本发明涉及天然物提取领域，特别涉及一种甜茶有效成分的提取方法。
背景技术：
甜茶是蔷薇科多年生藤木，为广西特有的一种无毒、低热能、高甜度和具有保健功能的野生珍稀甜味植物，主产于广西的瑶山、金秀、永福和岑溪等县市。由于其味甜，故名甜茶。与罗汉果、甜叶菊并称为广西三大甜味植物，在广西民间具有悠久的应用历史，长期以来当地人民一直当茶饮用，亦用来代糖加工食品，还可入药。
甜茶具有相当高的营养价值，其中以广西甜茶最为代表，其所含的多种成分，具有清热解毒、防癌抗癌抗过敏、润肺化痰止咳、减肥降脂降压、降低血胆固醇、抑制和廷缓血管硬化、防治冠心病和糖尿病等众多的保健功能。
甜茶含丰富的营养物质和人体所必需的微量元素。据广西技术监督局分析测试研究中心等单位测试结果证实：野生甜茶中富含18种氨基酸，每100克干品含氨基酸总量331.54毫克，特别是甜茶中富含人体必须的、人体不能生成，只能从食物中吸收的8种氨基酸。主要有钙0.84％、锌105.5mg/kg、锗5.5μg/kg、硒17.94μg/kg，及钾、镁、磷、铁、钠、铜、铬、锶、锂等多种元素，不含砷铝等有毒物质，不含会产生头晕、心跳加速、心悸、焦虑易怒、心理不适、干扰睡眠、等副作用的咖啡因；其中所含的锗、硒等，均优于一般绿茶和苦丁茶。除上述所含微量元素外，还富含维生素c、b1、b2、b3、超氧化物岐化酶，鲜甜茶中维生素c的含量高达115mg/100g；特别是还富含最具价值4.1％的生物类黄酮、18.04％的茶多酚和5％的甜茶素。
生物类黄酮(bioflavonoids)，即维生素p，是植物次级代谢产物，它们并非单一的化合物，而是多种具有类似结构和活性物质的总称，因多呈黄色而被称为生物类黄酮。主要的维生素p类化合物包括黄酮、芸香素、橙皮素等，属于水溶性维生素。生物类黄酮具有清除自由基、抗氧化作用；抗血栓、保护心脑血管作用抗肿瘤、消炎抑菌作用；解除醇中毒、保肝护肝等多种功效；具有清热解毒、祛风湿、强筋骨等功效；调节免疫力的作用；抗妇女更年期综合症；抗菌、消炎及抗过敏作用；抗病毒作用。
茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。主要为黄烷醇(儿茶素)类，儿茶素占60～80％。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。
甜茶素粗提物有一种苦味，利用0.1mol几的石灰水可以有效地去除甜这种后苦味。以脱苦后的甜茶素代替蔗糖，可以生产出口味好、热值低且成本低的无糖酸奶，为甜茶素在食品中应用开辟了一条新的途径。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供甜茶有效成分的提取方法，该方法能够依次提取高纯度和收率的甜茶中黄酮、茶多酚和甜茶素，充分利用资源，提高提取效率。
为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：
本发明提供甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入乙醇溶液中，在23～46mpa下高压处理4～8min，再在360～480w下超声波提取8～16min，微滤，再超滤，得到黄酮和滤液a；
2)滤液a过截留分子量为3～8万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以体积浓度为45～65％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，干燥，得到甜茶素。
为了能够最大限度提取甜茶中的黄酮，同时为了减少生产成本，也为了利于后续的处理，本发明所述步骤1)中，甜茶叶和乙醇溶液的重量比为1:16～22。
为了使有效成分充分溶解出来，同时保护有效成分不被破坏，本发明所述步骤1)中，高压处理的温度为30～35℃。
为了保证高效提取，且保证有效成分的提取率，本发明所述步骤1)中，超声波提取的温度为35～40℃。
为了充分过滤杂质，提高有效成分纯度，本发明所述步骤1)中，微滤使用的膜孔径为0.4～0.8μm。
更进一步提高黄酮的纯度，且提高黄酮的生物活性，本发明所述步骤1)中，用截留10000～30000分子量的超滤膜进行超滤。
为了有效洗脱甜茶素，本发明所述步骤3)中，乙醇溶液用量为树脂柱床体积的2～6倍。
为了最大限度提取黄酮，本发明所述步骤1)中，乙醇溶液的体积浓度为75～95％。
根据甜茶素的极性和化学结构，保证最大限度提取甜茶素，本发明所述步骤3)中，乙醇溶液的体积浓度为45～65％。
为了更好纯化甜茶素，本发明所述步骤3)中，低温结晶时的温度为3～6℃。
本发明所述步骤3)中，干燥为真空冷冻干燥。
本发明方法简单，对甜茶叶进行高压处理，再进行超声波提取，再结合微滤、超滤，过中空纤维膜和大孔吸附树脂柱层析，配以结晶和重结晶，将甜茶叶中的黄酮、茶多酚和甜茶素等有效成份先后依次分离出来，提高甜茶叶的利用率，节约资源，降低成本，且通过本发明的方法制备得到的有效成分收率和纯度高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入甜茶叶重量16倍的体积浓度为95％的乙醇溶液中，在23mpa和30℃下高压处理4min，再在480w和35℃下超声波提取16min，使用的膜孔径为0.4μm进行微滤，再用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，得到黄酮和滤液a，hplc检测，黄酮的纯度为99.4％，计算收率为3.8％；
