实施例1,实施例2,和实施例3)和微生物生物负载测试(实施例7)等表明，本发明所述的生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂比在已知的IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel中使用的那些更为稳定和安全，而且有效的化学试验(实施例5和6)和所述产品在规律的时间间隔的稳定性数据(实施例4)表明，其具有更好的质量。除了已有的用于IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel产品的试验方法外，新的BET已经被执行，以确保本发明所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂满足可接受的BET试验限度，从而可减少患者致热原性(pyrogenicity)的发病率。以前对IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel产品没有BET试验限度。仅仅鉴定阳性的或阴性的内毒素试验结果。生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂产品和生物发酵透明质酸钠原料所进行的BET试验结果表明该产品通过BET测试。生物发酵透明质酸钠原料和完成的生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂产品都针对具有严格限度的BET进行了测试。该BET测试已经被验证。此外，之前没有在IONICPOLYMERMATRIX(IPM)WOUNDGEL产品上进行对特定微生物或特定微生物的的不存在的微生物测试。在每一批或大量所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂产品上进行的微生物测试包括按照USP<61>(总好氧微生物计数(TAMC)和总的结合的总酵母菌和霉菌计数(TYMC))以及USP<62>(金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，大肠杆菌和沙门氏菌的不存在)的所有测试。所述产品已经通过这些测试。所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的稳定性现在也已经被研究并且该产品表现出可接受的稳定性。先前被用来确定IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel产品中透明质酸钠和对羟基苯甲酸甲酯的试验方法被发现是不明确，不精确或非线性的，因为所述试验方法没有经过确认。经验证的分析试验方法已经被开发出来并应用于所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂中透明质酸含量的确定(参照实施例13和实施例5)并且也用于对羟基苯甲酸甲酯含量的确定(参照实施例14和实施例6)。一项临床的研究显示了所述生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的应用，显示该制剂可以改善患者因糖尿病并发症导致的脚趾切断术的切口闭合(实施例8)。总之，所公开的方法允许制备具有高浓度(即大约1.5％到大约3.5％w/w)的透明质酸钠的透明质酸钠聚合物基质浓缩物。由于透明质酸钠来源从禽类(公鸡鸡冠)到由细菌发酵方法获得的生物发酵来源的改变，相比于已知的IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel，生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的质量和安全性具有显著地改进。