本发明属于中药制剂领域，具体涉及刺梨总黄酮滴丸，特别涉及一种以刺梨总黄酮固体分散体为中间体制备的滴丸，本发明还涉及所述刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备方法。
背景技术：
：刺梨(rosaroxburghiitratt.)又名茨梨、木梨子，为蔷薇科多年生落叶丛生灌木缫丝花的果实，主要分布在我国贵州、云南等西南省份，其中贵州资源最为丰富。刺梨果具有独特的芳香味，兼具营养和医疗价值，素有“三王水果”之称。据研究报道，刺梨具有健胃、消食、滋补，止泻等功效；亦有提高免疫力、延缓衰老、和防癌抗癌等作用。固体分散体是将药物高度分散在另一固体载体中的新技术。固体分散体能够将药物高度分散，形成分子、胶体、微晶或无定形状态，若载体材料为水溶性的，可大大改善药物的溶出与吸收，从而提高其生物利用度，成为一种制备高效、速效制剂的新技术，若将药物采用难溶性或肠溶性载体材料制成固体分散剂，可使药物具有缓释或肠溶特性，可降低药物的毒副作用。滴丸剂是指固体或液体药物与基质加热熔化混匀后，滴入不相混熔的冷凝剂中，收缩冷凝而制成的剂型。通过选择不同的基质，可以使药物快速溶出，所以有溶出快、生物利用度高、疗效好、副作用小、药物稳定性好以及制备简单、质量易控制等特点，制成的滴丸剂可供内服、外用和局部使用，也可制成缓控释制剂，是一种有良好发展前景的剂型。现有技术中未见刺梨分散体特别是刺梨滴丸的报道。技术实现要素：为了解决现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种刺梨总黄酮固体分散体滴丸，首先将刺梨总黄酮制成固体分散体，增加刺梨总黄酮的溶解度，然后以刺梨总黄酮固体分散体为中间体制备成固体分散体滴丸，从而增加刺梨总黄酮体内生物利用度，提高其疗效，同时提高了刺梨总黄酮的稳定性、并且制剂的质量容易控制，携带和服用的便利性也大大提高了。较为具体地：本发明提供了一种刺梨总黄酮提取物，所述刺梨总黄酮提取物的制备方法包括以下步骤：(1)将干燥的刺梨果粉碎过16-100目筛成粗粉；(2)将所述刺梨的粗粉装入提取装置内，以体积分数为40-80％的含水乙醇为溶剂，浸泡1-6小时，然后进行回流提取1-4h；(3)过滤，减压浓缩回收乙醇，得浓缩液；(4)所述浓缩液用蒸馏水稀释后，通过大孔树脂以30％-70％乙醇进行洗脱；(5)洗脱液进行回收溶剂浓缩，水浴蒸干浓缩液，真空干燥，研碎，过60-100目筛，即得刺梨总黄酮提取物干粉。其中，优选地，(2)中所述含水乙醇的用量为8-20l/kg；优选地，(4)中所述大孔树脂为ab-8，d101中的一种。优选地，所述刺梨总黄酮提取物的制备方法包括以下步骤：(1)将干燥的刺梨果粉碎过80目筛成粗粉；(2)将所述刺梨的粗粉装入提取装置内，以体积分数为50％的含水乙醇为溶剂，浸泡4小时，然后进行回流提取3h；(3)过滤，减压浓缩回收乙醇，得浓缩液；(4)所述浓缩液用蒸馏水稀释后，通过大孔树脂以40％乙醇进行洗脱；(5)洗脱液进行回收溶剂浓缩，水浴蒸干浓缩液，真空干燥，研碎，过80目筛，即得刺梨总黄酮提取物干粉。其中，优选地，(2)中所述含水乙醇的用量为15l/kg；优选地，(4)中所述大孔树脂为ab-8。本发明还提供了一种刺梨总黄酮固体分散体，所述刺梨总黄酮固体分散体的制备包括以下步骤：(i)称取合适重量比的刺梨总黄酮和载体材料；(ii)加入有机溶剂，加热，搅拌使其混合均匀，保温；(iii)蒸发溶剂，干燥，过筛；其中优选地，(i)中刺梨总黄酮和载体材料的配比为按照1-8:0.1-12的重量比；优选地，(i)中所述载体材料可以为高分子聚合物、表面活性剂、糖和有机酸其中的一种或几种载体材料的联合，更优选地，包括：聚乙二醇(peg)、聚维酮(pvp)、泊洛沙姆188、磷脂、聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠(sds)、司盘80、尿素、枸橼酸、酒石酸、甘露糖醇、木糖醇中的一种或多种按照任意比例组成的混合物；优选地，(ii)中所述有机溶剂为乙醇、丙酮、二氯甲烷、由乙醇:二氯甲烷按1:1体积比组成的混合物，乙醇:丙酮按1:1体积比组成的混合物；优选地，(ii)中刺梨总黄酮与加入溶剂的比例为10-40:1，以毫克每毫升计；优选地，(ii)中所述的反应温度和反应时间分别为40-80℃和30-120min；优选地，(iii)中所述喷雾干燥的参数为：进风温度40-160℃，喷雾速度1-12ml/min，喷雾压力0.1-0.686kpa，出风温度50-80℃。