本发明涉及抗肿瘤疫苗领域，更特别地，涉及一种通用肿瘤疫苗组合物和喷剂及其制备方法。
背景技术：
癌症严重危及人类的健康和生命，据国际癌症研究机构公布的数据显示，每年全球约800万人死于癌症。分析检测数据可发现，癌症的发生存在地区性和家族性现象。如2003-2007年全国32个肿瘤登记处主要分布在沿海地区，其中包括7个癌症高发现场，即江苏启东、浙江嘉善、福建长乐、河南林州、四川盐亭、广西扶绥、山东临朐等。癌家族是指一个家系中恶性肿瘤的发病率高(约20％)，发病年龄较早，通常按常染色体显性方式遗传，以及某些肿瘤(如腺癌)发病率很高等。Lynch将上述特点归纳为“癌家族综合征”。曾经报告过一个癌家族，经70多年(1895年开始)间的五次调查，有些支系已传至第七代，在842名后裔中共发现95名癌患者，其中患结肠腺癌48人和子宫内膜腺癌18人者占多数。这95人中有13人肿瘤为多发性，19人癌发生于40岁之前；95名患者中72人有双亲之一患癌，男性与女性各47和48人，接近1:1，符合常染色体显性遗传。家族性癌是指一个家族内多个成员患同一类型的肿瘤，例如，12％～25％的结肠癌患者有肠癌家族史。许多常见肿瘤如乳腺癌、肠癌、胃癌等，通常是散发的，但一部分患者有明显的家族史。此外，患者的一级亲属中发病率通常高于一般人群3～4倍。这类癌的遗传方式虽然还不很清楚，但表明一些肿瘤家族聚集现象，或家族成员对这些肿瘤的易感性增高。比如鼻咽癌有明显的家族聚集现象，许多鼻咽癌患者有家族患癌病史。鼻咽癌具有垂直和水平的家族发生倾向。
不同种族由于遗传基因及表观遗传学的差异，以及生活习惯的不同，有些肿瘤会在一些种族中高发。这是癌症在不同种族发病情况的差异。
同样，相对于肿瘤，部分地区、部分家族也显现出强大的抗肿瘤能力，长寿现象也同样具有区域性和家族性，长寿村在沿海地区也并不少见，个别家族内群体抗肿瘤能力强，平均寿命较长的现像也存在。
肿瘤的发生一方面与环境污染、生活习惯有着密切关系，另一方面我国的肿瘤防治工作也一直存在重治轻防的问题，肿瘤的预防保健教育未能广泛开展，或者仅存在于喊口号阶段，没有实际行动。公众对于肿瘤的预防保健认识不够，或者不知如何进行肿瘤的预防保健。由此可见，对肿瘤的预防保健措施的细化将成为肿瘤防治工作的重点。
因此，需要一种新的通用肿瘤疫苗。
技术实现要素：
为解决以上问题，本发明提供了一种制备通用肿瘤疫苗组合物的方法，其包括以下步骤：
S1：根据抗肿瘤能力指标从健康群体中筛选具有抗肿瘤能力者；
S2：从所述具有抗肿瘤能力者采集外周血；
S3：从所述外周血中分离得到单核细胞和血浆；
S4：提取所述血浆中的蛋白质，得到蛋白粗提物I；
S5：将所述单核细胞培养成一种或多种免疫细胞培养物；
S6：从所述免疫细胞培养物提取蛋白粗提物II；
S7：将所述蛋白粗提物I与蛋白粗提物II混匀，冻干，得到的粉末即所述通用肿瘤疫苗组合物。
进一步地，S1中筛选所述具有抗肿瘤能力者的指标包括：身高、体重、血压、脉率、心肺功能、血常规、尿常规、血糖、肝肾功能、胸片、心电图、彩超、既往史、家族史、肿瘤易感基因检测和免疫功能检测。
进一步地，S4中通过饱和硫酸铵沉淀法来提取所述血浆中的蛋白质。
进一步地，S5中，所述免疫细胞为DC、CIK和NK细胞中的一种或多种组合。
进一步地，S6包括以下步骤：
S6.1：从所述免疫细胞培养物分离免疫细胞，留下无细胞培养液待用；
S6.2：破碎所述免疫细胞，离心后收集上清液，将所述上清夜与所述无细胞培养液混合，得到细胞粗提物；
S6.3：通过饱和硫酸铵沉淀法从所述细胞粗提物中提取蛋白质，得到蛋白粗提物II。
进一步地，在S7中，冻干前向所述蛋白粗提物I与蛋白粗提物II的混合物中添加抗坏血酸作为蛋白保护剂，然后再进行冻干。
本发明还公开了一种通用肿瘤疫苗组合物，其通过上述方法制备得到。
本发明还公开了一种通用肿瘤疫苗雾化喷剂，其通过对上述通用肿瘤疫苗组合物进行杀灭细菌和病毒处理后溶解于药学可接受的溶剂中，得到所述通用肿瘤疫苗雾化喷剂。
进一步，所述药学可接受的溶剂为无菌水。