具体地说，相对于包括来自禽类来源的天然透明质酸钠组合物，本发明的组合物的稳定性和本发明的组合物的伤口愈合性能是显著地和出人意料地改进的，并降低本发明的组合物的细胞毒性。同样是出人意料地发现药典和/或医药级原材料的使用，进一步改进组合物的稳定性，降低细胞毒性和改进伤口愈合性能。从开发和应用的另外的质量测试(诸如BET和生物负荷测试(USP62)和改进的生物相容性测试(细胞毒性测试))的结果、对于透明质酸钠和防腐剂对羟基苯甲酸甲酯的试验方法的发展和应用，看到改进是明显的。表格2下面概括了本发明的制剂的测试方案，将其与IPMWouldGel的测试方案进行比较。表格2.本发明制剂的测试方案与IPMWouldGel的测试方案的比较的总结在下面的实施例中，呈现了生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的测试结果，由优选级别的原材料和通过本发明的优选方法制造的所述制剂(称为“试验样品”，也被称为“IPMWoundGelBio”)包括透明质酸钠(2.5％w/w)，羟乙基纤维素(1％w/w)，对羟基苯甲酸甲酯(0.2％w/w)，聚乙二醇(3％w/w)和纯净水，USP(近似地93％，w/w)。实施例1：皮肤刺激性测试针对主要的皮肤刺激性，依据ISO10993-10“医疗设备的生物学评定第10部分∶刺激和皮肤致敏性测试”指导方针评估所述试验样品(生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂)。将两份0.5mL的试验样品和对照品(称为盐溶液，即0.9％氯化钠溶液)局部施用在三只兔子中每一只的皮肤上，并在原处保留24小时。在移除单一样品施用后，在第1,24,48和72小时针对红斑和水肿对所述位置进行分级。在用试验样品治疗的动物的皮肤上观察不到红斑和水肿。计算出试验样品的主要刺激指数是0.0。所述试验样品的响应被归为忽略不计。实施例2∶豚鼠最大化致敏性测试在豚鼠最大化测试中，评估所述试验样品的引起延迟的皮肤接触致敏性的潜力。所述研究是基于下述进行的：ISO10993-10的要求，“医疗设备的生物学评定第10部分∶刺激和皮肤致敏性致敏测试”。进行剂量确定来确定用于测试的合适的试验样品浓度。所述试验样品溶液经皮内注射和封闭性贴敷到十只测试豚鼠中。所述对照品同样地注射和封闭性贴敷到五只对照豚鼠中。按照回收周期，所述测试和对照动物接受测试溶液和载体对照品的挑战贴剂。在贴剂移除后24和48小时，对所有位置针对皮肤反应进行评分。所述试验样品溶液显示没有在豚鼠中引起延迟皮肤接触过敏的迹象。认为所述试验样品不是在豚鼠最大化测试中的致敏剂。实施例3∶细胞毒性测试体外细胞毒性测试显示试验样品相较于先前已知的IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel具有较小的细胞溶解区域(即较少细胞毒性)。进行的测试的细节在下面提供：基于ISO10993-5:医疗设备的生物学评价-第5部分：体外细胞毒性的测试评估试验样品来确定细胞毒性的潜力。将放置在过滤器(测试滤片)上的0.1mL的试验样品添加到三个重复孔。将放置在过滤器(滤片对照)上的0.1mL的0.9％氯化钠溶液添加到三个重复孔。将1cm长度部分的高密度聚乙烯添加到三个重复孔作为阴性对照。将1cmx1cm的乳液添加到三个重复孔作为阳性对照。每个放置在直接覆盖亚汇合单层L-929小鼠成纤维细胞的琼脂糖表面上。在37℃℃，5％的CO2下培养24小时后，肉眼和显微镜下检查培养物观察任何反常的细胞形态和细胞溶解。体外细胞毒性试验显示试验样品相较于之前已知的IonicPolymerMatrix(IPM)WoundGel具有较小的细胞溶解区域(即更小的细胞毒性)，如下表所示。实施例4:生物发酵透明质酸钠聚合物基质制剂的稳定性在以各种温度和时间间隔培养之后，研究试验样品的稳定性。