可选地，所述刺梨总黄酮固体分散体的制备包括以下步骤：称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30按照重量比为1:2混合，加入40ml由乙醇:二氯甲烷＝1:1(v/v)组成的溶剂，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛。可选地，所述刺梨总黄酮是上文所述的任一种刺梨总黄酮提取物。本发明还提供了一种刺梨总黄酮滴丸，包括以下各成分：刺梨总黄酮固体分散体、水溶性基质。可选地，所述刺梨总黄酮固体分散体是上文所述的任一种刺梨总黄酮固体分散体。可选地，所述刺梨总黄酮滴丸的制备方法包括以下步骤：(a)称取刺梨总黄酮固体分散体，水溶性基质；(b)将所述水溶性基质熔化成液体，制备熔融基质；(c)将所述刺梨总黄酮固体分散体加入步骤(b)的所述熔融基质中，高速搅拌，制备熔融药液；(d)将所述熔融药液滴入冷凝介质中，待收缩成丸后，去掉表面冷却剂，干燥即得；其中优选地，(a)所述水溶性基质为peg4000或peg6000中的一种或两种混合；优选地，(a)所述刺梨总黄酮固体分散体和所述水溶性基质的重量比为1:1-1:6；优选地，(b)所述熔化是采用水浴、油浴或其它加热方式，加热温度为50-100℃；优选地，(c)所述高速搅拌的转速是1000-2000r/min；优选地，(d)将所述熔融药液滴入所述冷凝介质中的步骤为，将熔融药液在60-80℃温度下，选择直径2-4mm的滴头，滴距2-8cm，以30-60滴/分钟的滴速滴入温度为-5-10℃的冷凝介质中；优选地，(d)所述冷凝介质为二甲基硅油、液体石蜡或植物油中的一种；更优选地，所述的基质为peg4000:peg6000＝1:1的混合物；更优选地，所述刺梨总黄酮固体分散体和所述水溶性基质的比例为1:2的重量比；更优选地，加热采用70℃水浴加热；更优选地，在熔融过程中采用1500r/min的速度搅拌；更优选地，在滴制过程中采用70℃温度加热；更优选地，在滴制过程中采用直径为3mm的滴头；更优选地，在滴制过程中采用滴距6cm的滴距；更优选地，在滴制过程中采用50滴/分钟的滴速；更优选地，在滴制过程中冷凝介质采用5℃二甲基硅油。可选地，所述刺梨总黄酮滴丸的制备方法主要包括以下步骤：称取2g由peg4000:peg6000＝1:1(w/w)组成的水溶性基质至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔化的液体中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将所述熔融药液在70℃温度下，用直径为3mm的滴头，滴距6cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥。本发明还提供了上文所述任一种刺梨总黄酮提取物，上文所述任一种刺梨总黄酮固体分散体，或上文所述任一种刺梨总黄酮滴丸，在治疗、预防或减缓心血管疾病中的用途或降低血脂中的用途。本发明技术方案与现有技术相比，具有以下增益效果：(1)以水溶性基质为载体材料，将刺梨总黄酮制成固体分散体滴丸，有效增加了刺梨总黄酮与溶出介质的接触面积，从而改善其水溶性，提高了溶解度和溶出速率。(2)刺梨总黄酮固体分散体直接在熔融状态滴注成滴丸，该技术容易实现工业化生产。(3)有效地降低大鼠血清tc、tg含量。(4)有效地抗大鼠心肌缺血。附图说明图1示出了刺梨总黄酮原料、刺梨总黄酮固体分散体、刺梨总黄酮固体分散体滴丸中总黄酮累计溶出率随时间的变化曲线。具体实施方式为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合附图详细介绍本发明的各个实施例。以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的固定或限制。若未特别指明，实施例中所用的技术特征可以替换为具有在不背离发明构思前提下等同或相似功能或效果的其他本领域已知的技术特征。提取例：刺梨总黄酮粉末的制备刺梨总黄酮制作方法主要包括以下步骤：(1)将干燥的刺梨果粉碎过80目筛成粗粉；(2)将刺梨粗粉装入提取装置内，以体积分数为50％的含水乙醇为溶剂，浸泡4小时，然后进行回流提取3h；(3)过滤，减压浓缩回收乙醇，得浓缩液；(4)浓缩液用蒸馏水稀释后，通过大孔树脂以40％乙醇进行洗脱；(5)洗脱液进行回收溶剂浓缩，水浴蒸干浓缩液，真空干燥，研碎，过80目筛，即得刺梨总黄酮提取物(干粉)。其中，(2)所述含水乙醇的用量为15l/kg；(4)所述大孔树脂为ab-8。