本发明涉及一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂及其应用。属于兽药领域。
背景技术：
随着我国集约化养殖业的迅速发展及饲养管理水平的不断提高，各种畜禽普通病的发病率有所降低，而以发热为特征的温病（也包括西兽医学的多种急性传染病与感染性疾病）发病率却呈上升趋势，如猪流感、蓝耳病、猪链球菌病、禽流感、疯牛病、口蹄疫、血吸虫病等病严重损害畜牧养殖业的健康发展，导致畜禽生长受到抑制，生产性能降低，给养殖业生产造成了严重的经济损失，同时对人类健康和公共卫生也造成了极大的威胁。
同时发热也是家养宠物受细菌、病毒、支原体侵袭而发病时的一种常见症状，往往又伴随着疼痛，而且会由于热应激，引起抵抗为下降，影响正常饮食、活动和健康生长。所以无论是从动物生产还是动物福利的角度来讲，在施用抗菌、抗病毒药物的同时进行消炎（解热、镇痛）治疗都是必要的。
金银花，又名忍冬，其中药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。其自古被誉为清热解毒的良药，主要活性成分为绿原酸类化合物，它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪；既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。
黄芩，别名山茶根、土金茶根，黄芩以根入药，味苦、性寒，主要活性成分为黄岑苷类化合物，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症；现代药理学研究表明黄芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、保护神经元细胞、抑制醛糖还原酶活性、阻止钙离子通道及细胞凋亡等作用。
金银花和黄芩两味中药提取物常被联合使用，合称“银黄”，作为一种常见的人用中成药，用于清热解毒和治疗呼吸道感染，目前有银黄颗粒、银黄口服液、银黄片、银黄胶囊、银黄注射液等剂型上市，《中华人民共和国药典》2015年版第一部收录有银黄颗粒、银黄口服液两种剂型。
《中华人民共和国兽药典》2005年版第二部也收录有动物用银黄提取物注射液，处方含金银花提取物（以绿原酸计）和黄岑提取物（以黄岑苷计），用于动物清热疏风，利咽解毒。
专利cn103933120a公开了一种用于防治畜禽外感发热及上呼吸道感染的银黄颗粒及其制备方法，其中金银花提取物（以绿原酸计）和黄岑提取物（以黄岑苷计）以一定比例混合，绿原酸和黄芩苷之比为1:2-1:9。
专利cn106237093a公开了一种银黄提取物注射液，包括以下重量组分：金银花提取物以绿原酸计0.4-0.55份、黄岑提取物以黄岑苷计4.5-6份、连翘提取液3-6份、绿豆汁2-5份、山慈菇汁2-5份和苯甲醇1.5-3.5份。
专利cn101810691a和cn103655782a公开了一种具有安神镇痛功效的畜禽用中药组合物及其制备方法，其中药物组合物的组分及其重量份数比为：金银花35-45份，酸枣仁20-30份，连翘15-25份，黄岑15-20份。
专利cn101732426a公开了一种猪高热病药物的组配及使用方法，成分有当归、大黄、续断、伸筋草、甘草、巴豆、蝉脱、黄岑、金银花和穿心莲的提取物和蟾酥，对中早期高热病有治疗效果。
此外金银花提取物（以绿原酸计）和黄岑提取物（以黄岑苷计）也作为药效成分，被用于猪瘟的防治（专利cn104784520a和cn104784519a）和抗病毒（专利cn104523953a）。
上述专利中金银花提取物和黄岑提取物作为药效成分单独或与其它中草药联用，发挥清热解毒抗炎的作用，但是根据《中国植物志》、《药用植物学》等资料记录，包括“银黄”在内这些中草药退热镇痛效果均较弱，治疗时不能起到快速退热和镇痛的作用。
本发明复方银黄组合物注射剂处方中包含西药安乃近，安乃近为氨基比林和亚硫酸钠相结合的化合物，易溶于水，解热、镇痛作用较氨基比林快而强。人用安乃近的剂型有片剂、注射液两种，有解毒、镇痛、抗风湿的作用；主要用于退热，也用于急性关节炎、风湿性痛、肌肉痛、头痛等，可以快速强效退热镇痛。
