本发明属于天然物提取的技术领域，特别涉及一种罗汉果提取物的制备方法。
背景技术：
罗汉果，葫芦科多年生藤本植物的果实。别名拉汗果、假苦瓜、光果木鳖、金不换、罗汉表、裸龟巴，被人们誉为“神仙果”，其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。主要产于广西壮族自治区桂林市永福县龙江乡、龙胜和百寿等镇，永福县和龙胜县是罗汉果之乡种植历史比较悠久，其中永福种植罗汉果已经有300多年历史，龙胜县种植罗汉果已经有200多年历史，中国百分之九十罗汉果产于永福县和龙胜县，罗汉果是桂林名贵的土特产，也是国家首批批准的药食两用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果实营养价值很高，含丰富的维生素c(每100克鲜果中含400毫克～500毫克)以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白质、脂类等。
罗汉果味甘性凉，归肺、大肠经，有润肺止咳、生津止渴的功效、适用于肺热或肺燥咳嗽、百日咳及暑热伤津口渴等，此外还有润肠通便的功效。罗汉果为卫生部首批公布的药食两用名贵中药材，其所含罗汉果甜甙比蔗糖甜300倍，不产生热量，是饮料、糖果行业的名贵原料，是蔗糖的最佳替代品。常饮罗汉果茶，可防多种疾病，现代医学证明，罗汉果对支气管炎、高血压等疾病有显著疗效，还是起到防治冠心病、血管硬化、肥胖症的作用。营养价值高，有清热解暑、化痰止咳、凉血舒骨、清肺润肠和生津止渴等功效；可治急慢性气管炎、咽喉炎、支气管哮喘、百日咳、胃热、便秘、急性扁桃体炎等症，糖尿病患者亦宜服用。
罗汉果具有较多的保健功效，现在研究中，虽然发现罗汉果有抗癌成分，但是是含量非常微弱，因此导致罗汉果的抗癌功效不明显，也很少有人用来作为抗癌的药物，因此研究开发一种具有较强抗癌功效的罗汉果提取物非常有必要。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供罗汉果提取物的制备方法，得到的罗汉果提取物具有显著的抗癌功效。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎，加入其重量份6～10倍的乙醇溶液，超高压处理，得到浆液；
2)将浆液放入磁场中处理；
3)超声波提取，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液离心分离，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。
本发明所述步骤1)中，粉碎至50～80目。罗汉果粉碎有利于有效物质的溶出，有利于后续步骤的进行。
本发明所述步骤1)中，在150～180mpa下超高压处理2～6min。在一定的压力范围内，有效成分的提取较高，当超过180mpa时，会破坏罗汉果的抗癌成分，且抗癌成分的提取率低，且抗癌效果下降。
本发明所述步骤1)中，乙醇溶液的体积浓度为40～50％。乙醇的体积浓度过高时，罗汉果提取物的总提取率降低，有效成分在乙醇中的溶解度降低，且部分蛋白质易凝结，一些脂溶性成分被提取出来，增大有效成分与提取溶剂的扩散阻力。
本发明所述步骤2)中，在0.4～0.8t的磁场中处理8～16min。将浆液放入磁场中处理，改变抗癌成分的导向，使抗癌成分更易溶出，同时也为了提高抗癌成分的提取率和纯度。
本发明所述步骤3)中，在45～75khz频率下超声波提取30～70min。超声波的提取频率与罗汉果的抗癌成分密切相关，提高提取频率有利于抗癌成分的溶出，但是过高，不利于部分抗癌成分物质的溶出，降低提取率，增大损失。一般情况下，超声波提取时间越长越有利于提高提取率，但是过长，大分子物质大量进入粗提取物中，影响抗癌的纯度，在这个频率下，还有效保护罗汉果的抗癌成分不被破坏。
本发明所述步骤3)中，超声波提取时的温度为45～55℃。一定范围内，温度越高，越有利于罗汉果有效成分的溶出，提高提取率，但是温度过高会破坏有效成分，而在这样的温度范围内提取，条件温和，有效保护罗汉果有效成分的同时，有利于加快提取速度。
本发明所述步骤4)中，乙醇溶液的体积浓度为75～95％。当乙醇的体积浓度超过95％时，乙醇中的含水量减少，乙醇分子通透性发生变化，导致溶液中罗汉果的有效成分向树脂外扩散的难度增大，影响洗脱。
本发明所述步骤4)中，乙醇溶液与乙酸乙酯的重量比为3～8:1。使用混合的溶剂，有利于有效成分的洗脱，提高纯度。
本发明所述步骤5)中，在3400～4600r/min转速下离心分离4～8min。离心分离有利于罗汉果有效成分的纯化，提高提取率。
通过本发明方法制备罗汉果提取物，得到的提取物具有显著的抗癌功效，拓宽罗汉果的应用，提高罗汉果的价值，用于治疗已经注射小鼠肉瘤s180腹水型瘤株的小鼠，平均存活天数相比不使用药物治疗的已经注射小鼠肉瘤s180腹水型瘤株的小鼠多62～83天。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎至50目，加入其重量份10倍体积浓度为40％的乙醇溶液，在150mpa下超高压处理2min，得到浆液；
2)将浆液放入0.8t的磁场中处理8min；
3)在70khz频率下超声波提取30min，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以重量比为8:1体积浓度为75％的乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液在4600r/min转速下离心分离4min，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。
实施例2
罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎至60目，加入其重量份9倍体积浓度为45％的乙醇溶液，在180mpa下超高压处理3min，得到浆液；
2)将浆液放入0.7t的磁场中处理10min；
3)在75khz频率下超声波提取40min，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以重量比为6:1体积浓度为80％的乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液在4300r/min转速下离心分离5min，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。
实施例3
罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎至70目，加入其重量份8倍体积浓度为50％的乙醇溶液，在170mpa下超高压处理4min，得到浆液；
2)将浆液放入0.6t的磁场中处理12min；
3)在65khz频率下超声波提取50min，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以重量比为5:1体积浓度为85％的乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液在4000r/min转速下离心分离6min，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。
实施例4
罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎至80目，加入其重量份7倍体积浓度为40％的乙醇溶液，在160mpa下超高压处理5min，得到浆液；
2)将浆液放入0.5t的磁场中处理14min；
3)在55khz频率下超声波提取60min，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以重量比为4:1体积浓度为90％的乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液在3700r/min转速下离心分离7min，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。
实施例5
罗汉果提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将罗汉果粉碎至50目，加入其重量份6倍体积浓度为50％的乙醇溶液，在150mpa下超高压处理6min，得到浆液；
2)将浆液放入0.4t的磁场中处理16min；
3)在45khz频率下超声波提取70min，得到粗提取液；
4)将粗提取液过大孔吸附树脂柱层析，以重量比为3:1体积浓度为95％的乙醇溶液和乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)洗脱液在3400r/min转速下离心分离8min，浓缩，干燥，得到罗汉果提取物。