实施方式1：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式2：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和4gpvp-30(重量比为1:4)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式3：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和0.5gpvp-30(重量比为1:0.5)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式4：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和3gpvp-30(重量比为1:3)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式5：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取2g刺梨总黄酮粉末和5gpvp-30(重量比为2:5)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式6：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入25ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式7：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入31ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式8：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入36ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式9：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入50ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度80℃，喷雾速度5ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式10：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度50℃，喷雾速度3ml/min，喷雾压力0.55kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式11：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度100℃，喷雾速度1ml/min，喷雾压力0.35kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式12：刺梨总黄酮固体分散体的制备称取1g刺梨总黄酮粉末和2gpvp-30(重量比为1:2)，加入40ml溶剂(乙醇:二氯甲烷＝1:1，v/v)，加热至55℃，保温并搅拌，直至溶液澄明，喷雾干燥除去溶剂，参数设定为进风温度90℃，喷雾速度7ml/min，喷雾压力0.60kpa，出风温度60℃，过筛，即得。实施方式13：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为3mm的滴头，滴距6cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。载体材料也可称为水溶性基质。实施方式14：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取3g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1200转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为3mm的滴头，滴距6cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式15：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取4g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1000转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为3mm的滴头，滴距6cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式16：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取1g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为3mm的滴头，滴距6cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式17：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为2mm的滴头，滴距3cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式18：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为4mm的滴头，滴距8cm，以50滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式19：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为4mm的滴头，滴距8cm，以30滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式20：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为4mm的滴头，滴距8cm，以60滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的二甲基硅油中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式21：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为4mm的滴头，滴距8cm，以60滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的液体石蜡中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式22：刺梨总黄酮固体分散体滴丸的制备称取2g载体材料(peg4000:peg6000＝1:1，w/w)至烧杯中，70℃水浴熔化成液体，维持温度，将本发明实施例1制备的1g刺梨总黄酮固体分散体研粹，加入上述熔融的基质中，1500转/分钟高速搅拌分散，制备熔融药液，将上述药液在70℃温度下，用直径为4mm的滴头，滴距8cm，以60滴/分钟的滴速滴入温度为5℃的液体石蜡中，成丸后，甩油，擦拭，干燥即得。实施方式23-体外溶出度试验以下试验中的刺梨总黄酮原料、刺梨总黄酮固体分散体、刺梨总黄酮固体分散体滴丸均为实验室自制。1、试验方法药物体外溶出度参照《中国药典》2015版，采用浆法进行测定，分别取本发明实施例1所制备的刺梨总黄酮固体分散体200mg、实施例13所制备的刺梨总黄酮固体分散体滴丸300mg和提取例所制备的刺梨总黄酮原料100mg，以脱气的去离子水为溶出介质，转速为100r/min，温度为(37±0.5)℃，依上述方法测定，分别于5,10,20,30,40,50,60,90min取样5ml，并迅速补充5ml同温度的溶出介质，样品用0.45μm的微孔滤膜过滤，续滤液用水稀释后紫外分光光度法测定，计算累积溶出率，绘制时间-累积溶出率曲线。2、实验结果表1总黄酮原料、其固体分散体与固体分散体滴丸累计溶出率对照表结果如图1所示，刺梨固体分散体和刺梨固体分散体滴丸均能提高刺梨总黄酮的体外溶出度，但将刺梨固体分散体制成滴丸剂后比单纯的刺梨总黄酮固体分散体对总黄酮的溶出度提高的程度要大，具体为刺梨总黄酮原料在50min左右即达到溶出平衡，为40.6％，刺梨总黄酮固体分散体在60min左右达到溶出平衡，为71.3％，而刺梨总黄酮固体分散体总黄酮滴丸在90min左右达到溶出平衡，为87.8％，因此本发明的技术对于提高刺梨总黄酮的溶解度具有显著的增益作用。本发明的药物用途可通过下面药效学实验进一步验证，刺梨固体分散体(clsd)和刺梨固体分散体滴丸(cldp)中总黄酮含量均大于50％。药效实验例1clsd对高脂模型小鼠降血脂的药效学实验一、实验材料以下所述clsd为本发明试验例1-12所得产品。1.