《中华人民共和国兽药典》2005年版第二部也收录有安乃近注射液，为解热镇痛抗炎药，用于肌肉痛，风湿症，发热性疾患和疝痛。
专利cn104434862a公开了一种兽用安乃近泡腾片及其制备方法，其包括以下重量份的各组分：安乃近25-50份，泡腾剂20-30份，包裹剂5-10份，润滑剂0.1-0.5份，辅料10-50份。
专利cn101879218a公开了一种治疗犬感冒的复方双黄连口服液及其制备方法，成分包括黄岑苷、双花连翘提取物、盐酸克林霉素、葡萄糖、安乃近、扑尔敏、利巴韦林、谷氨酸钠、氢氧化钠。
专利cn1232681a公开了一种治疗猪瘟病的药物（粉剂），由以下中西药物及其重量份组合而成：金银花、黄岑、柴胡各为1-3份，大青叶、大黄、芒硝各为2-6份，蟾酥为0.10-0.25份，安乃近为0.5-1.2份，病毒灵为0.3-1份，强的松为0.01-0.04份，还适用于猪流感、猪无名高热病。
专利cn1733073a和专利cn1089495a分别公开了一种小儿解热灌肠液及其制法和小儿热解栓剂及其制备方法，两者的药效成分均为黄岑提取物、金银花提取物和安乃近或扑热息痛。
上述专利中安乃近单独使用，或与金银花、黄岑两者中的一种或两种药物联用，增强了解热镇痛作用，剂型为片剂、口服液、粉剂、栓剂和灌肠液等。但是以上剂型兽用不方便，目前常用且方便的兽用制剂剂型为注射剂，生物利用度高、效果好。但是由于安乃近肌注时容易引起血压骤降，且注射部位易红肿、疼痛，可导致局部肌肉萎缩和关节障碍，所以目前人用安乃近注射剂已逐渐停止使用；为了方便兽用，考虑到给药顺应性和动物安全，有必要解决含安乃近的药物组合物注射剂注射时导致严重不良反应的问题。
专利cn102379920a公开了一种兽用抗病毒退热药物组合物，处方含金银花1-6份、安乃近1-5份，剂型包括注射剂和口服制剂，但是该专利处方不含黄岑提取物，效果不及三者联用，且并未考虑含安乃近的注射剂使用时引起的严重不良反应。
基于上述分析，将中药成分金银花提取物（以绿原酸计）和黄岑提取物（以黄岑苷计），与西药安乃近联用，中西药物组合具有协同增效作用，可以速效退热镇痛消炎，且作用长久，优于化药单方和纯中药制剂的治疗效果，但是必须解决药物组合物注射剂的安全性问题。
因此为了进一步丰富兽药品种，提高和改善现有药物的疗效，增加制剂的安全性，本发明公开了一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂及其应用。本发明将中药成分金银花提取物（以绿原酸计）和黄岑提取物（以黄岑苷计），与西药安乃近联合使用，三种药效成分相互协同增效，速效退热镇痛消炎，且作用长久；同时通过协调该复方中西药物组合物中三种成分的用量比例，极大地减少了药物组合物注射剂使用时发生的过敏、血压骤降以及局部肌肉红肿、萎缩等不良反应，使制剂处方更加安全合理。
技术实现要素：
基于银黄组合物用于动物解热镇痛抗炎时效果有限，且安乃近注射剂不良反应明显的缺陷，本发明的目的是提供一种安全系数高的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂及其应用。
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂给药剂型。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂的应用。
为解决上述第一个技术问题，本发明提供的技术方案是。
本发明提供了一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂，其特征在于，所述的药物组合物的活性成分包含下列质量份数：金银花提取物（以绿原酸计）1-10份，黄岑提取物（以黄岑苷计）1-100份，安乃近10-1000份，加以其他必要的辅料。
优选地，按质量份数计，按绿原酸计当金银花提取物:安乃近＞1:10时，按绿原酸和黄岑苷计，金银花提取物与黄芩提取物的总量与安乃近的比例大于等于2:1，且小于1:1000；按绿原酸计当金银花提取物:安乃近≤1:10时，按绿原酸和黄岑苷计，金银花提取物与黄芩提取物的总量:安乃近=11:1-1:1000。
优选地，按质量份数计，优选按绿原酸和黄岑苷计，金银花提取物与黄芩提取物的量:安乃近=1:1-1:100。
