本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种秋葵提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
秋葵为锦葵科秋葵属一年生草本植物，又名羊角豆、潺茄、黄秋葵、咖啡黄葵，富含蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素、多糖、黄酮类化合物等，属于低脂肪、低热量、无胆固醇的蔬菜。实验证明，秋葵中的物质具有抗氧化的作用，能够保护人体免受自由基的损伤。
自由基又称游离基，是具有非偶电子的基团或原子，由于自由基含未配对的电子，所以极不稳定，会从邻近的分子夺取电子，让自己处于稳定的状态，这样邻近的分子又变成一个新的自由基，然后再去夺取电子，该连锁反应会使细胞结构受到破坏，造成细胞功能丧失、基因突变、甚至死亡。
如何提供一种可清除自由基的纯天然物质，是自由基清除领域亟待解决的问题之一。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决上述至少一个问题，提供一种秋葵提取物及其制备方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明提供一种秋葵提取物的制备方法，包括以下步骤：将秋葵进行干燥，并粉碎至70-90目，获得秋葵干粉；取秋葵干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，混合均匀，其中，秋葵干粉与蒸馏水的料液比为1g:30-35ml，秋葵干粉与混和酶的质量比为1g:10-15mg；将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理20-40min，在超声波处理后的液体中加入3-5倍体积的乙醇；将加入乙醇的液体置于45-55℃水浴中40-60min，水浴结束后，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得秋葵提取物。
其中，混和酶按质量百分比计，包括组分：20%-40%纤维素酶、60%-80%果胶酶。
其中，乙醇的体积分数为50%-75%。
其中，秋葵粉碎至80目。
其中，秋葵干粉与蒸馏水的料液比为1g:32ml，秋葵干粉与混和酶的质量比为1g:12mg，水浴的温度为50℃、时间为50min。
其中，混和酶按质量百分比计，包括组分：30%纤维素酶、70%果胶酶。
其中，利用蒸馏水对获得的秋葵提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱，用35-45%的乙醇以1.0-1.5bv/h的流速进行解吸，解吸量为5.5-7.5bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的秋葵提取物。
为解决上述技术问题，本发明提供一种上述制备方法制备得到的秋葵提取物。
为解决上述技术问题，本发明提供一种秋葵提取物作为清除自由基药物或保健品的应用。具体地，秋葵提取物作为清除自由基药物或保健品的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明的秋葵提取物的制备方法包括以下步骤：将秋葵进行干燥，并粉碎至70-90目，获得秋葵干粉；取秋葵干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，混合均匀，其中，秋葵干粉与蒸馏水的料液比为1g:30-35ml，秋葵干粉与混和酶的质量比为1g:10-15mg；将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理20-40min，在超声波处理后的液体中加入3-5倍体积的乙醇；将加入乙醇的液体置于45-55℃水浴中40-60min，水浴结束后，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得秋葵提取物。上述方法制备的秋葵提取物为纯天然物质，可对自由基进行清除。上述制备方法具有以下特点：简单、易操作；由于对秋葵细胞充分破碎，可更好地对秋葵中的物质进行提取；制备出的秋葵提取物具有较高的提取率，且无毒、无害；利用大孔吸附树脂柱，使得制备出的秋葵提取物更纯。
具体实施方式
实施例1
秋葵提取物的制备方法包括以下步骤：将秋葵进行干燥，并粉碎至80目，获得秋葵干粉，其中，粉碎的秋葵为果荚部分；取秋葵干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，混合均匀，其中，秋葵干粉与蒸馏水的料液比为1g:32ml，秋葵干粉与混和酶的质量比为1g:12mg；将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理30min，在超声波处理后的液体中加入4倍体积的乙醇；将加入乙醇的液体置于50℃水浴中50min，水浴结束后，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得秋葵提取物。
