铁皮石斛多糖在治疗便秘中的应用的制作方法

本发明属于中药应用的技术领域，涉及石斛多糖的医药新应用，具体涉及铁皮石斛多糖在治疗便秘中的应用。

背景技术：

便秘是一种临床症状表现，主要是指粪便干结、排便困难或不尽感以及排便次数减少等。约有占世界总人口的2%到28%的人患有便秘，且女性多于男性，老年多于青壮年。作为一种影响广泛的疾病，对于便秘的预防、治疗和临床研究耗费了巨大的时间和金钱；此外，便秘还会给患者、医疗保健机构和健康系统的维持带来巨大的经济负担。此外，长期便秘会给患者带来巨大的痛苦，明显降低患者的生活质量。对于便秘发病机制尚不明确，中医认为其病机主要有四种：肠胃积热、气机郁滞、气血阴津亏虚、阴寒凝滞；西医认为便秘的发生与胃肠道运动能力的不足或障碍，以及肠道神经及神经递质的异常密切相关。

目前针对便秘治疗的方式有：调整饮食，增加粗纤维的摄入、增加运动以及心理治疗等，严重者可采用药物治疗。常用的药物分为以下几种：透性泻剂（如硫酸镁）、激性泻剂（如中药大黄和西药比沙可啶）、滑性泻剂（如液体石蜡、甘油及开塞露）及积性泻剂（如含纤维素和欧车前的制剂）。但以上治疗方案都有服用后饱胀感，腹部肿痛，或治疗效果不理想等缺陷。

铁皮石斛为兰科植物石斛属铁皮石斛（Dendrobium officinaie Kimuraet Migo.）的干燥茎。具有“生津养胃，滋阴清热，润肺益肾，明目强腰”之功效。铁皮石斛的主要有效成分为石斛多糖和生物碱，此外还含有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等活性成分。铁皮石斛多糖多采用水提醇沉的方法获得，近年来酶法提取以及超声波辅助提取也逐渐应用于多糖的制备，并获得较高的产率。通过对铁皮石斛多糖的化学成分分析可以得出，其主要由 D-甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖(摩尔比为3.28:31.83:1.51:1.00) 组成的杂多糖。近年来，铁皮石斛多糖的研究多集中于其抗肿瘤及免疫调节活性，现已证明铁皮石斛多糖对于恶性肿瘤、神经母瘤、肉瘤及离体肝癌肉瘤都有良好的抑制效果，以及其提高身体免疫力的生物活性。

铁皮石斛已入选为国家规定的保健性食品，其日常应用多以养生为主，而现有技术均无公开铁皮石斛多糖在治疗便秘的应用。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供石斛多糖在治疗便秘的新用途。

具体地，本发明提供了铁皮石斛多糖在制备治疗便秘的药物、保健品或功能性食品中的用途。

在上述用途中，铁皮石斛多糖在制备治疗便秘的药物、保健品或功能性食品中的用途包括：铁皮石斛多糖在制备治疗由于疾病、药物或饮食不节因素所致的各种急性、慢性便秘的药物、保健品或功能性食品中的用途。

在上述用途中，铁皮石斛多糖中的多糖含量在50%以上。

在上述用途中，铁皮石斛多糖对人的有效治疗剂量为29~114mg/kg。

在上述用途中，治疗便秘的药物、保健品的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂或口服液体制剂。

在上述用途中，治疗便秘的药物或保健品的使用方法为口服。

本发明以地芬诺酯和失水作为诱因，以ICR小鼠为实验动物进行便秘模型的制备。在此模型基础上，灌胃给予铁皮石斛多糖（UDO）对便秘进行治疗，胃肠道蠕动力及排便情况，探讨铁皮石斛多糖对地芬诺酯和失水诱导的便秘模型小鼠的治疗作用。为了进一步研究铁皮石斛多糖对治疗便秘的作用机理，对小鼠血清中胃泌素（Gas），胃动素（MTL），P物质（SP），乙酰胆碱酯酶（AChE），以及生长抑素（SS）胃肠道常见激素进行了测定。结果表明，铁皮石斛多糖能有效改善地芬诺酯和失水引起的便秘，通过促进胃肠道蠕动，调节P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素以及生长抑素等激素水平、增加粪便含水量等途径，达到比其它石斛多糖更优的治疗便秘的效果。