所述的金银花提取物，采用乙醇多次浸渍提取回收得到红棕色液体；黄岑提取物，采用碱提酸沉收集得到淡黄色粉末。
为解决上述第二个技术问题，本发明提供的技术方案是。
所述组合物药物制剂可以是溶液型注射剂、混悬型注射剂、乳剂型注射剂和注射用无菌粉末中的一种。
所述组合物药物注射液的制备方法，具体包括如下步骤：
1)取处方量安乃近用适量注射用水溶解，制成溶液a；
2)取处方量的黄岑提取物（以黄岑苷计）用溶液a溶解，制成溶液b；
3)取处方量的金银花提取物（以绿原酸计）用适量注射用水溶解，制成溶液c；
4)将溶液b和溶液c混合，加入处方中要求的辅料，补足处方量的溶剂，用缓冲盐离子对调节ph5.5-7.0，灭菌检查合格后灌装为一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射液。
一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射液，其特征在于，包含金银花提取物，黄岑提取物，安乃近，抗氧剂，金属离子螯合剂，抑菌剂与止痛剂，ph调节剂和注射用水。其中，所述抗氧剂选自亚硫酸钠、焦亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、维生素c中的一种或几种；金属离子螯合剂选自乙二胺四乙酸钠钙、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钙中的一种或几种；抑菌剂与止痛剂选自三氯叔丁醇、苯甲醇中的一种或两种；ph调节剂选自枸橼酸-枸橼酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠中的一种或两种。
更进一步地，按照重量百分数计，含有以绿原酸计金银花提取物为0.24%，以黄岑苷计黄芩提取物为2.4%，安乃近的用量为24%。
上述注射剂的应用对象为家畜、家禽、宠物。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了家兔解热对比试验。选择正常体38.0-39.6℃且体温差不超过1℃的新西兰兔108只，按5ml/kg的剂量皮下注射浓度为20%的经煮沸后的蛋白胨溶液，2小时后用肛温计测定家兔体温并记录致热后每只兔子的体温，标记后，随机分成18组，分组及给药方案如下表4，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。分别于注射药物的0.5、1.0、1.5、2、2.5、3.0小时后测定每组家兔的体温并记录结果。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了小鼠镇痛试验。本试验采用醋酸扭体法，取昆明种小鼠180只，雌雄各半，随机分成18组，分组及给药方案如下表6，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。给药后，每只小鼠腹腔注射冰醋酸，观察记录腹腔注射冰醋酸后动物出现扭体反应后肢伸张、腹部收缩内凹、臀部抬高，记录10min内动物扭体反应的次数，比较组间差异，并计算抑制百分率，即抑制率（%）=（生理盐水组扭体均次数-给药组扭体均次数）/生理盐水组扭体均次数×100%。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了大鼠抗炎试验。本试验采用蛋清致炎法，取sd大鼠180只，雌雄各半，随机分成18组，分组及给药方案如下表8，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。给药后，右后足踌下注射新鲜蛋清液，用软皮尺（不能有弹性）测定致炎前和致炎后1、2、3、4小时大鼠右后足周长，以致炎前后的周长值计算其肿胀率（%），其公式表达为肿胀率（%）=（致炎后周长-致炎前周长）/致炎前周长×100%，比较各组间的差异。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了不良反应——类过敏反应监测试验。