决明子活性成分集成提取工艺的制作方法

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种决明子活性成分集成提取工艺。

背景技术：

决明子(Catsia tora Linn)来源于豆科(Leguminosaesp)植物决明(Cassia obtusifolia L.)和小决明(Cassia lora L.)的干燥成熟种子(国家药典2010)；始载于《神农本草经》，列为120种上品药之一，为临床常用中药，其味甘、苦、咸，性微寒，归肝、大肠经，具有清肝明目，润肠通便作用。现代研究证明决明子具有降血压、降血脂、保肝及抑菌等活性，同时又可作为食品和保健饮料的良好原料，是国家卫生部门公布的药食同源的中药品种之一(孔祥峰等，2013；项昭保等，2013。)。

林丽萍等(2011)研究采用超声波辅助的方法，提取溶剂为80％乙醇，料液比1∶30，超声波功率90W，提取时间25min，在此方法下，决明子蒽醌的提取率为68.33％，比传统热回流提取工艺的提取率52.04％高16％。

吴远远等(2011)研究采用超声辅助的方法，提取溶剂为石油醚，超声功率100W，提取时间30min，在此方法下，亚油酸甲脂、油酸甲脂的提取率占脂肪酸的质量分数为73.07％，亚油酸的提取率占脂肪酸的质量分数为44.5％。此工艺提取成本低，出油率高，不饱和脂肪酸的提取率要高于传统回流方法。

张云峰等(2009)研究利用高效逆流色谱分离方法分离了决明子乙酸乙酯萃取物，同时得到5种单体化合物，分别为橙钝叶决明素、甲基钝叶决明素、钝叶决明素、大黄素甲醚和大黄素，且纯度分别达到97.4％、93.0％、94.8％、96.3％和95.5％。

韩爱霞等(2009)研究了利用果胶酶酶解预处理与乙醇浸提结合的提取方法提取了决明子总黄酮。结果最佳提取工艺为酶解温度30℃、pH3.0，酶用量2mg，酶解时间0.5h，70％乙醇用量35mL，此条件下总黄酮提取率达2.03％。

银建中等(2008)研究利用超临界二氧化碳萃取工艺，压力25MPa，温度323K，萃取时间3～4h，颗粒度18～20目，流量0.21m³/h，该方法的出油率可达3.54％，经鉴定，所得产物中的主要成份有大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、决明子苷B、决明蒽酮等。

朱彩燕等(2008)研究对大黄素的提取、分离和纯化进行了实验，用稀硫酸溶液将蒽醌苷水解成苷元，再用热氯仿提取苷元，然后用pH8.0缓冲液除去大黄酸，再0.2％氢氧化钠反复萃取，提取大黄素，然后用层析柱法分离纯化大黄素，然后经丙酮多次结晶可得纯度达98.1％大黄素。

陈赛卫等(2010)研究优化了大黄酚的提取方法，运用正交实验进行优选，用HPLC测定大黄酚含量。结果最佳工艺为75％乙醇回流提取2次，每次10倍量溶剂，提取1h，此方法大黄酚的提取率最高且稳定性好。

刘伟民等(2009)研究比较了决明子总蒽醌的水提和醇提工艺的异同点，最终确定了提取决明子总蒽醌的最佳工艺为8倍量的50％乙醇在80℃提取2h，提取2次，该工艺条件稳定，总黄酮提取率较高且生产成本适中，可适用于生产实际。

王涛等(2014)通过对决明子多糖的3种提取方法进行对比，超声波辅助浸提法收率最高，达4.9％，其最佳提取条件为：料液比1∶40，提取温度为100℃，提取时间为3h，提取次数为3次。在最佳条件下，决明子多糖含量为5.88％。

马潜等(2014)研究表明，基于氨基酸比值系数法，对决明子营养价值进行了分析，结果表明决明子的营养价值高于大豆和紫花苜蓿，与南瓜接近略低于鸡蛋。决明子蛋白的最佳提取工艺条件为：料液比为1∶50，提取溶剂为50mmol/L、pH8.0的KH₂PO₄-NaOH缓冲液，浸泡时间为12h，在此条件下决明子蛋白的提取率为93.3％。

李红艳等(2008)研究决明子蛋白最佳提取工艺：提取溶剂为KH₂PO₄-NaOH缓冲液，浓度为50mmol/L、pH8.0，固液比为1∶50，提取12h，决明子粗蛋白的提取率为94.2％，蛋白含量为93％，体外消化率为97.6％。

王小华等(2008)研究了决明子黄酮含量为1.13％的最佳提取条件，浸提溶剂为75％乙醇，浸提温度为80℃，料液比为1∶30，浸提时间为3h，在此条件下决明子黄酮类化合物的提取率可达96.8％。

李可意等(2015)研究了从决明子中提取橙黄决明素的最佳提取工艺，乙醇浓度95％，料液比为1∶6，回流提取2次，每次1h，可获得最佳提取效果。

张广新等(2008)研究了决明子大黄酚的提取工艺，最佳工艺参数为使用决明子粗粉，提取溶剂为95％乙醇，料液比为1∶4，提取2次，每次1h。

韩立强等(2007)研究了不同提取方法对决明子蒽醌类成分提取率及抗氧化活性的影响。结果表明，在对游离蒽醌的测定中以索氏提取法最高(0.16％)，与其他方法相比差异显著(P＜0.05)；在对总蒽醌的测定中，提取率为超声提取(0.63％)＞微波提取(0.56％)＞回流提取(0.49％)＞索氏提取(0.47％)；抗氧化活性测定发现，以回流提取的抗氧化能力最强。

