本发明涉及一种色钉菇(chroogomphusrutilus)提取物，以及提取物在抗糖尿病药物及保健产品开发中的应用，属于药物制备技术领域。
背景技术：
糖尿病是一种综合性、代谢性、失控性的疾病，其并发症对于糖尿病患者的眼、胰脏、肾脏、肝脏等身体器官有不同程度的损害，危害非常大，其发病人数众多且发病率逐年升高。西药在抗糖药物市场所占比重最大，它的优点主要是降糖效果快而突出。目前的抗糖尿病药物，主要为成药、西药，这些药物虽然具有快速降糖的作用，但其副作用也不可小视，随着服药时间的增长，这些药物对于人体肝、肾等组织的损害会越来越大，所以从天然产物中去寻找一些低毒、高效、温和同时具有抗糖活性的“活性因子”是非常有意义的工作。天然产物性能温和，毒副作用低，而且天然产物可与药物共同发挥作用，这可以发挥药物更好的疗效。食用菌是天然产物大家族中重要的一员，营养物质的含量与种类都十分丰富，其蕴含的矿质元素种类、氨基酸种类、维生素种类等营养物质都极为丰富，含量非常高，食用菌的可塑性非常好，无论是作为食物，还是开发成药物，都有很大潜力。色钉菇(chroogomphusrutilus)为铆钉菇属，铆钉菇科，伞菌目，层菌纲，担子菌亚门，又名血红铆钉菇，老百姓称之为红蘑或肉蘑等。色钉菇一般生长在松树林中的杂草丛中，广泛分布于东北、华北地区。色钉菇营养十分丰富全面，它含有人体所需的蛋白质，膳食纤维，还有各种微量元素。至目前，色钉菇提取物抗糖尿病活性相关文献未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种色钉菇提取物，包括乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，或其混合物。
本发明的目的还在于提供所述提取物在制备抗糖尿病药物的应用。
本发明的再一目的是提供所述提取物在制备抗糖尿病保健食品的应用。
本发明的色钉菇提取物是通过以下方法得到的：
一、色钉菇乙醇提取物
取色钉菇子实体，去掉杂物，置于烘箱中干燥，控制烘箱的温度35-42℃，干燥24h后，利用粉碎机打碎，得到干粉，干粉用95％乙醇萃取，其中，控制干粉与乙醇比例，鸡腿菇干粉：95％乙醇＝(1：6)～(1:10)，搅拌4h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制温度不大于45℃，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程应当循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙醇提取物。
二、色钉菇石油醚提取物
将乙醇提取物或色钉菇子实体干粉与石油醚按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，并搅拌，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜，萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇石油醚提取物。
三、色钉菇乙酸乙酯提取物
色钉菇子实体干粉、乙酸乙酯按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，并搅拌，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜，萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙酸乙酯提取物。
本发明提供的制备色钉菇提取物的方法包括：色钉菇乙醇提取物的制备方法、色钉菇石油醚提取物的制备方法和色钉菇乙酸乙酯提取物的制备方法，分别如下:
一、色钉菇乙醇提取物的制备方法
取色钉菇子实体，去掉杂物，置于烘箱中干燥，控制烘箱的温度35-42℃，干燥24h后，利用粉碎机打碎，得到干粉，干粉用95％乙醇萃取，其中，控制干粉与乙醇比例，鸡腿菇干粉：95％乙醇＝(1：6)～(1:10)，搅拌4h后，静置过夜，然后将萃取液进行抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制温度不大于45℃，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程应当循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙醇提取物。
二、色钉菇石油醚提取物的制备方法
将乙醇提取物或色钉菇子实体干粉与石油醚按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，并搅拌，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜，萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇石油醚提取物。