2)滤液a过截留分子量为3万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b，hplc检测，茶多酚的纯度为98.6％，计算收率为17.8％；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的6倍的体积浓度为45％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，在3℃低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，真空冷冻干燥，得到甜茶素，hplc检测，甜茶素的纯度为99.1％，计算收率为4.7％。
实施例2
甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入甜茶叶重量20倍的体积浓度为90％的乙醇溶液中，在29mpa和32℃下高压处理5min，再在450w和38℃下超声波提取14min，使用的膜孔径为0.5μm进行微滤，再用截留25000分子量的超滤膜进行超滤，得到黄酮和滤液a，hplc检测，黄酮的纯度为99.7％，计算收率为4.0％；
2)滤液a过截留分子量为4万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b，hplc检测，茶多酚的纯度为98.8％，计算收率为17.7％；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的5倍的体积浓度为60％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，在5℃低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，真空冷冻干燥，得到甜茶素，hplc检测，甜茶素的纯度为99.1％，计算收率为4.9％。
实施例3
甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入甜茶叶重量18倍的体积浓度为85％的乙醇溶液中，在35mpa和35℃下高压处理6min，再在420w和40℃下超声波提取12min，使用的膜孔径为0.6μm进行微滤，再用截留20000分子量的超滤膜进行超滤，得到黄酮和滤液a，hplc检测，黄酮的纯度为99.6％，计算收率为3.7％；
2)滤液a过截留分子量为5万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b，hplc检测，茶多酚的纯度为99.1％，计算收率为17.5％；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的4倍的体积浓度为50％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，在4℃低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，真空冷冻干燥，得到甜茶素，hplc检测，甜茶素的纯度为99.3％，计算收率为4.6％。
实施例4
甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入甜茶叶重量19倍的体积浓度为80％的乙醇溶液中，在41mpa和32℃下高压处理7min，再在390w和35℃下超声波提取10min，使用的膜孔径为0.7μm进行微滤，再用截留15000分子量的超滤膜进行超滤，得到黄酮和滤液a，hplc检测，黄酮的纯度为99.4％，计算收率为3.9％；
2)滤液a过截留分子量为6万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b，hplc检测，茶多酚的纯度为98.9％，计算收率为17.6％；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的3倍的体积浓度为55％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，在6℃低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，真空冷冻干燥，得到甜茶素，hplc检测，甜茶素的纯度为99.1％，计算收率为4.7％。
实施例5
甜茶有效成分的提取方法，包括以下制备步骤：
1)取甜茶叶放入甜茶叶重量22倍的体积浓度为75％的乙醇溶液中，在46mpa和30℃下高压处理8min，再在360w和38℃下超声波提取8min，使用的膜孔径为0.8μm进行微滤，再用截留10000分子量的超滤膜进行超滤，得到黄酮和滤液a，hplc检测，黄酮的纯度为99.1％，计算收率为3.7％；
2)滤液a过截留分子量为8万的中空纤维膜，得到茶多酚和滤液b，hplc检测，茶多酚的纯度为99.2％，计算收率为17.7％；
3)滤液b进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的2倍的体积浓度为65％的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，在4℃低温结晶，过滤得结晶物，再进行重结晶，过滤，真空冷冻干燥，得到甜茶素，hplc检测，甜茶素的纯度为98.8％，计算收率为4.8％。