综合上述文献研究，每一位学者只能对决明子中一种或几种活性成分进行提取研究，而没有对决明子中所有活性成分进行集成提取研究，因此对决明子资源造成一定浪费。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种工艺简单，设备投资少，使决明子中生物活性成分全部得以提取，适合决明子深加工企业应用的决明子活性成分集成提取工艺。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：一种决明子活性成分集成提取工艺，它的工艺过程为：

步骤(a)、将决明子粉碎，加乙醇回流提取、分离，回收乙醇，干燥得大黄酚和橙黄决明素；

步骤(b)、步骤(a)中分离的渣加纯化水，加酶酶解，再加乙醇提取、分离，回收乙醇，干燥得决明子总黄酮和大黄酚；

步骤(c)、步骤(b)中分离的渣，加纯化水提取、分离，液相经浓缩、干燥得决明子多糖；

步骤(d)、步骤(c)中分离的渣，加纯化水，调pH和温度提取决明子蛋白，调整温度、pH值后加复合蛋白酶酶解、灭酶、分离；酶解液精制后浓缩、干燥，得决明子蛋白肽。

作为本发明的进一步改进，所述的步骤(a)中决明子粉碎，过20～80目筛；加80～100％乙醇，加量为决明子粉料的6～15倍；回流提取2～4次，每次提取时间1～3h，分离得乙醇提取液和固相；回收乙醇，得浸膏状物，真空干燥得粉状物，含大黄酚和橙黄决明素。

作为本发明的进一步改进，所述的步骤(b)的工艺过程为：将步骤(a)中的固相按1∶4～1∶10加纯化水，搅拌均匀；将料液加热至35～55℃；调整料pH4.0～6.0；加果胶酶0.5～2.5％，纤维素酶0.5～2.0％；搅拌酶解1～4h；加95％乙醇至料液含醇量40～70％，70～90℃回流提取2～3次，每次1～3h，分离得乙醇提取液和固相；回收乙醇提取液中的乙醇，得浸膏状，真空干燥得粉状提取物，主要含总黄酮和大黄酚。

作为本发明的进一步改进，所述的步骤(c)的工艺过程为：将步骤(b)中的固相按1∶6～1∶12加纯化水，70～100℃回流提取2～3次，每次1～3h，分离得乙醇提取液和固相，合并水提取液，将水提取液蒸发浓缩、干燥，得含决明子多糖的粉。

作为本发明的进一步改进，所述的步骤(d)的工艺过程为：将步骤(c)中的固相按1∶6～1∶10加纯化水，搅拌均匀；将料液加热至70～95℃，调料液pH8.0～10.0，搅拌提取15～120min；将料液温度降至40～60℃，调整料液pH7.5～9.0，加复合蛋白酶1.0～5.0％(蛋白总量)，搅拌酶解3～6h，调整料液pH5.0～7.0；将料液加热至70～90℃、15～30min灭酶，分离，得液相和固相；将液相加适量活性炭脱色精制，脱碳得脱碳液；将脱碳液精滤后减压浓缩得浓缩液；将浓缩液干燥(喷雾干燥或冷冻干燥)得决明子蛋白低聚肽。

作为本发明的进一步改进，所述的复合蛋白酶的质量比配方组成为：ASI.39850～90％，木瓜蛋白酶20～60％，风味酶5～30％。

采用上述技术方案后，本发明具有以下有益效果：

工艺简单，设备投资少，使决明子中生物活性成分全部得以提取，适合决明子深加工企业应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明所提供的实施例的工艺流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

请参阅图1，本具体实施方式采用以下技术方案：一种决明子活性成分集成提取工艺，它的工艺过程为：

1、将决明子粉碎过40目筛；

2、称取决明子粉100g，加8倍量95％乙醇(即800mL)；

3、在水浴上回流提取3次，每次2h，分离将液相乙醇提取液和固相渣；

4、回收乙醇，得浸膏状物，真空干燥或冷冻干燥得粉状提取物，主要含大黄酚和橙黄决明素，提取率为28.01％；

5、将过程2中的固相渣按1∶8加纯化水，搅拌均匀；

6、将料液加热至40±1℃；

7、调料液pH4.5±0.1；

8、加果胶酶(20000u/g)1.5％，加纤维素酶(20000u/g)；

9、搅拌酶解2h；

10、加95％乙醇至料液含醇量60％；

11、80℃水浴回流提取2次，每次1.5h，分离得乙醇提取液和固相渣；

12、回收乙醇提取液中的乙醇，得浸膏状物，经真空干燥或冷冻干燥得粉状提取物，主要含总黄酮和大黄酚，提取率为14.91％；

13、将过程11中的固相渣按1∶8加纯化水；

14、90℃水浴提取2次，每次2h，分离得水提液和固相渣；

15、将水提液蒸发浓缩、干燥、得决明子多糖，提取率为5.67％；

16、将过程14中的固相渣按1∶10加纯化水，搅拌均匀；

17、将料液加热至85±1℃；

18、将料液pH调至9.2±0.1；

19、搅拌提取30min；

20、将料液降温至50±1℃；

21、加复合蛋白酶2.5％(蛋白总量)，搅拌酶解5h；

22、调整料液pH6.0±0.1；加热至75℃灭酶；

23、将料液分离得酶解液；

24、在酶解液中加2％活性炭，65℃精制搅拌精制45min；

25、脱碳、经微孔滤膜精滤，得精制液；

26、将精制液至旋转蒸发仪真空浓缩，得浓缩液；

27、将浓缩液喷雾干燥或冷冻干燥得决明子蛋白肽，提取率为12.97％。

本发明使决明子中生物活性成分全部得以提取，适合决明子深加工企业应用。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。