本发明属于干细胞
技术领域：
，具体涉及一种干细胞制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
：糖尿病足是指由于糖尿病血管病变、神经病变及其感染等综合因素，导致神经性病变使得下肢保护功能减退，大血管和微血管病变使动脉灌注不足致微循环障碍而引起足部疼痛、皮肤深溃疡甚至肢体坏疽的疾病状态。糖尿病足是糖尿病一种严重的并发症，是糖尿病患者致残，甚至致死的重要原因之一，不但给患者造成痛苦，而且使其增添了巨大的经济负担。临床上用于治疗糖尿病足的方法有药物治疗、血管重建和介入手术，然而，糖尿病患者多年老体弱，常患有心脑血管等疾病，不能耐受手术搭桥等刺激，且血管病变多累及小动脉，部分患者缺乏远端动脉流出道，不具备行血管搭桥和介入治疗的条件。因此，目前糖尿病足的临床治疗仍然非常棘手，难以取得令人满意的疗效，常常导致截肢甚至危及病患生命。因此，临床上迫切需要找到创伤小、易接受、疗效好的新的治疗方法。因此，迫切需要寻求一种辅助治疗糖尿病足的制剂或方法。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种干细胞制剂及其制备方法和应用，用于辅助治疗糖尿病足，降低截肢率，改善患者的生活质量。本发明的具体技术方案如下：本发明提供了一种干细胞制剂，包括：脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆。优选的，所述脐带间充质干细胞的细胞密度为4×106个/ml～8×106个/ml。优选的，所述人血白蛋白的体积百分比浓度为10％。优选的，所述富含血小板血浆的体积百分比浓度为20％～40％。优选的，所述脐带间充质干细胞为第四代至第六代脐带间充质干细胞。优选的，所述干细胞制剂为注射剂。优选的，所述干细胞制剂的注射剂量为10ml/次。本发明还提供了一种上述干细胞制剂的制备方法，将脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆混合均匀，得到所述干细胞制剂。本发明还提供了上述干细胞制剂或上述制备方法得到的干细胞制剂在制备治疗糖尿病足药物中的应用。本发明所提供的一种干细胞制剂，包括：脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆，各组分配伍合理、协同增效，促进血管生长和血液循环，促进了糖尿病足的修复治疗，改善患者的生活质量。本发明采用脐带间充质干细胞作为种子细胞，采集简单、容易获得，而且免疫原性低，无伦理问题，对于糖尿病足患者具有重要意义。本发明所提供的制备方法，步骤操作简单，工艺优化，可实现规模化生产。具体实施方式本发明提供了一种干细胞制剂及其制备方法和应用，有助于降低截肢率，改善患者的生活质量。本发明所提供的干细胞制剂包括：脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆。进一步的，所述脐带间充质干细胞的细胞密度优选为4×106个/ml～8×106个/ml，更优选为6×106个/ml。进一步的，所述人血白蛋白的体积百分比浓度优选为10％。进一步的，所述富含血小板血浆的体积百分比浓度优选为20％～40％，更优选为30％。富含血小板血浆又名prp，是自体全血经离心后得到的血小板浓缩物，含有大量生长因子及蛋白质，能促进血管生长，促进血液循环。prp与富含血小板血浆协同作用，共同促进了糖尿病足创面愈合，促进患者康复，改善患者的生活质量。进一步的，所述脐带间充质干细胞为第四代至第六代脐带间充质干细胞。进一步的，所述干细胞制剂为注射剂。本发明对脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的即可，如市售来源的脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆。其中，所述脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆也可采用本领域技术人员熟知的常规制备方法制备。本发明还提供了一种上述干细胞制剂的制备方法，将脐带间充质干细胞、人血白蛋白和富含血小板血浆混合均匀，得到所述干细胞制剂。本发明还提供了上述干细胞制剂或通过上述制备方法得到的干细胞制剂在制备治疗糖尿病足药物中的应用。进一步的，所述干细胞制剂治疗糖尿病足的注射剂量为10ml/次。下面将结合本发明具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例只是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本领域技术人员应当理解，对本发明的具体实施例进行修改或者对部分技术特征进行同等替换，而不脱离本发明技术方案的精神，均应涵盖在本发明保护的范围中。实施例11、配方第四代脐带间充质干细胞4×106个/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血浆(prp)20vol％。2、制备(1)采集脐带样本，去除脐带上皮、静脉膜和两个动脉，取华通氏胶，剪碎，然后置于培养皿中采用组织培养法进行分离培养，培养基采用lonza完全培养基；待培养皿中爬出5处克隆时，去掉组织块再加入lonza完全培养基继续培养；待培养至细胞数达到2×106个以上时进行传代培养，直至培养到p4代，收集细胞。将细胞用胰酶消化下来后采用lonza完全培养基终止消化，放入离心管用500g离心5分钟，去除上清，加入pbs重悬继续离心，重复一遍。然后将细胞沉淀采用5mlpbs和2ml人血白蛋白进行重悬，再用50μm滤网过滤，收集滤液。(2)抽取糖尿病患者的外周血10ml，350g离心10min后吸取血浆层，装入新的离心管，再500g离心5分钟后直接把上清导入到新的离心管中，继续采用1300g离心，离心完后只留取离心管底部的3mlprp，将它收集起来。(3)将步骤(1)中收集的滤液和步骤(2)中收集的prp充分混匀，得到用于治疗糖尿病足的干细胞制剂。实施例21、配方第五代脐带间充质干细胞6×106个/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血浆(prp)30vol％。2、制备其制备方法同实施例1。实施例31、配方第六代脐带间充质干细胞8×106个/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血浆(prp)40vol％。2、制备其制备方法同实施例1。实施例4随机选取80例糖尿病患者，将患者随机分为4组，其中一组为对照组，另外3组设为实验组。对照组采用胰岛素注射治疗，实验组分别采用实施例1至实施例3所制备的干细胞制剂在糖尿病足患者的脚上多处均匀注射，注射剂量均为10ml/次，两周一次，3周后观察治疗效果，4周后再观察治疗疗效，5周后继续观察。表1为第3周的观察结果，表2为第4周的观察结果，表3为第5周的观察结果。如表1-3的结果所示，对照组和3组实验组均呈现不同程度的好转，其中实验组的痊愈人数和显效人数均高于对照组，说明本发明所提供的干细胞制剂能有效促进糖尿病足患者的糖尿病足病情。以下为评估指标：显效：4周内创面缩小75％，新生肉芽组织大部分长出，无炎性渗出液；有改善：4周内创面缩小，新生肉芽组织部分长出，炎性渗出液较少；无效：4周内无创面缩小，无新生肉芽组织，炎性渗出液较多。表1无效有改善显效对照组10141实施例14165实施例22167实施例34174表2无效有改善显效对照组8152实施例101510实施例201312实施例30178表3无效有改善显效对照组6145实施例10718实施例20520实施例30817当前第1页12