本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有降血脂作用的黑木耳三萜类化合物提取物在制备降血脂药物及保健食品中的应用。
背景技术：
黑木耳(auriculariaauricula)别名为木耳、耳子、云耳和细木耳等，属真菌门、担子菌亚门、担子菌纲、木耳目、木耳科、木耳属。它营养丰富，食味鲜美，不但是营养价值很高的食用菌，而且是药用价值较高的药用菌，是世界公认的保健品。现代医学研究认为黑木耳具有降压、调脂、保肝和改善肾功能等功效，是中医药食疗心脑血管疾病、高脂血症、便秘的代表性食物。
高脂血症是指人体内脂质代谢异常，是指血液中一种或多种物质成分异常增高的病症，它能直接导致动脉粥样硬化等心脑血管疾病。高血脂症又是诱发冠心病、动脉硬化、脑血管性痴呆、脂肪肝、糖尿症、肥胖症、性功能衰退等病症的重要因素。因此，控制和调节血脂水平是预防和治疗高血脂病及其并发症的关键。中药治疗高血脂具有多途径、多环节、多靶点作用,在提高生活质量、逆转靶器官损害、减少并发症发生及治疗难治性高血压方面都具有独特的优势。
目前国内外专家对黑木耳的化学成分研究表明:黑木耳含有多糖类、腺苷、黑色素、麦角甾醇、萜类及多种维生素等化学成分。前期，相关研究报道主要集中在多糖类物质的功能作用，近年也有有关黑木耳多酚类物质的研究报道。它们能降低血清总胆固醇和甘油三酯的水平，预防动脉粥样硬化斑块形成，从而可明显降低心血管疾病的发病率和死亡率。韩春然等报道黑木耳多糖能显著降低高脂大鼠血清的tg、tc和ldl-c水平，并能显著提高hdl-c/tc。蔡小玲等对黑木耳多糖和红菇多糖进行降胆固醇作用研究，结果表明黑木耳有显著降低胆固醇作用。周国华等采用不同浓度黑木耳多糖对高脂模型小鼠进行试验，试验结果表明黑木耳多糖确具有显著降血脂作用。郭素芬等通过研究证明黑木耳多糖还可抑制血管平滑肌细胞的增殖，从而抑制动脉粥样硬化形成。刁小琴等研究了超声辅助提取黑木耳多酚及其抑菌活性的研究，陈钢等研究了黑木耳中多酚化合物微波提取工艺的研究。近年来，临床已有较多的含黑木耳的复方用于治疗高脂血症，而单用黑木耳用于制备治疗或辅助治疗高脂血症药物也已有发明专利，如：(1)一种具有降血脂功效的黑木耳超微速溶冲剂(专利申请号:201510295259.8)；(2)一种黑木耳多糖片(专利申请号：201310564263.0)；(3)一种降脂、预防脂肪肝的功能食品(专利申请号：201310629794.3)。与以上专利相比，本专利的不同之处在于黑木耳提取物的成分不同，主要由三萜类化合物组成，是一种新型主要功能是调脂保健类药物成分，本发明者除考察了其有效性外，发现此黑木耳提取物有较高安全性。故本发明具有经济、可开发的可行性。
技术实现要素：
本发明公开了一种具有降血脂作用的黑木耳三萜类化合物提取物及其在制备降血脂药物及保健食品中的应用。
该黑木耳三萜类化合物提取物对肝脏血清总胆固醇(tc)、低密度脂蛋白(ldl-c)有一定降低作用，而对甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白(hdl-c)有调节、平衡的作用。
该黑木耳三萜类化合物提取物由以下方法制备得到:黑木耳经机械粉碎，过筛，用8-15倍黑木耳重量的65％乙酸乙酯溶液进行热回流提取，同时采用超声波辅助加热回流提取，超声功率：200-800w，超声温度：25-55℃，超声时间：15-30min，超声处理1-3次，60-90℃热回流提取1-3次，每次1-2h，合并提取液，抽滤，取上清液，减压回收溶剂，即得黑木耳三萜类化合物提取物。
该黑木耳提取物含有以下有效成分:羽扇豆醇、羽扇豆酮、β-香树酯醇和α-香树酯酮等，三萜类化合物占总提取物的85-95％。
本发明所述黑木耳提取物可按常规工艺制成调脂保健食品及药品，包括胶囊、片剂、颗粒剂、酒剂、口服液等常规剂型。
具体实施方式
下面详细说明本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。
本发明公布了作为黑木耳提取物作为降血脂药物的制备方法和药效试验。制备方法采用了两个实施例；药效学实验采用了高脂饲料致高脂血症模型证明其药效。
本发明的制备方法如下:
实施例一：
取黑木耳粗粉(过50目筛)，用8倍黑木耳重量的65％乙酸乙酯溶液进行热回流提取，同时采用超声波辅助加热回流提取，超声功率：400w，超声温度：35℃，超声时间：15min，超声处理1次，70℃热回流提取2次(1h，lh)，合并2次提取液，抽滤，上清液减压回收乙酸乙酯，得棕黄色状液体，即为黑木耳三萜类化合物提取物。
实施例二：
取黑木耳粗粉(过60目筛)，用15倍黑木耳重量的65％乙酸乙酯溶液进行热回流提取，同时采用超声波辅助加热回流提取，超声功率：800w，超声温度：55℃，超声时间：30min，超声处理2次，80℃热回流提取2次(2h，2h)，合并2次提取液，抽滤，上清液减压回收乙酸乙酯，得棕黄色状液体，即为黑木耳三萜类化合物提取物。
降血脂药效试验如下:
实施例三：
黑木耳提取物对高脂饲料致spf级雌性icr小鼠高脂血症模型的血脂(tc、tg、ldl-c、hdl-c)具有显著降低作用。
1实验材料与仪器
1.1动物
spf级雌性icr小鼠，60只，体重20士2g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号scxk(湘)2011-0003。
1.2试剂