方法∶在各种长度的培养周期之后，测定透明质酸钠的浓度。其它的试验参数包括外观检查，对羟基苯甲酸甲酯试验，pH和粘度。结果∶对于IPMWoundGelBio的试验结果的例子在表格#3a中显示。透明质酸钠的所有浓度是以％w/w表示。*在稳定性研究期间已经观察到校准曲线的响应因子增加。这可能由于对于标准的水的吸收。从0值到第六个月所述响应因子已增加到104％(从零到第三个月为103％)。因此所述结果是不准确性偏高的。对于2在重量上(4次注射)的**％RSD为4.25％.所有其它的测试参数都刚好在稳定性检测限内。表格1b提供了与IPMWoundGelBio相关的进一步示例性长期的(18个月)稳定性试验结果。透明质酸钠的浓度表示为原始量的百分比。在标准条件下进行测试(25℃和60％RH)。表格3b总结∶从上面呈现的结果可以断定试验样品在长时间内是稳定的，其通过在40℃和75％RH的加速稳定性试验的结果和长期稳定性测试的结果证实。相反，包括禽类透明质酸钠的对照品(IPMWoundGel)在进行稳定性试验6个月之后失效了。实施例5∶试验样品中的透明质酸钠含量测定的方法验证开发HPLC方法并确认对于试验样品中的透明质酸钠的测定。使用具有UV检测器的HPLC系统。结果和讨论∶在试验样品中的透明质酸钠的平均测定是2.545％w/w和％相对标准偏差是0.32。在1.14％(或114μg/mL)到3.99％(或399μg/mL)范围内，所述试验显示良好的线性，具有大于0.999的相关系数。精确性研究显示对于透明质酸钠的％标示量(Labelclaim)，％相对标准偏差是大约0.481。因此用于测定透明质酸钠含量的HPLC方法(或试验)已经被证实和验证。实施例6∶试验样品中的对羟基苯甲酸甲酯含量测定的方法验证针对在试验样品中的对羟基苯甲酸甲酯含量的测定验证HPLC方法。使用具有UV检测器的HPLC系统。结果和讨论∶获得的对羟基苯甲酸甲酯平均测定是103.3％和％相对标准偏差是0.56。在0.06％到0.18％范围内，对羟基苯甲酸甲酯的试验显示良好的线性，具有的相关系数大于0.999。精确性研究显示对于对羟基苯甲酸甲酯的标示量，％相对标准偏差是大约0.096。因此用于测定对羟基苯甲酸甲酯含量的HPLC方法(或试验)已经被证实和验证。实施例7∶抗菌的有效性试验(AET)抗菌效力测试(AET)测量抗菌性防腐剂的效果，所述防腐剂被添加用来抑制在制造过程期间或在产品使用期间不经意引入的微生物的生长。抗菌有效性试验应该在所有的水性产品中进行，所述产品是可注射的，眼睛的，耳用，鼻饲，口服和局部的。在试验样品中的所述抗菌防腐剂是目标浓度为0.2％w/w的对羟基苯甲酸甲酯。方法∶在试验样品中按照USP<51>药典标准使用所有五种微生物进行AET，五种微生物为大肠杆菌(发酵性革兰氏阴性细菌)，绿脓假单胞菌(非发酵的革兰氏阴性细菌)，金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性细菌)，黑曲霉(霉菌或真菌)和白色念珠菌(酵母)。在三批18个月时间点的长期稳定性研究进行所述抗菌的有效性试验。结果∶试验结果表明对于第2类产品(按照USP,以水性或载体制备的局部使用的产品，非无菌的鼻饲产品和乳液，其包含应用于粘膜的那些)提出的防腐剂系统和浓度满足防腐效率试验要求。具体地说，即使在第18个月，试验样品对于大肠杆菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，黑曲霉和白色念珠菌都是阴性的。此外，即使在第18个月，发现TYMC和TAMC少于10cfu/g。相反，包括禽类透明质酸钠的对照产品(IPMWoundGel)在6个月后微生物测试中失效。总结∶已经证明防腐剂系统在保护试验样品不受微生物生长或不经意引入的微生物的影响是合适和有效的。