本发明涉及一种酶复合保护剂及其制备方法，更具体地说，本发明涉及一种超氧化物歧化酶复合保护剂及其制备方法。
背景技术：
已知超氧化物歧化酶是生物体内存在的抗氧化金属酶，具有催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢的功能，在机体氧化与抗氧化平衡中起到了重要作用。
超氧化物歧化酶为纯天然的生物活性物质，对人体无毒副作用，属酸性蛋白酶，活性和催化效率与其含量和所处环境的理化因素有关。超氧化物歧化酶活性在常温下稳定性差，生物半衰期短，在自然环境下会随着时间的推移慢慢减小，从而限制了其在临床应用。
cn104586766a公开了一种酶活性稳定的超氧化物歧化酶制剂，该方法提供的超氧化物歧化酶制剂中含有超氧化物歧化酶、醇类溶剂、乳化剂和油，借助乳化剂的作用，使分散于醇类溶剂中的超氧化物歧化酶被包裹于油相内，由此获得单相、透明的超氧化物歧化酶油包醇制剂，从而避免了超氧化物歧化酶的降解，增强了超氧化物歧化酶的稳定性，利于其发挥活性功能。
cn1245831公开了一种超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法，该方法是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶中加入2-8％固体状保护剂，将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理，可保证超氧化物歧化酶酶活力的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证了含超氧化物歧化酶的产品在高温工艺中及常温储存下不易变质。
但是，存在以下问题：(1)采用油包醇制剂或者固体状保护剂不能同时提高超氧化物歧化酶活性和稳定性，大大限制了超氧化物歧化酶的应用；(2)制备工艺不够简单，成本较高。
技术实现要素：
为了解决现有技术所存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种超氧化物歧化酶复合保护剂，该复合保护剂可以同时提高超氧化物歧化酶活性和稳定性。
本发明的另一个目的在于提供一种制备超氧化物歧化酶复合保护剂的方法。该方法工艺过程简单，成本低廉。
本发明技术方案如下：
方案一
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备：
(1)将带正电氨基酸和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将34.2～57.5g增效剂、上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得超氧化物歧化酶复合保护剂。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述带正电氨基酸选自赖氨酸、精氨酸或组氨酸中的一种。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂包括乳糖30g～37g，所述乳糖的作用是进一步提高超氧化物歧化酶稳定性。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂还包括氯化钙10g～13g，所述氯化钙的作用是进一步提高超氧化物歧化酶稳定性。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂还包括芦荟多糖0.1g～0.3g和/或聚乙二醇0.05g～0.2g，所述芦荟多糖和聚乙二醇的作用是使超氧化物歧化酶使用时在皮肤形成薄膜，促进伤口愈合。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂还包括山梨酸钾5g～7g，所述山梨酸钾能起抑菌作用。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂由乳糖30g～37g、氯化钙10g～13g、芦荟多糖0.1g～0.3g、聚乙二醇0.05g～0.2g和山梨酸钾5g～7g组成。
本发明上述技术方案的进一步优选方案如下：所述增效剂由乳糖34.2g、氯化钙11.1g、芦荟多糖0.2g、聚乙二醇0.1g和山梨酸钾6g组成。
方案二
一种根据方案一任意一项所述的一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法制备得到的超氧化物歧化酶复合保护剂。
与现有技术相比而言，本发明具有以下优点：
(1)本发明提供的超氧化物歧化酶复合保护剂不仅使酶活提高了20％，而且稳定性大大增加，常温储存期增加了近一倍；
(2)本发明提供的超氧化物歧化酶复合保护剂具有促进伤口愈合和抑菌效果；
(3)本发明提供的超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法仅仅包括水浴加热、物理混合、灭菌等常规简单步骤，不需要冻干等复杂高能耗的步骤，成本较低。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式对本发明作进一步的描述。
1.根据本发明提出的超氧化物歧化酶复合保护剂及其制备方法可选因素较多，可以设计出多种实施例，因此具体的实施例仅作为本发明的具体实现方式的示例性说明，而不构成对本发明范围的限制。为了具体的描述本发明，有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，选择以下实施例进行示例性说明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g)、上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品1。
实施例2
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、氯化钙11.1g)、上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品2。
实施例3
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、芦荟多糖0.2g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品3。
实施例4
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品4。
实施例5
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、芦荟多糖0.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品5。
实施例6
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、山梨酸钾6g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品6。
实施例7
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、氯化钙11.1g、芦荟多糖0.2g、聚乙二醇0.1g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品7。
实施例8
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖30g、氯化钙10g、芦荟多糖0.1g、聚乙二醇0.05g、山梨酸钾5g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品8。
实施例9
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖34.2g、氯化钙11.1g、芦荟多糖0.2g、聚乙二醇0.1g、山梨酸钾6g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品9。
实施例10
一种超氧化物歧化酶复合保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将增效剂(乳糖37g、氯化钙13g、芦荟多糖0.3g、聚乙二醇0.2g、山梨酸钾7g)，上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得样品10。
实施例11
本实例与实施例9的区别在于用赖氨酸代替精氨酸，制得样品11。
实施例12
本实例与实施例9的区别在于用组氨酸代替精氨酸，制得样品12。
对比实施例1
以灭菌后的超纯水作为对照1。
对比实施例2
(1)将带正电氨基酸(精氨酸)和葡萄糖以摩尔比1:1溶于超纯水中，制成0.6mol/l溶液，并将其置于沸水浴中加热1小时，冷却后得反应产物原液；
(2)将上述步骤(1)所得反应产物原液65ml,溶于超纯水中，摇匀，并定容至1l，得到灭菌前的复合保护剂；
(3)将上述步骤(2)所得物在121℃灭菌20min得对照2。
实施效果的评价
取超氧化物歧化酶(酶活力4500u/mg)10mg,溶解在20ml样品或对照中。
1、酶活性的测定：采用邻苯三酚自氧化测定法。
2、温度加速法测定其酶活损失10％时的常温贮存期。
表1实施效果评价