对FAP‑α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法及其应用与流程

文档序号:12343595阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统,其特征在于,阿霉素通过二硫键作为连接臂与聚酰胺胺相连形成还原敏感型纳米粒,然后将此纳米粒通过对FAP-α敏感的多肽连接臂相连形成对FAP-α、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统,所述的二硫键为3,3’-二硫代二丙酸或2,2’-二硫代二乙酸,多肽连接臂为苏氨酸-丝氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺或AC-天冬氨酸-丙氨酸-苏氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸或丙氨酸-丝氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺或苏氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸。

2.权利要求1所述的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)合成还原敏感型的纳米粒:

①称取作为连接臂的二硫键3,3’-二硫代二丙酸或2,2’-二硫代二乙酸10mg-2g,分别加入2.0~15.0ml乙酰氯,置于烧瓶中,在65℃油浴下回流2~6h,将反应物进行浓缩后加入3~4倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐或2,2’-二硫代二乙酸酐;

②称取0.01~1.0mmol阿霉素、0.01~1.0mmol4-二甲氨基吡啶和0.01~1.0mmol步骤①中制得的酸酐分别溶解于0.5~15.0ml反应溶剂中,将阿霉素和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入20~200μl三乙胺,向上述溶液中加入酸酐溶液,在25~45℃下避光反应8~24h,反应停止后加入3~4倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③称取羧基化的阿霉素20~100mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺100~250mg和羟基琥珀酰亚胺60~180mg分别溶解于5~25mL反应溶剂中,先将羧基化的阿霉素和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液混合,反应0.5~3h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液,反应0.5~4h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺10~150mg溶解于3~12mL反应溶剂中,加10~200μl三乙胺,再将活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在20~45℃下氮气保护反应6~26h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每3~6小时换一次水,冷冻干燥,得还原敏感型的纳米粒;

所述的反应溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺的一种或两种的混合物;

(2)合成对FAP-α、还原环境双敏感的纳米粒:

称取作为连接臂的多肽链2~100mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺 20~200mg和羟基琥珀酰亚胺 15~180mg分别溶解于2~20mL反应溶剂中,然后将多肽连接臂和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液混合,反应0.5~2.5h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液,反应0.5~3.5h,得活化的多肽连接臂,取负载了阿霉素的还原敏感型的纳米粒10~200mg溶解于5~25mL反应溶剂中,再将活化的多肽连接臂和上述纳米粒溶液混合,在20~40℃下氮气保护8~25h,反应结束后用截留分子量3500~8000的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每3~6h换一次水,冷冻干燥,得FAP-α、还原环境双敏感的纳米粒;即对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统;

所述的反应溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺的一种或两种的混合物。

3.根据权利要求2所述的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)合成还原敏感型的纳米粒:

①称取作为连接臂的2,2’-二硫代二乙酸109mg和乙酰氯3ml置于烧瓶中,在65℃油浴下回流2h,将反应物进行浓缩后加入3倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得2,2’-二硫代二乙酸酐;

②称取0.3mmol阿霉素、0.3mmol4-二甲氨基吡啶和0.3mmol2,2’-二硫代二乙酸酐分别溶解于5mlN,N-二甲基甲酰胺中;将阿霉素和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入20μl三乙胺,向上述溶液中加入2,2’-二硫代二乙酸酐溶液,在35℃下避光反应8h,反应停止后加入3倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③称取羧基化的阿霉素(羧基化的阿霉素)20mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺100mg和羟基琥珀酰亚胺80mg分别溶解于6mL二甲基亚砜中,然后将羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应0.5h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应1h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺30mg溶解于3mL 二甲基亚砜中,加20μl三乙胺,再将活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在25℃下避光反应8h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每4小时换一次水,冷冻干燥,得还原敏感型的纳米粒;

(2)合成对FAP-α、还原环境双敏感的纳米粒:

称取作为连接臂的多肽链苏氨酸-丝氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺5mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺 30mg和羟基琥珀酰亚胺 25mg分别溶解于4mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后将多肽连接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应0.5h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应1h,得活化的多肽连接臂,取还原敏感型的纳米粒30mg溶解于7mL N,N-二甲基甲酰胺中,再将活化的多肽连接臂和上述纳米粒溶液混合,在20℃下避光反应12h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每4小时换一次水,冷冻干燥,得FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统。