实施例8∶足趾切断的患者中切口线的闭合研究设计∶IPMWoundGelBio用于足趾切断术后的切口线的愈合。在9个月后，对患有不愈合、足趾糖尿病性溃疡的糖尿病患者进行116次切断术。这些患者中血液供给从没有完美，然而也没有极度减弱。治疗方案在于每天沿着所述切口线应用IPMWoundGelBio薄膜，并且用泡沫敷料覆盖伤口位置。在手术后一周后观察患者，以及2周后再次观察。结果∶结果94个(81％)患者痊愈，在1-2周内切口线具有完全上皮形成。这与在使用IPMWoundGelBio前观察到的典型的4周愈合时间形成对比。此外，由于没有切口线裂开或感染，所以复杂化速度相应地降低。总结∶使用IPMWoundGelBio的综合体验已经是非常积极的。特别显著的是切口线的愈合时间的一致性，已知患者是具有很深基础的终末器官损伤的重病患者。在这些个体中的愈合机制是极度地削弱的且具有一期缝合的切断术经常地伴随手术后并发症。引入IPMWoundGelBio作为术后治疗方案后降低了并发症的比率，照此对持续的家庭护理的需要减少，患者回到工作或日常生活的正常活动也加速了。IPMWoundGelBio的改进的伤口愈合性能可以归因于IPMWoundGelBio的稳定性增加和细胞毒性减少。实施例9:应用于创口的包含透明质酸钠的制剂表格3.优选的包含高浓度透明质酸钠的生物发酵透明质酸钠制剂成分量(％w/w)透明质酸钠2.5羟乙基纤维素1.0聚乙二醇3.0对羟基苯甲酸甲酯0.2水q.s.*总计100·适量上述批次包含透明质酸钠作为润湿剂和基质成型剂，羟乙基纤维素是增稠剂和辅助形成聚合物基质，聚乙二醇是溶剂，对羟基苯甲酸甲酯作为防腐剂和水作为溶剂。进行若干实验和建立最佳pH值范围为5.0到7.0。在室温下(23℃)，建立所述溶液最优的粘度范围在10,000–50,000cps范围之内。发现所述产品是稳定的。表格1中的制剂通过如下进行制备，在合适的容器中添加对羟基苯甲酸甲酯到水中，并以大约400rpm到少于大约2000rpm的速度(“中速”)混合数小时(大约2小时)。确保对羟基苯甲酸甲酯完全溶解。然后以稳流缓慢加入透明质酸钠(具有分子量600,000–800,000道尔顿)到混合物中，在将透明质酸钠装入合适的容器(大约1小时)的同时，随着混合物稠化和旋转保持而从上面定义的中速逐渐地增加搅拌的速度到大约2000rpm-大约3000rpm的速度(“高速”)，。以中速混合数小时(大约2小时)。继续以大约25rpm到少于400rpm(“低速”)长时间(大约8小时)混合直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在混合物中并形成透明似水晶的粘稠溶液。在单独的容器中溶解1％羟乙基纤维素在纯净水中，同时以中速混匀。继续搅拌数小时(大约1到大约2小时)。添加产生的羟乙基纤维素溶液到透明质酸钠溶液中，并以中速混合，继之以低速长时间(大约4小时)混合直到产生均匀的溶液。加入聚乙二醇到混合物中，同时以中速混合。继续以中速混合大约1小时。减速和继续以低速混合数小时(最少大约3小时)。然后将块状凝胶填充在试管或瓶子中，并且帽封。实施例10∶用于局部使用的包含透明质酸钠和泛酸的制剂包含透明质酸钠和泛酸的制剂可以用于治疗破损皮肤和可以用于治疗特应性皮炎。表格4.包含高浓度透明质酸钠和泛酸的生物发酵透明质酸钠制剂。·适量在表格2中的制剂按如下细节制备：首先，在合适的容器中加入对羟基苯甲酸甲酯到水中并以中速混合数小时(大约2小时)。确保对羟基苯甲酸甲酯完全地溶解。然后以稳流缓慢添加透明质酸钠到水中，同时在将透明质酸钠装入合适的容器时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速。以中速混合数小时(大约2小时)。继续以低速长时间(整夜，或大约8小时到大约15小时))混合直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在混合物中，并形成透明似水晶的粘稠溶液。