药品与试剂总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)试剂盒、高密度脂蛋白-胆固醇(hdl-c)试剂盒、肝功能检测试剂盒购自上海科欣生物技术研究所；血脂康胶囊由上海旭东海普药业有限公司；clsd和血脂康胶囊的内容物临用前均以蒸馏水配制成所需浓度的药液。2.动物实验动物sd大鼠，72只，雌雄各半，体重140～180g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供。3.高脂饲料配方蛋黄粉12％、蔗糖15％、15％猪油、1.5％胆固醇、0.2％胆酸钠、常规饲料56.3％。二、实验方法1.动物分组取sd大鼠72只，按体重随机分为：正常对照组、高脂模型组、阳性对照药血脂康胶囊组(150mg/kg，药物/大鼠体重)、clsd高剂量组(300mg/kg，药物/大鼠体重)、中剂量组(150mg/kg，药物/大鼠体重)和低剂量组(80mg/kg，药物/大鼠体重)共6组，每组12只，雌雄各半；在本实验例中，血脂康胶囊每粒中药物(红曲)含量以洛伐他汀(c24h36o5)计，含有2.5mg，血脂康胶囊的用量按照相当于洛伐他汀的重量来计算，clsd按照实施方式1所制备的产品的重量计算。2.动物饲养及取样实验过程中，正常对照组动物饲以常规饲料，其他各组动物均饲以高脂饲料。实验动物每天上午灌胃给药1次，灌胃体积均为40ml/kg。正常对照组及高脂模型组动物灌胃蒸馏水，给药组分别灌胃相应的药物溶液，连续给药2周，最后1次给药当晚开始，动物禁食不禁水16小时后，次日用电子天平进行称重并记录，眼球取血0.5ml，离心(10000r/min)分离血清；采用酶比色法测定血清总胆固醇(tc)、血清甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白(hdl-c)含量。三、实验结果实验结果以均数±标准差(x±s)表示，采用spss20.0统计软件利用方差分析的方法进行分析，p＜0.05判断为具有统计学意义表1对大鼠生长发育(体重)的影响(n＝12，x±s)剂量组试验前/g试验后/g增重/g正常对照组152±9350±28195±40高脂模型组155±9381±28228±30血脂康胶囊组154±11365±38223±40clsd高剂量组152±9375±28199±38clsd中剂量组155±10368±47212±42clsd低剂量组156±10357±41200±44由表1可知，各组的大鼠随着试验时间延长，体重均有不同程度的增加，各组大鼠生长正常，但不同clsd剂量组在试验前、后其所受试大鼠的体重与高脂对照组比较，差异不显著性(p＞0.05)，试验前后体重增长也无显著性变化，说明clsd对大鼠体重的影响与血脂康胶囊近似。表2对大鼠血清tc、tg、hdl-c含量的影响(n＝12，x±s)与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05，**p<0.01由表2可知，实验前各组大鼠血清tc、tg、hdl-c含量基本一致，各组间的差异无统计学意义(p>0.05)，给药结束后，高脂模型组tc、tg含量高于正常对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，表明高血脂模型成立；同时clsd各剂量组大鼠的tc含量均低于高脂模型组，与高脂模型组比较差异有统计学意义(p<0.05)；clsd三个剂量组大鼠的tg含量均低于高脂对照组，与高脂对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)；clsd三个剂量组的hdl-c值均比高脂对照组高，但没有统计学意义(p>0.05)。四、实验结论以上实验结果表明clsd具有降低高血脂模型大鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量的作用，对高密度脂蛋白含量的作用与现有技术中的阳性对照组相当。药效实验例2clsd抗大鼠心肌缺血的药效学实验一、实验材料以下所述clsd为本发明实施方式1所得产品。1.药品与试剂天门冬氨酸氨基转移酶(ast)试剂盒、乳酸脱氢酶(ldh)试剂盒、激酸激酶(ck)试剂盒由南京海克尔生物科技有限公司生产；超氧化物歧化酶(sod)试剂盒、丙二醛(mda)试剂盒由上海索宝生物科技有限公司生产；复方丹参片(0.8g/片)由北京同仁堂股份有限公司制药厂提供；复方丹参片和clsd临用前均以蒸馏水配制成所需浓度的溶液。2.