4.根据权利要求2所述的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)合成还原敏感型的纳米粒:

①称取作为连接臂的3,3’-二硫代二丙酸252mg和乙酰氯6.0ml置于烧瓶中,在65℃油浴下回流4h,将反应物进行浓缩后加入3.5倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐;

②称取0.6mmol阿霉素、0.6mmol4-二甲氨基吡啶和0.6mmol3,3’-二硫代二丙酸酐分别溶解于9mlN,N-二甲基甲酰胺中;然后将阿霉素溶液和4-二甲氨基吡啶溶液混合,再加入60μl三乙胺溶液,最后加入3,3’-二硫代二丙酸酐溶液,在40℃下避光反应12h,反应停止后加入3.5倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③称取羧基化的阿霉素40mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺180mg和羟基琥珀酰亚胺120mg分别溶解于12mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后将羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应1h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应2h,得活化的羧基化阿霉素;取聚酰胺胺60mg溶解于6mL N,N-二甲基甲酰胺中,加60μl三乙胺,再将活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在30℃下氮气保护反应12h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每5小时换一次水,冷冻干燥,得还原敏感型的纳米粒;

(2)合成对FAP-α、还原环境双敏感的纳米粒:

称取作为连接臂的多肽链AC-天冬氨酸-丙氨酸-苏氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸20mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺 100mg和羟基琥珀酰亚胺 80mg分别溶解于6mL二甲基亚砜中,然后将多肽连接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应1h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应2h,得活化的多肽连接臂;取还原敏感型的纳米粒100mg溶解于15mL 二甲基亚砜中,再将活化的多肽连接臂和上述纳米粒溶液混合,在25℃下反应24h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每5小时换一次水,冷冻干燥,得FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统。

5.根据权利要求1所述的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)合成还原敏感型的纳米粒:

①称取作为连接臂的3,3’-二硫代二丙酸420mg和乙酰氯9ml置于烧瓶中,在65℃油浴下回流5h,将反应物进行浓缩后加入4倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得3,3’-二硫代二丙酸酐;

②称取0.9mmol阿霉素、0.9mmol4-二甲氨基吡啶和0.9mmol3,3’-二硫代二丙酸酐分别溶解于14ml二甲基亚砜中;将阿霉素溶液和4-二甲氨基吡啶溶液混合,加入80μl三乙胺,向上述溶液中加入3,3’-二硫代二丙酸酐溶液,在45℃下避光反应24h,反应停止后加入4倍预冷的乙醚,冷却析晶,真空干燥,得羧基化的阿霉素;

③称取羧基化的阿霉素70mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺250mg和羟基琥珀酰亚胺180mg分别溶解于18mL二甲基亚砜中,然后将羧基化的阿霉素溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应2h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应1.5h,得活化的羧基化阿霉素,取聚酰胺胺80mg溶解于9mL 二甲基亚砜中,加80μl三乙胺,再将活化的羧基化阿霉素和聚酰胺胺溶液混合,在35℃下避光反应24h,反应结束后用截留分子量3500的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每6小时换一次水,冷冻干燥,得还原敏感型的纳米粒;

(2)合成对FAP-α、还原环境双敏感的纳米粒:

称取作为连接臂的多肽链苏氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸30mg、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺 180mg和羟基琥珀酰亚胺 150mg分别溶解于9mL N,N-二甲基甲酰胺中,然后将多肽连接臂溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液反应1.5h,再加入羟基琥珀酰亚胺溶液反应3h,得活化的多肽连接臂,取还原敏感型的纳米粒160mg溶解于20mL N,N-二甲基甲酰胺中,再将活化的多肽连接臂和上述纳米粒溶液混合,在30℃下避光反应24h,反应结束后用截留分子量7000的透析袋透析2天,透析液为超纯水,每6小时换一次水,冷冻干燥,得FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统。

6.权利要求1所述的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.权利要求2-5任一项所述的制备方法制备的对FAP-α酶、还原环境双敏感的粒径收缩型的肿瘤渗透性纳米系统在制备抗肿瘤药物中的应用。

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