在单独的容器中将1.0％羟乙基纤维素溶解在纯净水，同时以中速混匀。继续搅拌数小时(大约1到大约2小时)。紧接着添加羟乙基纤维素溶液到透明质酸钠溶液中，以中速混合直到产生均匀的溶液。产生的溶液以中速长时间混合(整夜，或大约8小时到大约15小时)直到产生均匀的溶液。添加聚乙二醇到混合物中，同时以中速混合大约1小时。继之添加泛酸和以中速混匀数小时(大约2小时)直到溶解且所述凝胶是均匀的。然后将块状凝胶填充到试管或瓶子中，并且帽封。实施例11∶用于局部使用的包含透明质酸钠和双氯芬酸钠的制剂包含透明质酸钠和双氯芬酸钠的制剂可用于治疗光化性角化病和在受疼痛影响的区域减缓肌肉骨骼痛。这样的区域包括，但不局限于膝，踝关节，脚，背，颈，肘和臀部。表格5.包含高浓度透明质酸钠和双氯芬酸钠的生物发酵透明质酸钠制剂。发现所述制剂是稳定的。·适量在表格3中的制剂按如下制备：首先，在合适的容器中加入对羟基苯甲酸甲酯到水中并以中速混合数小时(大约2小时)。确保对羟基苯甲酸甲酯完全溶解。然后向其中缓慢加入透明质酸钠同时在以约1小时将透明质酸钠装入合适的容器时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速。以中速混合数小时(大约2小时)。继续以低速长时间(大约8小时)混合直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在水中，并形成透明似水晶的粘稠溶液。所述凝胶应该是均匀的。在单独的容器中溶解0.7％羟乙基纤维素于纯净水中，同时以低到中速搅拌并混匀。继续搅拌数小时(大约1到大约2小时)。添加产生的羟乙基纤维素溶液到透明质酸钠溶液中，并以中速长时间混合(大约10到大约15小时)直到产生均匀的溶液。添加甲氧基聚乙二醇(MPEG)10％到所述混合物中。当该步骤正在进行时，对于所述混合物，搅拌速度应该增加到高速。应使得由此形成的所得混合物以中速混合数小时(从大约3到大约4小时)。使用安全技术，应该缓慢地添加3％双氯芬酸钠到混合物中。出于添加双氯芬酸(diclofenac)的目的，混合速度应再次增加到高速，并且添加全部量的双氯芬酸应该在短时期(大约15分钟)内完成。在进一步以中速长时间(大约15到大约20小时)混合后，最终的混合物是具有轻微淡绿色并澄清的。最终产品应该使用无菌技术转移到大容量存储容器，然后填充块状凝胶到试管或瓶子，并且帽封。实施例12∶用于治疗阴道干燥的包含透明质酸钠、使用烟酸和甘油的制剂表格6.包含高浓度透明质酸钠、烟酸和甘油的生物发酵透明质酸钠制剂。成分量(％w/w)烟酸0.85甘油3透明质酸钠1.5羟乙基纤维素0.7聚乙二醇3对羟基苯甲酸甲酯0.2水q.s.*总计100·适量**应该使用甘油USP[按照USP在甘油中发现的二乙二醇和乙二醇每种不超过0.10％]表格4中烟酸(0.85％)和甘油(3％)配方的透皮制剂是以下列方式制备。首先，在合适的容器中加入对羟基苯甲酸甲酯到水中，并以中速混合数小时(大约2小时)。确保对羟基苯甲酸甲酯完全地溶解。然后以稳流缓慢加入透明质酸钠到水中，同时在以约1小时将透明质酸钠装入合适的容器时，随着混合物稠化和旋转保持而从中速逐渐地增加搅拌速度到高速。以中速混合数小时(大约2小时)。继续以低速长时间(整夜，或大约8小时到大约15小时)混合直到所有的透明质酸钠聚合物溶解在水中，并形成透明似水晶的粘稠溶液。所述凝胶应该是均匀的。紧接着，添加0.7％HEC到纯净水中的同时以低到中速搅拌并且混匀来制备溶液。继续搅拌数小时(大约1到大约2小时)。然后将产生的溶液添加到上面形成的透明质酸钠的混合物中，并以中速长时间(整夜，或大约8小时到大约15小时)混合来形成透明质酸钠/HEC聚合物基质。添加PEG到所得混合物中，并以中速搅拌数小时(大约2.5小时)。