三、色钉菇乙酸乙酯提取物的制备方法
色钉菇子实体干粉、乙酸乙酯按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，并搅拌，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜，萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏，为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次，产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙酸乙酯提取物。
本发明提供的色钉菇提取物在制备治疗糖尿病药物或保健食品的应用，通过以下方式实现：
一种色钉菇抗糖尿病药物组合物，其包含有效剂量的上述三种中任意一项所述的色钉菇提取物及药学上可接受的载体。
一种色钉菇抗糖尿病保健食品，其包含有效量的上述三种中任意一项所述的色钉菇提取物及食品添加剂。
经动物药效学实验证实，本发明的色钉菇提取物具有明确的降糖药效和抗糖尿病活性，在治疗糖尿病血脂代谢紊乱等方面疗效显著。
本发明的色钉菇提取物可以按常规方法制成药物组合物或保健食品，可以按照常规方法制成适当剂型，如片剂、胶囊剂、口服液、软胶囊、颗粒剂等固体或液体制剂。
本发明的色钉菇提取物或药物组合物以单位体重服用量的形式使用，使用量应根据患者年龄、体重、疾病类型和严重程度变化进行调整。
本发明的色钉菇提取物或药物组合物可以单独使用或相互配合使用，也可与其他药物或植物提取物组成复方形式使用。
本发明取得的有益效果如下：
色钉菇三种有机提取物可以明显抑制α-葡萄糖苷酶活性，对糖尿病小鼠具有明显的降糖降脂作用，可用于制备抗糖尿病药物，为糖尿病的治疗提供了新的药物选择。
附图说明
图1：色钉菇三种有机提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。
具体实施方式
下面的实施例用于说明本发明，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1色钉菇乙醇提取物的制备
仔细挑选色钉菇子实体，去掉杂物，置于烘箱中干燥，此时应特别注意烘箱温度，控制烘箱的温度在40℃左右，干燥24h后，利用粉碎机打碎，得到干粉，称重即可。干粉用95％乙醇萃取。此时的干粉乙醇比例，应控制鸡腿菇干粉：95％乙醇＝1：6～1:10之间，搅拌4h后，静置过夜。第二天将萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏。为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次。产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙醇提取物。
实施例2色钉菇石油醚提取物的制备
将乙醇提取物或色钉菇子实体干粉与石油醚按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，将浸膏搅拌起来，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜。萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏。为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次。产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇石油醚提取物。
实施例3色钉菇乙酸乙酯提取物的制备
将色钉菇子实体干粉与乙酸乙酯按质量体积比(0.1～1)：20(g/ml)比例混合，并将浸膏搅拌起来，使其均匀悬浮，搅拌2h后，静置过夜。萃取液进行抽滤，然后在旋转蒸发仪上进行减压蒸馏，控制在45℃以下，收集浸膏。为提高浸膏得率，上述过程循环3-5次。产物用真空干燥箱，温度低于40℃干燥，得到色钉菇乙酸乙酯提取物。
实施例4色钉菇三种有机提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响实验
实验方法：本实验体系总体积为550μl。首先分别取不同质量浓度的鸡腿菇提取物溶液200μl(用ph＝6.8的磷酸缓冲液溶解，可采取超声方式助溶)，加入ph＝6.8的磷酸缓冲液110μl，0.01mg/mlα-葡萄糖苷酶溶液15μl，混匀后于37℃条件下保温10min，然后加入底物0.01mol/lpnpg溶液25μl，混合均匀后，于37℃条件下保温反应10min，加入0.7mol/lna2co3溶液200μl终止反应，于酶标仪波长405nm处测定相应的吸光值。另设相对应浓度的拜糖平溶液作为阳性对照组，并计算出相应的有机相的半数抑制浓度值(ec50值)，α-葡萄糖苷酶活性抑制率计算公式如下：