动物实验动物wistar大鼠，72只，雌雄各半，体重220～260g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供二、实验方法1.动物分组取wistar大鼠72只，按体重随机分为：假手术对照组、模型对照组、阳性对照药复方丹参片组(120mg/kg，药物/大鼠体重)、clsd高剂量组(200mg/kg，药物/大鼠体重)、中剂量组(120mg/kg，药物/大鼠体重)和低剂量组(50mg/kg，药物/大鼠体重)共6组，每组12只，雌雄各半。在本实验例中，复方丹参片为符合药典规定的薄膜衣大片，每片相当于饮片(按重量计算，丹参：三七：冰片＝450：141：8)1.8g，复方丹参片的用量按照相当于饮片的重量来计算，clsd按照实施方式1所制备的产品的重量计算。2.动物饲养及取样以上各组均灌胃给药，具体给药剂量为假手术对照组给予氯化钠溶液(生理盐水)12ml/kg；模型对照组给予生理盐水12ml/kg；阳性对照组给予复方丹参片120mg/kg(2.0％)；clsd小剂量组50mg/kg(0.3％)；clsd中剂量组120mg/kg(1.2％)；clsd大剂量组200mg/kg(2.0％)，连续给药5d，于末次给药60min后按文献方法[1]进行冠状动脉结扎手术，，采取冠状动脉作前降支结扎48h，制备心肌缺血模型，48h后进行腹主动脉取血0.5ml，离心(10000r/min)，测定相应生化指标的值(ck、ldh、ast、sod、mda)。[1]耿涛，谢梅林，彭少平.桃仁提取物抗大鼠心肌缺血作用的研究[j].苏州大学学报(医学版)，2005,25(2)：238-240.三、实验结果1.对心肌缺血大鼠血清酶含量的影响表3clsd对心肌缺血大鼠血清酶含量的影响(n＝12，x±s)与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05，**p<0.01由表3可知，模型组大鼠血清ck、ldh、ast与假手术组相比，均明显升高，ck含量假手术组为339.68±54.31u/l，模型组为624.92±43.58u/l(p<0.01)，ldh含量假手术组为357.64±64.27u/l，模型组为856.77±44.87u/l(p<0.01),ast含量假手术组为174.66±34.75u/l，模型组为318.87±55.23u/l(p<0.01),表明抗心肌缺血动物模型成立；clsd高剂量、中剂量组与模型组比较，ck含量明显降低，有显著性差异，p＜0.01；clsd低剂量组与模型组比较，血清ck含量虽然有下降趋势，但统计学无明显差异(p＞0.05)；clsd各剂量组大鼠的ldh含量均低于模型组，但clsd高剂量、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(p＜0.05)，clsd低剂量组的ldh含量与模型组比较虽有降低，但无统计学意义(p>0.05)；clsd各剂量组大鼠的ast含量均低于模型组，但clsd高剂量、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(p＜0.05)，clsd低剂量组的ldh含量与模型组比较虽有降低，但无统计学意义(p>0.05)；表4clsd对心肌缺血大鼠血清sod、mda活性的影响组别剂量(mg/kg)sod(u/ml)mda(nmol/ml)假手术组—89.38±5.134.75±0.83模型组—66.72±3.85##7.09±0.77##阳性药物组21085.71±7.254.98±0.76clsd-高20083.66±5.73*5.26±0.26*clsd-中12080.97±5.98*5.53±0.39*clsd-低5069.64±8.526.85±0.24与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05，**p<0.01由表4可知，模型组血清sod活性明显低于假手术组，而mda含量明显高于假手术组，均有统计学意义，p＜0.05；clsd高、中剂量组与模型组比较，血清的sod活性明显升高，mda含量明显降低，有显著性差异，p＜0.05；而clsd低剂量组与模型组比较，血清sod、mda含量无明显差异(p＞0.05)。四、结论clsd高、中剂量组能显著降低实验性心肌缺血时释放的心肌三酶血清含量，减轻心肌组织损伤；同时clsd高、中剂量组能减少实验性心肌缺血时血清中mda的含量，增加sod含量。药效实验例3cldp对高脂模型小鼠降血脂的药效学实验一、实验材料以下所述cldp为本发明实施方式13所得产品。1.