在本实施例中，混和酶按质量百分比计，包括组分：30%纤维素酶、70%果胶酶。乙醇的体积分数为65%。
本实施例的秋葵提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例2
秋葵提取物的制备方法包括以下步骤：将秋葵进行干燥，并粉碎至80目，获得秋葵干粉，其中，粉碎的秋葵为果荚部分；取秋葵干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，混合均匀，其中，秋葵干粉与蒸馏水的料液比为1g:31ml，秋葵干粉与混和酶的质量比为1g:11mg；将混合后的液体置于超声波细胞粉碎机中超声波处理30min，在超声波处理后的液体中加入3.5倍体积的乙醇；将加入乙醇的液体置于48℃水浴中45min，水浴结束后，进行离心，获取上清液，对该上清液进行真空干燥，获得秋葵提取物。
在本实施例中，混和酶按质量百分比计，包括组分：25%纤维素酶、75%果胶酶。乙醇的体积分数为60%。
本实施例的秋葵提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例3
在实施例1的基础上，利用蒸馏水对获得的秋葵提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱（ab-8型），用40%的乙醇以1.3bv/h的流速进行解吸，解吸量为6bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的秋葵提取物。
实施例4
在实施例2的基础上，利用蒸馏水对获得的秋葵提取物进行溶解，而后上大孔吸附树脂柱（ab-8型），用40%的乙醇以1.3bv/h的流速进行解吸，解吸量为6bv，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥，获得纯化的秋葵提取物。
实施例5
秋葵提取物片剂的制备：将实施例1或实施例2制备的秋葵提取物用单冲压片机打成直径为7mm，重量为350mg的片，即得秋葵提取物片剂。
实施例6
秋葵提取物胶囊剂的制备：将实施例1或实施例2制备的秋葵提取物以350mg填充入1号肠溶胶囊，即得秋葵提取物胶囊剂。
实施例7
秋葵提取物颗粒剂的制备：将实施例1或实施例2制备的秋葵提取物加水制成软材，过15目筛进行造粒，干燥后即得秋葵提取物颗粒剂。
实施例8
秋葵提取物散剂的制备：将实施例1或实施例2制备的秋葵提取物过250目筛，即得秋葵提取物散剂。
下面通过实验说明本发明秋葵提取物的自由基清除效果。
称取dpph（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼），利用乙醇进行溶解；称取实施例1制备的秋葵提取物、实施例2制备的秋葵提取物，利用乙醇进行溶解，分别制成10个浓度梯度的溶液，浓度梯度具体为：1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、3μg/ml、3.5μg/ml、4μg/ml、4.5μg/ml、5μg/ml、5.5μg/ml；在实施例1制备的秋葵提取物制成的10个溶液中分别加入等体积的dpph溶液，混合均匀，在室温下反应30min，517nm波长下测定吸光度a，同时以乙醇为空白对照，测定吸光度a0，根据a和a0计算自由基的清除率，其中，a0为dpph溶液加入乙醇的吸光度值；在实施例2制备的秋葵提取物制成的10个溶液中分别加入等体积的dpph溶液，混合均匀，在室温下反应30min，517nm波长下测定吸光度a，同时以乙醇为空白对照，测定吸光度a0，根据a和a0计算自由基的清除率，其中，a0为dpph溶液加入乙醇的吸光度值；其中，清除率的计算公式为：清除率=（a0-a）/a0×100%；其中，实验中所使用的乙醇为无水乙醇。
以秋葵提取物浓度为横坐标、清除率为纵坐标绘制曲线，根据曲线的线性回归方程，计算清除自由基的半抑制浓度（ic50）。
实验结果：实施例1制备的秋葵提取物对自由基的清除能力的ic50为2.51μg/ml，实施例2制备的秋葵提取物对自由基的清除能力的ic50为2.56μg/ml。根据实验结果可以看出，实施例1和实施例2制备的秋葵提取物表现出强的自由基清除能力，具有良好的抗氧化活性。
利用上述实验方法计算秋葵黄酮对自由基清除能力的ic50，通过计算，ic50值为3.60μg/ml。根据计算结果，可以看出实施例1或实施例2制备的秋葵提取物较秋葵黄酮具有更好的自由基清除能力。
利用上述实验方法计算实施例3制备的秋葵提取物、实施例4制备的秋葵提取物对自由基清除能力的ic50，通过计算，实施例3制备的秋葵提取物对自由基的清除能力的ic50为2.38μg/ml，实施例4制备的秋葵提取物对自由基的清除能力的ic50为2.40μg/ml。根据计算结果，可以看出实施例3、实施例4制备的秋葵提取物较实施例1、实施例2制备的秋葵提取物具有更好的自由基清除能力。
综上所述，本发明的秋葵提取物可对自由基进行清除，且其为纯天然物质，对人体无副作用。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。