本发明研究结果显示铁皮石斛多糖是铁皮石斛治疗便秘的主要有效成分，石斛多糖具有润肠通便，缓解便秘的功能，且具有效剂量低、给药次数少及易于提取制备等优点。预示着铁皮石斛多糖可作为一种应用于临床治疗便秘的新颖药物、保健品或功能性食品。

以下实验结果说明了铁皮石斛多糖的新药效，表明了石斛多糖对便秘具有良好的治疗效果。

附图说明

图1 地芬诺酯致便秘小鼠的胃肠道推进率。

图2 地芬诺酯致便秘小鼠的排便状况（A：首颗粪便排出时间；B：排便数量；C：排便湿重；D：粪便含水量）。

图3 地芬诺酯致便秘小鼠血清中胃泌素、胃动素、P物质及乙酰胆碱酯酶的含量（A：胃泌素；B：胃动素；C：P物质；D：乙酰胆碱酯酶）。

图4 地芬诺酯致便秘小鼠血清中生长抑制素的含量。

图5 失水致便秘小鼠的胃肠道推进率。

图6 失水致便秘小鼠的排便状况（A：首颗粪便排出时间；B：排便数量；C：排便湿重；D：粪便含水量）。

图7 失水致便秘小鼠血清中胃泌素、胃动素、P物质及乙酰胆碱酯酶的含量。

图8 失水致便秘小鼠血清中生长抑制素的含量。

以上各图中符号表示为，##：模型组与正常组相比，具有显著性差异；**：给药组与模型组相比，具有显著性差异；△△：给药组与阳性组相比，具有显著性差异。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但这些实施例并不限制本发明的保护范围。

实施例1：铁皮石斛多糖对地芬诺酯致便秘小鼠的治疗作用。

具体实验方法如下。

1. 取SPF级ICR小鼠100只，雌雄各半，体重18~22g，灌胃地芬诺酯（50 mg/kg）30 min后，随机分成模型组，阳性药组，石斛多糖（提取自铁皮石斛，含量在52%以上）低、中、高剂量组；另取20只正常ICR小鼠作为正常组；总共6组，每组20只（雌雄各半），并记录各组小鼠初始体重。

2. 药物的前期准备：生理盐水、溴吡斯的明、铁皮石斛多糖均加入5%印度墨汁进行染色。

3. 造模结束后，正常组与模型组灌胃给予生理盐水（0.1 ml/10g），阳性药组灌胃给予溴吡斯的明（40mg/kg），多糖低、中、高剂量组分别灌胃给予铁皮石斛多糖29、57、114 mg/kg。

4. 便秘小鼠胃肠道推进率的测定：从6个组中各取10只小鼠，雌雄各半，各组小鼠灌胃给药后，禁食不禁水30min，立即眼球取血取上清备用；小鼠取血后脱臼处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。墨汁推进率按照以下公式计算：墨汁推进率（胃肠推进率）＝（墨汁推进长度／小肠总长度）×100%。

5.便秘小鼠排状况的评估:从6组中剩余10只小鼠，雌雄各半，各组小鼠灌胃给药后，立即转移至垫有滤纸的代谢笼中，禁食不禁水，观察并记录6 h内每只小鼠的排出首粒黑便时间，排便颗粒数，粪便重量；观察结束后，测定粪便干重(110 ℃干燥24 h后的重量)。粪便含水量按照以下公式计算: 粪便含水量＝((粪便湿重－粪便干重)／粪便湿重)×100%。

6.便秘小鼠血清中胃肠道激素的含量测定:取肠推进试验中各组所得上清，对P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素以及生长抑素的含量进行测定。

7.实验数据处理：各组实验数据均用均数±标准差(mean±SD)表示, 单因素方差分析。P<0.05表示显示两组差异有统计学意义。

实验结果可见表1、表2、图1－图4，结果分析表明正常组与模型组比较地芬诺酯可以显著抑制小鼠的胃肠道蠕动力，并延长排便时间，抑制排便（数量、重量）以及降低粪便的含水量（P< 0.05）；阳性药溴吡斯的明和三个剂量的铁皮石斛多糖均可以明显改善地芬诺酯所致的便秘状况，显著提高便秘小鼠的胃肠道蠕动力，并缩短排便时间，增加排便，增加粪便含水量（P< 0.05）。此外，相比较于正常组，模型组中促胃肠道运动的P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素的分泌显著降低，抑制胃肠道运动的生长抑制素的分泌显著增加（P< 0.05）；阳性药溴吡斯的明和三种剂量的铁皮石斛多糖显著增加促胃肠道运动的P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素的分泌，并明显降低抑制胃肠道运动的生长抑制素的分泌（P< 0.05）。