药品与试剂总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)试剂盒、高密度脂蛋白-胆固醇(hdl-c)试剂盒、肝功能检测试剂盒购自上海科欣生物技术研究所；血脂康胶囊由上海旭东海普药业有限公司；cldp和血脂康胶囊内容物临用前均以蒸馏水配制所需浓度的溶液。2.动物实验动物sd大鼠，72只，雌雄各半，体重140～180g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供3.高脂饲料配方蛋黄粉12％、蔗糖15％、15％猪油、1.5％胆固醇、0.2％胆酸钠、常规饲料56.3％。二、实验方法1.动物分组取sd大鼠72只，按体重随机分为：正常对照组、高脂模型组、阳性对照药血脂康胶囊组(150mg/kg，药物/大鼠体重)、cldp高剂量组(300mg/kg，药物/大鼠体重)、中剂量组(150mg/kg，药物/大鼠体重)和低剂量组(80mg/kg，药物/大鼠体重)共6组，每组12只，雌雄各半；在本实验例中，血脂康胶囊每粒中药物(红曲)含量以洛伐他汀(c24h36o5)计，含有2.5mg，血脂康胶囊的用量按照相当于洛伐他汀的重量来计算，clsd按照实施方式1所制备的产品的重量计算。2.动物饲养及取样实验过程中，正常对照组动物饲以常规饲料，其他各组动物均饲以高脂饲料。实验动物每天上午灌胃给药1次，灌胃体积均为40ml/kg。正常对照组及高脂模型组动物灌胃蒸馏水，给药组分别灌胃相应的药物溶液，连续给药2周，最后1次给药当晚开始，动物禁食不禁水16小时后，次日用电子天平进行称重并记录，眼球取血0.5ml，离心(10000r/min)分离血清；采用酶比色法测定血清总胆固醇(tc)、血清甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白(hdl-c)含量。三、实验结果实验结果以均数±标准差(x±s)表示，采用spss20.0统计软件利用方差分析的方法进行分析，p＜0.05判断为具有统计学意义表5对大鼠生长发育(体重)的影响(n＝12，x±s)剂量组试验前/g试验后/g增重/g正常对照组151±5348±23197±28高脂模型组153±7363±26210±34血脂康胶囊组157±8363±31204±30cldp高剂量组155±6372±25217±34cldp中剂量组152±11371±33219±27cldp低剂量组154±9362±39208±54由表5可知，各组的大鼠随着试验时间延长，体重均有不同程度的增加，各组大鼠生长正常，但不同cldp剂量组在试验前、后其所受试大鼠的体重与高脂对照组比较，差异不显著性(p＞0.05)，试验前后体重增长也无显著性变化，说明cldp对大鼠体重的影响不明显。表6对大鼠血清tc、tg、hdl-c含量的影响(n＝12，x±s)与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05由表6可知，实验前各组大鼠血清tc、tg、hdl-c含量基本一致，各组间的差异无统计学意义(p>0.05)，给药结束后，高脂对照组tc、tg含量高于基础对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，表明高血脂模型成立；同时cldp各剂量组大鼠的tc含量低于高脂对照组，与高脂对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)；clsd三个剂量组大鼠的tg含量低于高脂对照组，与高脂对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)；cldp三个剂量组的hdl-c值均比高脂对照组高，但没有统计学意义(p>0.05)。四、实验结论以上实验结果表明cldp具有降低高血脂模型大鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量的作用，对hdl-c与现有技术中的阳性对照组相当。药效实验例4cldp抗大鼠心肌缺血的药效学实验一、实验材料以下所述cldp为本发明实施方式13所得产品。1.药品与试剂天门冬氨酸氨基转移酶(ast)试剂盒、乳酸脱氢酶(ldh)试剂盒、激酸激酶(ck)试剂盒由南京海克尔生物科技有限公司生产；超氧化物歧化酶(sod)试剂盒、丙二醛(mda)试剂盒由上海索宝生物科技有限公司生产；复方丹参片由北京同仁堂股份有限公司制药厂提供；复方丹参片和cldp临用前均以蒸馏水配制成所需浓度的溶液。2.