取icr小鼠160只，雌雄各半，随机分成16组；第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），其余每组为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第2-9组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（2组），1:10:100（3组），10:1:100（4组），1:100:100（5组），1:1:1（6组），10:1:10（7组），1:10:10（8组），1:100:10（9组）；第10-16组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=0:1:1（10组），1:0:1（11组），10:10:3（12组），1:100:1（13组），20:1:1（14组），3:4:2（15组），1:1:2000（16组）。伊文思蓝（eb）浓度选用0.8%，与各组溶液按1:1混合后，对小鼠进行尾静脉注射20ml/kg，给药30min后观察内动物的一般状况和耳廓蓝染情况，记录每组出现耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数，然后将动物脱颈椎处死，沿耳根剪下双耳，剪碎，在室温下用2ml甲酰胺浸泡后，萃取耳廓内渗出的染料，过200目筛，取上清液于610nm处测吸光度。根据eb标准曲线，计算eb染料渗出量（μg）；根据每组发生耳廓蓝染的动物数计算各组呈现血管通透性增高的阳性率（简称反应率）；根据蓝染耳数计算耳蓝染率。若受试药可引起小鼠耳廓出现蓝斑，直径大于生理盐水的对照组，且有显著性差异，说明该药物引起毛细血管通透性增加，提示为皮肤类过敏反应。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了不良反应——血压变化监测试验。取beagle犬45只，随机分为15组；每组均为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第1-8组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（1组），1:10:100（2组），10:1:100（3组），1:100:100（4组），1:1:1（5组），10:1:10（6组），1:10:10（7组），1:100:10（8组）；第9-16组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=0:1:1（9组），1:0:1（10组），10:10:3（11组），1:100:1（12组），20:1:1（13组），3:4:2（14组），1:1:2000（15组）；每只犬给药前基础血压水平作为阴性对照。各组犬按照3ml/min的注射速度，一次性静脉注射各组药物，给药10min后分别用血压计测量每只犬的收缩压(sbp)、舒张压(dbp)、平均动脉压(mbp)和心率(hr)，测5次，取平均值并记录。
为解决上述第三个问题，本发明所述的用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂进行了不良反应——肌肉刺激性监测试验。取家兔45只，随机分为15组；每组均为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第1-8组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（1组），1:10:100（2组），10:1:100（3组），1:100:100（4组），1:1:1（5组），10:1:10（6组），1:10:10（7组），1:100:10（8组）；第9-15组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=0:1:1（9组），1:0:1（10组），10:10:3（11组），1:100:1（12组），20:1:1（13组），3:4:2（14组），1:1:2000（15组）。采用同体自身对照法，每只家兔左、右侧（耳缘静脉或股四头肌)分别注射各组药物和0.9%生理盐水，连续给药5天，于每天给药前及末次给药后48-96h对注射部位进行肉眼观察。观察期结束后，每组取1/2动物注射部位进行病理组织学检查。剩余动物恢复21天后,同法进行病理组织学检查。