α-葡萄糖苷酶活性抑制率(％)＝[1-(a样品-a本底)/a空白]×100％
实验结果：不同浓度色钉菇三种提取物、阳性对照拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的影响如图1所示，从图1可以看出，三种色钉菇有机提取物相比较，色钉菇石油醚提取物相对α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果是最显著的。当色钉菇石油醚提取物浓度为10.0mg/ml时，抑制率最高，综上所述色钉菇的三种有机提取物均有不同程度的体外抗糖尿病活性，其中crpe的抗糖尿病活性最强。
实施例5糖尿病小鼠模型的构建及分组
购买约4周大雄性健康昆明小鼠50只，饲养于鼠房，保持温度，尤其是冬天，更应该注意保温，室温控制在22～25℃，购买小鼠后，先饲喂基础饲料3d，适应鼠房环境，随机选定6只小鼠作为空白组。除空白组外，其余组小鼠饲喂高脂高糖饲料，4w后除空白组外，其余组小鼠腹腔注射110mg/kg链脲佐菌素。3d后测定小鼠空腹血糖值，选定血糖值≥17.5mmol/l的小鼠作为糖尿病模型小鼠，随后进行分组。
本实验中将小鼠分成5组，每组6只，即模型组、色钉菇提取物灌胃低剂量组(50mg·kg-1·d-1)、色钉菇提取物灌胃中剂量组(100mg·kg-1·d-1)、色钉菇提取物灌胃高剂量组(200mg·kg-1·d-1)、阳性组。阳性对照组灌胃等体积盐酸二甲双胍(150mg·kg-1·d-1)，空白组以及模型组给予相应的体积的蒸馏水，1d一次，连续4w。
实施例6色钉菇石油醚提取物(crpe)对糖尿病小鼠血糖的影响
注意观察小鼠的身体状况，每天都要换水。给药后，测定各组小鼠的空腹血糖(尾静脉取血法)1周一次，统计分析给予crpe后对糖尿病小鼠血糖水平的影响。
实验结果见表1。表1结果表明，随着给药时间的增长，色钉菇石油醚提取物(浓度越大，降血糖效果越好，色钉菇石油醚提取物具有较好的降血糖活性。
表1crpe对糖尿病小鼠的血糖的影响(
注：与给药前比较，#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
实施例7色钉菇乙醇提取物(cre)对糖尿病小鼠血糖的影响
实验结果见表2。表2结果表明，随着处理时间的延长，糖尿病小鼠血糖值呈逐渐下降趋势，表明对糖尿病治疗效果随着治疗时间的延长越来越显著。三个浓度梯度之间，高剂量组治疗效果略好于中、高剂量组。与模型组相比，给药7天后，血糖值开始下降，呈现降糖效果。与阳性对照的降糖时间基本一致。高剂量组28天后的降糖效果基本接近阳性对照盐酸二甲双胍的效果。上述结果表明色钉菇乙醇提取物具有降低糖尿病小鼠血糖作用，并且其降血糖作用与疗程、浓度有关。
表2cre对糖尿病小鼠的血糖的影响(
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01；与治疗前比较，#p<0.05，##p<0.01。
实施例8色钉菇石油醚提取物(crpe)对糖尿病小鼠血脂的影响
实验结果见表3。如表3，给药4w后，crpe低、中、高三个剂量组，总甘油三酯(tg)随着crpe浓度的增加，呈降低趋势，而且中、高剂量组的crpe的清除脂肪的效果与阳性对照组趋于相同；crpe低、中、高三个剂量组小鼠血清中总胆固醇(tc)浓度随着crpe处理浓度的增加，胆固醇浓度呈下降趋势。随着crpe处理浓度的增加，hdl-c与tc的比值逐渐增大，且crpe中剂量处理组hdl-c与tc的比值接近阳性对照，crpe高剂量组高于阳性对照组，甚至接近于正常组小鼠的水平。上述结果表明，crpe在治疗糖尿病小鼠血脂代谢紊乱方面有显著的疗效。
表3crpe对糖尿病小鼠的血脂的影响(
注：与模型组做比较，*p<0.05，**p<0.01。
实施例9色钉菇乙醇提取物(cre)对糖尿病小鼠血脂的影响
实验结果见表4。由表4可知，色钉菇乙醇提取物低、中、高三个剂量组，处理4周后，糖尿病小鼠血清四项血脂指标与模型组相比，总甘油三酯(tg)随着乙醇提取物处理浓度的增加，呈逐渐降低的趋势，表明提取物有一定的降低脂肪的作用；与阳性对照相比，中剂量组的降脂效果基本接近阳性对照的降脂效果，高剂量组的降脂效果已达到阳性对照的降脂效果。高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)随着乙醇提取物处理浓度的增加，呈逐渐升高趋势，且低剂量处理后的血清hdl-c就高于阳性对照，表明提取物在升高血清中hdl-c方面显著好于阳性对照。中低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)随着乙醇提取物处理浓度的增加，呈逐渐下降趋势。中剂量处理组ldl-c含量明显低于阳性对照。上述结果显示，色钉菇乙醇提取物在调节、治疗糖尿病小鼠脂代谢紊乱方面具很好疗效。
表4cre对糖尿病小鼠的血脂的影响(
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。