动物实验动物wistar大鼠，72只，雌雄各半，体重220～260g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供二、实验方法1.动物分组取wistar大鼠72只，按体重随机分为：假手术对照组、模型对照组、阳性对照药复方丹参片组(120mg/kg，药物/大鼠体重)、cldp高剂量组(200mg/kg，药物/大鼠体重)、中剂量组(120mg/kg，药物/大鼠体重)和低剂量组(50mg/kg，药物/大鼠体重)共6组，每组12只，雌雄各半。在本实验例中，复方丹参片为符合药典规定的薄膜衣大片，每片相当于饮片(按重量计算，丹参：三七：冰片＝450：141：8)1.8g，复方丹参片的用量按照相当于饮片的重量来计算，clsd按照实施方式1所制备的产品的重量计算。2.动物饲养及取样以上各组均灌胃给药，具体给药剂量为假手术对照组给予氯化钠溶液(生理盐水)12ml/kg；模型对照组给予生理盐水12ml/kg；阳性对照组给予复方丹参片210mg/kg(2.0％)；cldp小剂量组50mg/kg(0.3％)；cldp中剂量组120mg/kg(1.2％)；cldp大剂量组200mg/kg(2.0％)，连续给药5d，于末次给药60min后按文献方法[1]进行冠状动脉结扎手术，采取冠状动脉作前降支结扎48h，制备心肌缺血模型，48h后进行股动脉腹主动脉取血0.5ml，离心(10000r/min)，测定相应生化指标的值(ck、ldh、ast、sod、mda)。[1]耿涛，谢梅林，彭少平.桃仁提取物抗大鼠心肌缺血作用的研究[j].苏州大学学报(医学版)，2005,25(2)：238-240.三、实验结果1.对心肌缺血大鼠血清酶含量的影响表7cldp对心肌缺血大鼠血清酶含量的影响(n＝12，x±s)与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05，**p<0.01由表7可知，模型组大鼠血清ck、ldh、ast与假手术组相比，均明显升高，ck含量假手术组为337.73±43.19u/l，模型组为608.54±56.37u/l(p<0.01)，ldh含量假手术组为348.46±68.72u/l，模型组为786.87±43.78u/l(p<0.01),ast含量假手术组为177.52±54.54u/l，模型组为339.78±73.32u/l(p<0.01),表明抗心肌缺血动物模型成立；cldp高剂量、中剂量组与模型组比较，ck含量明显降低，有显著性差异，p＜0.01；cldp低剂量组与模型组比较，血清ck含量虽然有下降趋势，但统计学无明显差异(p＞0.05)；cldp各剂量组大鼠的ldh含量均低于模型组，但cldp高剂量、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(p＜0.05)，cldp低剂量组的ldh含量与模型组比较虽有降低，但无统计学意义(p>0.05)；cldp各剂量组大鼠的ast含量均低于模型组，但cldp高剂量、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(p＜0.05)，cldp低剂量组的ldh含量与模型组比较虽有降低，但无统计学意义(p>0.05)；表8cldp对心肌缺血大鼠血清sod、mda活性的影响组别剂量(mg/kg)sod(u/ml)mda(nmol/ml)假手术组—91.54±4.314.95±0.62模型组—64.27±4.13##7.36±0.68##阳性药物组21084.17±8.265.28±0.49clsd-高20086.38±6.13*5.14±0.27*clsd-中12077.83±6.21*6.03±0.52*clsd-低5068.52±7.356.91±0.73与正常对照组比较##p<0.01，与模型组比较*p<0.05，**p<0.01由表8可知，模型组血清sod活性明显低于假手术组，而mda含量明显高于假手术组，均有统计学意义，p＜0.05；clsd高、中剂量组与模型组比较，血清的sod活性明显升高，mda含量明显降低，有显著性差异，p＜0.05；而clsd低剂量组与模型组比较，血清sod、mda含量无明显差异(p＞0.05)。四、结论cldp高、中剂量组能显著降低实验性心肌缺血时释放的心肌三酶血清含量，减轻心肌组织损伤；同时cldp高、中剂量组能减少实验性心肌缺血时血清中mda的含量，增加sod含量。以上各个实施例只是用于进一步说明本发明，并不是用来限制本发明的保护范围，凡是基于本发明的构思所作出的等同变换及对本发明的各个技术方案显而易见的改进，均落入本发明的保护范围。当前第1页12