本发明制备的一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物制剂，与药物组合物中单一成分或两两组合应用时相较，可显著提高药物疗效，并且通过调节组合物成分比例，可以极大地减少药物组合物注射剂使用时发生的过敏、血压骤降以及局部肌肉红肿、萎缩等不良反应，使制剂处方更加安全合理。
本发明的优越性在于。
1.在兽药领域，首次提供了一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂。
2.在兽药领域，首次提供了一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂给药剂型。
3.在兽药领域，首次提供了一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄组合物注射剂的应用。
4.本发明复方银黄组合物注射液的制备方法，直接利用安乃近溶液溶解黄岑提取物，避免了氢氧化钠等碱性溶剂的使用，使制备过程简单，制剂安全性增加。
5.本发明首次将金银花提取物（以绿原酸计），黄岑提取物（以黄岑苷计）和安乃近三者联用并制备成注射剂，用于动物速效退热镇痛消炎。
6.本发明制备的复方银黄组合物注射剂，与药物组合物中单一成分或两两组合应用时相较，可显著提高药物疗效；中西药物组合具有协同增效作用，优于化药单方和纯中药制剂的治疗效果。
7.本发明制备的复方银黄组合物注射剂通过协调该复方中西药物组合物中三种成分的用量比例，极大地减少了药物组合物注射剂使用时发生的过敏、血压骤降以及局部肌肉红肿、萎缩等不良反应，使制剂处方更加安全合理。
8.本发明的复方银黄组合物注射剂可制备为不同的注射剂类型，可以是溶液型注射剂、混悬型注射剂、乳剂型注射剂和注射用无菌粉末中的一种；给药剂量灵活多变，以达到不同的治疗目的，包括长效、缓释治疗，也可适用于不同的治疗环境和治疗需要。
9.本发明中述及的复方银黄组合物注射剂的提取、生产工艺简便，生产流程易于自动化，适合工业化扩大生产。
具体实施方式
实施例1-10。
本发明一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄注射液的处方（5ml）为。
表1.实施例1-10处方。
注：q.s.意为适量、足量。
制备方法包括以下步骤。
取抗氧剂、金属离子螯合剂、抑菌（止痛）剂溶于二氧化碳或氮饱和的注射用水中，然后加入处方量的安乃近，搅拌使其溶解制成溶液a；取处方量的黄岑提取物（以黄岑苷计）用溶液a溶解，制成溶液b；取处方量的金银花提取物（以绿原酸计）用二氧化碳或氮饱和的注射用水溶解，制成溶液c；将溶液b和溶液c混合，补足处方量的注射用水，用缓冲盐离子对调节ph5.5-7.0，滤过后，灌装封口，最后用100℃流通蒸汽30min灭菌制剂。
实施例11-20。
本发明一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄注射液的处方（乳剂型注射剂，100ml）为。
表2.实施例11-20处方。
注：q.s.意为适量，足量。
制备方法包括以下步骤。
（1）油相的制备：将处方量的黄岑提取物（以黄岑苷计）、抗氧剂加入大豆油中，搅拌至完全溶解至透明状作为油相备用。
（2）水相的制备：将金属离子螯合剂、抑菌（止痛）剂、冰点调节剂、乳化（增溶）剂和聚乙二醇400加入注射用水，然后边搅拌边加入处方量的金银花提取物（以绿原酸计）和安乃近，使其溶解至透明状作为水相备用。
（3）乳化：将水相缓慢地加入油相中，边加边大力搅拌制成初乳，缓冲盐离子对调节ph5.5-7.0。
（4）将制成的初乳用一级压力1000pa和二级压力5000pa连续均质5次，120pa低压均质一次。
（5）过滤后，灌装封口，最后用100℃流通蒸汽30min灭菌。
实施例21-30。
本发明一种用于动物解热镇痛抗炎的复方银黄注射液的处方（混悬型注射剂或注射用无菌粉末，20ml）为。
表3.实施例21-30处方。
注：＊表示此辅料仅在注射用粉末中添加。
制备方法包括以下步骤。