然后，添加烟酸和甘油到HA/HEC聚合物基质。以低速搅拌混合物数小时(大约2小时)。块状凝胶被存储用于填充，或者将0.5到0.75ml所得的凝胶装载入注射器，并且保存在冷藏库中。实施例13∶用于测定透明质酸钠的试验方法开发用于测定在试验样品(透明质酸钠生物发酵伤口凝胶制剂)中的透明质酸钠的HPLC试验方法。所述试验基于具有尺寸排阻分析柱和205nm的UV检测的HPLC分析。实施例14∶用于测定对羟基苯甲酸甲酯的试验方法开发用于测定试验样品(透明质酸钠生物发酵伤口凝胶制剂)中对羟基苯甲酸甲酯的HPLC试验方法。所述试验基于具有反相c8分析柱和254nmUV检测的HPLC分析。虽然已经描述了本发明的具体实施例，但是在所附权利要求的范围内对实施例进行变更和修改对于本领域技术人员而言是显而易见的。实施例15∶3％双氯芬酸IPM基质2.3％透明质酸钠凝胶的药代动力学和生物利用度进行开放标记，单一中心，单剂量，单剂量，一种治疗，一个周期，药代动力学和生物利用度研究。向六个年龄为18-45的正常，健康的，不吸烟男性施用2.3％禽类透明质酸钠制备的3％双氯芬酸IPM基质凝胶，其24小时敷用一次。应用总共4cc到每个受试者的前部右膝。评定单剂量应用的药代动力学和生物利用度。在施用后24小时内采集每个受试者的总共18个血样和8个尿样。评定每个样品双氯芬酸的浓度。双氯芬酸血浆和尿浓度呈现在表格7和8中。在所有受试者的样品中发现有双氯芬酸。各受试者的浓度不同，但是对于双氯芬酸是正常的。表格7.所测量的在来自使用3％双氯芬酸凝胶的患者的样品中的双氯芬酸血浆浓度(ng/mL)*BLQ＝低于定量下限(0.02ng/ml)表格8.所测量的在来自使用3％双氯芬酸凝胶的患者的样品中的双氯芬酸尿浓度(ng/mL)*BLQ＝低于定量下限(0.01ng/ml)实施例16∶3％双氯芬酸IPM2.3％透明质酸钠基质凝胶通过局部施用治疗肌肉骨骼疼痛病症的疗效，主要地包括减轻疼痛和肌肉痉挛。在疼痛门诊，询问23名具有肌肉骨骼疼痛的患者自愿测试由禽类透明质酸钠制成的3％双氯芬酸IPM2.3％透明质酸钠凝胶。将所述凝胶一天四次大量地施用在肌肉骨骼问题引起疼痛的皮肤区域上。要求患者评估34项标准以估计他们的肌肉骨骼疼痛或在直观标度模拟尺上的僵硬度，在初诊分为0-10级。17名患者仅被评估了一项标准，但是5名患者被评定了两项如下标准：形成总共34个标准的左右踝关节、颈疼痛和僵直，头痛和颈疼痛和肩颈疼痛。然后给予他们一定量的双氯芬酸凝胶来应用于疼痛的区域并要求在9分表(ninepointscale)中对疼痛的改变评级，从非常差到没有变化到非常好。然后进一步给予患者一周的凝胶供应，且他们在第二周治疗的末尾作出第二次自我评定。在一周治疗后，23名患者的27个标准中的8个标准报告没有变化，19个报告在有些好转和没有疼痛之间的改善，且没有人具有加重的疼痛。改进组由十个，一个，六个和两个患者组成，分别是某些好转，好转，大幅好转和没有疼痛。没有患者具有加重的疼痛。在两周治疗之后，其基本上与第一周结果相似，除了一个患者的标准报告更差，六名显示无变化，且二十个患者的标准报告其具有感觉更好的改善。一周和两周结果的结合对于他们每个人产生了类似的结果。对每个患者使用仅具有一个标准的直观模拟标度尺，在双氯芬酸之后平均数下降，且当它停止后上升。总之，双氯芬酸凝胶是用于透皮减轻关节和肌肉骨骼疼痛的有效制剂。其具有良好的患者可接受性，更易施用，不引起严重的副作用，和避免通常伴随口服使用NSAID的胃肠不适。相较于实施例15和16使用的禽类来源的透明质酸盐生产的制剂，根据本发明的细菌来源的透明质酸钠生产的离子聚合物基质凝胶的上述临床表现具有预期的改善，这是因为本发明的制剂具有降低的细胞毒性效果和改进的稳定性。当前第1页1 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