高脂饲料由普通饲料、蛋黄粉、胆固醇、猪油、3号胆盐配制，制作原料:蛋黄粉(批号20150902,杭州诚信医疗仪器有限公司)；3号胆盐(批号20150722-10，杭州诚信医疗仪器有限公司)；胆固醇(批号20150324，杭州诚信医疗仪器有限公司)；猪油(批号20150917，杭州诚信医疗仪器有限公司)；普通饲料(江苏南通特洛菲饲料科技有限公司)；总胆固醇(tc)、甘油三酷(tg)、高密度脂蛋白(hdl-c)、低密度脂蛋白(ldl-c)(均购于中生北控生物公司)。
1.3仪器
全自动生化分析仪(美国alcyon公司)；tgl-20m高速台式冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；lgj-18型真空冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂)；al104电子天平(瑞士梅特勒公司)；
2实验方法
2.1造模、分组及给药
先将icr小鼠饲养一周，喂饲正常饲料，自由采水、采食。1周后按体重随机分成6组，即正常对照组，模型对照组，阳性对照组，黑木耳提取物小、中、大剂量组。除正常对照组喂饲普通饲料外，其余各组均喂饲高脂饲料，各组动物自由采水、采食。试验周期为12周。动物实验开始后，黑木耳提取物及血脂康均按体重剂量进行灌胃，正常对照组和模型对照组采用蒸馏水进行灌胃。连续12周。
每三周采血一次，给药后晚上开始禁食，禁食12-14h，不限饮水，次日眼眶取血，测定tc、tg、hdl-c、ldl-c含量；在实验结束时，动物给药后禁食12-14h，不限饮水，摘眼球采血，测定tc、tg、hdl-c、ldl-c含量。
2.2测定指标
每三周采血一次，测量各组icr小鼠血清血脂水平：总胆固醇(tc)、甘油三酷(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)的含量。
2.3统计分析
研究数据用spss17.0软件分析，计量资料数据结果均采用均数士标准差(x士s)表示，组间差异采用单因素方差分析，以p<0.05为差异有统计学意义。
3实验结果
3.1黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠tc的影响
由表1可知，在喂饲高脂饲料3周时，模型对照组的tc含量与正常对照组相比显著增高(p<0.05)，与正常对照组相比模型对照组血清tc含量升高85％，说明喂养高脂饲料3周即可造成小鼠的高胆固醇模型。试验同时发现，造模成功后继续给予高脂饲料对模型组小鼠的血清tc无明显升高，而是稳定在一定的高水平。与模型组相比，黑木耳三萜类化合物提取物及血脂康各组对icr小鼠血清tc的浓度升高都有显著抑制作用(p<0.05)，并且随着试验时间的延长，各给药组血清中tc都呈继续下降的趋势，并呈量效关系。
表1黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠tc的影响(n＝10)
注:同一列中上标有不相同字母的数据之间有显著性差异(p<0.05)。
3.2黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠tg的影响
由表2可知,在喂饲高脂饲料3周时,模型对照组的tg含量与正常对照组相比显著增高(p<0.05)。试验同时发现，与模型组相比，黑木耳三萜类化合物提取物及血脂康各组对icr小鼠血清tg的浓度升高都有显著抑制作用(p<0.05)，并且随着试验时间的延长，黑木耳三萜类化合物提取物高剂量组icr小鼠中血清中tg含量与正常对照组没有显著差异(p<0.05)，这说明了黑木耳三萜类化合物提取物具有强的调节血清中tg含量，也暗示黑木耳三萜类化合物提取物具有更强的保护生物体内脏器官不受脂肪损害的功能作用。
表2黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠tg的影响(n＝10)
注:同一列中上标有不相同字母的数据之间有显著性差异(p<0.05)。
3.3黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠ldl-c的影响
由表3可知,在喂饲高脂饲料3周时,模型对照组的ldl-c含量与正常对照组相比显著增高(p<0.05)。试验同时发现，与模型组相比，黑木耳三萜类化合物提取物及血脂康各组对icr小鼠血清ldl-c的浓度升高都有显著抑制作用(p<0.05)，并且随着试验时间的延长，各给药组血清中ldl-c都呈逐渐上升的趋势，并呈量效关系。说明黑木耳三萜类化合物具有抑制ldl-c上升的功能作用。表3黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠ldl-c的影响(n＝10)
注:同一列中上标有不相同字母的数据之间有显著性差异(p<0.05)。
由表4可知，所有喂饲高脂饲料的icr小鼠血清的hdl-c均显著高于喂饲普通饲料的icr小鼠(p<0.05)，在经过12周的试验发现：黑木耳三萜类化合物提取物各组调节hdl-c水平的能力比较稳定，且两者间没有显著差异。这说明食用黑木耳是安全的，它不会降低生物体血液中正常hdl-c的含量，而是调节生物体血液中hdl-c的含量。
表4黑木耳三萜类化合物提取物对喂饲高脂饲料icr小鼠hdl-c的影响(n＝10)
注:同一列中上标有不相同字母的数据之间有显著性差异(p<0.05)。
本实施例显示：黑木耳三萜类化合物提取物对血清tc、ldl-c有一定降低作用，对tg、hdl-c有调节、平衡的作用。说明黑木耳三萜类化合物具有调节血脂的作用。
综上说明：黑木耳三萜类化合物提取物具有降低血脂的作用。在降低血脂方面有很大的开发空间，可开发为调脂保健食品及药品等。