表1 铁皮石斛多糖对地芬诺酯致便秘小鼠的治疗作用。

表2 血清中胃动素、胃泌素、P物质、乙酰胆碱酯酶及生长抑制素的含量。

实施例2：铁皮石斛多糖对失水致便秘小鼠的治疗作用。

具体实验方法如下。

1. 取SPF级ICR小鼠100只，雌雄各半，体重18~22g，禁水不禁食4天后，体重无差别的便秘小鼠被随机分成模型组，阳性药组，石斛多糖（提取自铁皮石斛，含量在52%以上）低、中、高剂量组；另取20只正常ICR小鼠作为正常组；总共6组，每组20只（雌雄各半），并记录各组小鼠初始体重。

2. 药物的前期准备：生理盐水、溴吡斯的明、铁皮石斛多糖均加入5%印度墨汁进行染色。

3. 造模结束后，正常组与模型组灌胃给予生理盐水（0.1 ml/10g），阳性药组灌胃给予溴吡斯的明（40mg/kg），多糖低、中、高剂量组分别灌胃给予铁皮石斛多糖29，57，114 mg/kg。

4.便秘小鼠胃肠道推进率的测定：从6组中各取10只小鼠，雌雄各半，各组小鼠灌胃给药后，禁水禁食30min，立即眼球取血取上清备用；小鼠取血后脱臼处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。墨汁推进率按照以下公式计算：墨汁推进率（胃肠推进率）＝（墨汁推进长度／小肠总长度）×100%。

5. 便秘小鼠排状况的测定:从6组中剩余10只小鼠，雌雄各半，各组小鼠灌胃给药后，立即转移至垫有滤纸的代谢笼中，禁水禁食，观察并记录6 h内每只小鼠的排出首粒黑便时间，排便颗粒数，粪便便重量；观察结束后，测定粪便干重(110 ℃干燥24 h后的重量)。粪便含水量按照以下公式计算: 粪便含水量＝((粪便湿重－粪便干重)／粪便湿重)×100%。

6.便秘小鼠血清中胃肠道激素的含量测定:肠推进试验中各组所得上清，对P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素以及生长抑素的含量进行测定。

7.实验数据处理：各组实验数据均用均数±标准差(mean±SD)表示, 单因素方差分析。P< 0.05表示显示两组差异有统计学意义。

实验结果见表3、表4，附图5－图8，结果分析显示正常组与模型组比较表明地芬诺酯可以显著抑制小鼠的胃肠道蠕动力，并延长排便时间，抑制排便（数量、重量）以及降低粪便的含水量（P< 0.05）；阳性药溴吡斯的明和三种的铁皮石斛多糖均可以明显改善长期失水导致的便秘状况，明显提高便秘小鼠的胃肠道蠕动力，并缩短排便时间，增加排便，增加粪便含水量（P< 0.05）。此外，相比较于正常组，模型组中促胃肠道运动的P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素的分泌显著降低，抑制胃肠道运动的生长抑制素的分泌显著增加（P< 0.05）；阳性药溴吡斯的明和三种剂量的铁皮石斛多糖显著增加促胃肠道运动的P物质，乙酰胆碱酯酶，胃动素，胃泌素的分泌，并明显降低抑制胃肠道运动的生长抑制素的分泌（P< 0.05）。

表3铁皮石斛多糖对失水致便秘小鼠的治疗作用。

表4 血清中胃动素、胃泌素、P物质、乙酰胆碱酯酶及生长抑制素的含量。

实施例3：将铁皮石斛多糖制备成治疗便秘的药物、保健品。

取干燥的铁皮石斛，按常规提取方法提取石斛多糖，将得到的石斛多糖加入相应的辅料制备成治疗便秘的片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂或口服液体制剂。

实施例4：将铁皮石斛多糖制备成治疗便秘的功能性食品。

取干燥的铁皮石斛，按常规提取方法提取石斛多糖，将得到的石斛多糖加入相应的食用材料制备成常规治疗便秘的功能性食品如饼干、饮料等。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式，本领域技术人员在本发明基础上所做的任何非实质性的均等变化与修饰，均应属本发明所要求保护的范围。