进一步，通过使用钴60照射来杀灭所述通用肿瘤疫苗组合物中的细菌和病毒。
健康极具抗肿瘤能力的人群其本身的免疫能力强，血液中含有具有抗肿瘤能力的因子，抗肿瘤的细胞因子呈高表达状态，提取其血浆总同样含有高表达的细胞因子，另外，从他们的血液中提取的免疫细胞免疫功能强，免疫细胞在体外培养过程中分泌多种细胞因子。因此，本发明的通用肿瘤疫苗组合物和雾化喷剂中包含多种抗肿瘤细胞因子，例如IL-1家族(IL-1α、IL-1β、IL-1Ra等)、IL-2、IL-12家族(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35等)、IL-17家族(IL-17A、IL-17F等)、IL-18、TNF-α、GM-CSF、IFN-γ等有效成分。各种细胞因子在抗肿瘤的过程中起着重要的作用。血浆中的抗肿瘤因子和体外培养过程分泌的具有抗肿瘤作用的因子共同作为雾化喷剂的试剂，可以很好的对肿瘤易感人群起到预防保健的作用。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
1.具有抗肿瘤能力者的筛选
从健康人群中筛选出具有抗肿瘤能力者，筛选方案如表1所示，选择一级(评分＞85分)的人作为外周血供体。
表1具有抗肿瘤能力者的筛选
2.通用肿瘤疫苗组合物的制备
通过以下方法制备通用肿瘤疫苗组合物
1)从极具抗肿瘤能力的群体中选择志愿者，用血细胞单采机采集含有PBMC的外周血100ml；
2)将上述含PBMC的外周血2000r/min离心10-20min,分离单个核细胞与血浆；
3)取血浆,加生理盐水稀释,边搅拌边缓慢逐滴加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度50％,4℃静置6h或过夜,4000r/min离心15-30min,分离沉淀，将沉淀溶于生理盐水,超滤除盐浓缩，即得蛋白粗提物I；
4)取单个核细胞，按照常规方法分别培养DC、CIK细胞；
5)收集DC、CIK细胞，剩下的无细胞培养液待用；通过超声破碎或反复冻融的方法裂解上述细胞，然后1500×g离心10min，收集上清，将所述上清与所述无细胞培养液混匀，得到细胞粗提物；将所述细胞粗提物进行硫酸铵沉淀，然后透析除盐，即得蛋白粗提物II；
6)将蛋白粗提物1和蛋白粗提物2混匀后加入0.03mg/ml的抗坏血酸作为蛋白保护剂，而后制成冻干粉，即得到所述通用肿瘤疫苗组合物。
在以上方法中，通过以下步骤来培养DC细胞，并制备肿瘤通用负载物质：
1)在PBMC培养物中加入诱导因子来诱导PMBC分化成DC细胞，细胞培养必须在千级超洁净工作间进行，所有可能开放的操作均应该在百级超洁净工作台内进行。培养期间对细胞制品进行严格质量控制，确保无污染。
2)质量控制：对细胞形态进行观测和免疫表型检测，确保诱导出功能及表型更加成熟的免疫细胞；并作出无菌试验、无热源和支原体试验，确保细胞的安全性；
3)利用肿瘤通用负载物质冲击DC，使DC成熟，携带抗肿瘤信号。
3.制备雾化喷剂
1)于10℃用钴60照射通用肿瘤疫苗组合物干粉，进行病毒灭活处理，将灭活后的干粉分装保存，钴60辐照剂量为15-30kGy；
2)用双蒸水溶解分装后的冻干粉，制成喷剂溶液，即得到所述雾化喷剂，用雾化喷剂装置进行雾化吸收。
所得到的肿瘤疫苗组合物和雾化喷剂多种抗肿瘤细胞因子，例如IL-1家族(IL-1α、IL-1β、IL-1Ra等)、IL-2、IL-12家族(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35等)、IL-17家族(IL-17A、IL-17F等)、IL-18、TNF-α、GM-CSF、IFN-γ等有效成分。各种细胞因子在抗肿瘤的过程中起着重要的作用。血浆中的抗肿瘤因子和体外培养过程分泌的具有抗肿瘤作用的因子共同作为雾化喷剂的试剂，可以很好的对肿瘤易感人群起到预防保健的作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。