将抗氧剂、金属离子螯合剂、抑菌（止痛）剂、缓冲盐离子对、助悬剂、润湿剂加注射用水至20ml，溶解后过滤，100℃流通蒸汽30min灭菌，放冷后作为溶媒，在无菌室加入金银花提取物（以绿原酸计）、黄岑提取物（以黄岑苷计）和安乃近，制备得混悬型注射剂。
或将抗氧剂、金属离子螯合剂、抑菌（止痛）剂、缓冲盐离子对、粉针填充剂、助悬剂、润湿剂、金银花提取物（以绿原酸计）、黄岑提取物（以黄岑苷计）和安乃近，分装，得注射用无菌粉末。临用前加灭菌注射用水至20ml制成混悬液。
实施例41。
复方银黄组合物注射液用于家兔解热对比试验。
1.实验方法。
本研究所用复方银黄注射液按实施例4中的方法制得；另用同样的方法，不添加金银花提取物、黄岑提取物或安乃近中任一种或两中制备各组单组分、双组分注射液。
选择正常体温38.0-39.6℃且体温差不超过1℃的新西兰兔108只，按5ml/kg的剂量皮下注射浓度为20%的经煮沸后的蛋白胨溶液，2小时后用肛温计测定家兔体温并记录致热后每只兔子的体温，标记后，随机分成18组，分组及给药方案如下表4，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。分别于注射药物的0.5、1.0、1.5、2、2.5、3.0小时后测定每组家兔的体温并记录结果。
表4.实验动物分组及给药方案。
2.实验结果。
每组家兔各时间点体温变化情况如下表5所示，家兔正常体温范围38.0-39.6℃。结果显示，生理盐水对照组的体温未发生明显变化，而其余各组的体温在给药后小时都有不同程度的下降趋势。从表中数据可以看出，无安乃近添加的中药制剂组（第2、3、5、6组）家兔体温虽然有所降低，但是3小时仍未降至正常体温；而含安乃近单组分组、双组分组和各复方注射液组的家兔在3小时时体温均回至正常范围，其中各复方注射液组家兔体温下降速度最快；特别第11、12组在0.5小时时家兔体温就已恢复到正常水平。表明一定比例范围的复方银黄注射液具有强的解热效果，其解热强度优于任一单方或双方组合制剂。
表5.复方银黄组合物注射液用于家兔解热对比试验结果。
实施例42。
复方银黄组合物注射液用于小鼠镇痛试验。
1.实验方法。
本研究所用复方银黄注射液按实施例4中的方法制得；另用同样的方法，不添加金银花提取物、黄岑提取物或安乃近中任一种或两中制备各组单组分、双组分注射液。
本试验采用醋酸扭体法，取昆明种小鼠180只，雌雄各半，随机分成18组，分组及给药方案如下表6，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。给药后，每只小鼠腹腔注射冰醋酸，观察记录腹腔注射冰醋酸后动物出现扭体反应后肢伸张、腹部收缩内凹、臀部抬高，记录10min内动物扭体反应的次数，比较组间差异，并计算抑制百分率，即抑制率（%）=（生理盐水组扭体均次数-给药组扭体均次数）/生理盐水组扭体均次数×100%。
表6.实验动物分组及给药方案。
2.实验结果。
对各试验组用药后注射冰醋酸溶液，记录的扭体次数如表7所示。经统计学处理，各给药组与生理盐水组相比均有明显差异，其中含安乃近的双组分组和各复方银黄注射液组与生理盐水组的差异显著，扭体次数明显减少，抑制百分率均大于50%；表明在一定比例范围内的复方银黄注射液有明显的镇痛作用，其镇痛效果优于任一单方或双方组合制剂。
表7.复方银黄组合物注射液用于小鼠镇痛试验结果。
注：与第1组比较，p*＜0.1，p△＜0.05，p◇＜0.01.
实施例43。
复方银黄组合物注射液用于大鼠抗炎实验。
1.实验方法。
本研究所用复方银黄注射液按实施例4中的方法制得；另用同样的方法，不添加金银花提取物、黄岑提取物或安乃近中任一种或两中制备各组单组分、双组分注射液。
本试验采用蛋清致炎法，取sd大鼠180只，雌雄各半，随机分成18组，分组及给药方案如下表8，其中第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），含安乃近药物组中安乃近用量恒定，不含安乃近药物组中的最大剂量药物的用量与含安乃近药物组中安乃近用量相同。给药后，右后足踌下注射新鲜蛋清液，用软皮尺（不能有弹性）测定致炎前和致炎后1、2、3、4小时大鼠右后足周长，以致炎前后的周长值计算其肿胀率（%），其公式表达为肿胀率（%）=（致炎后周长-致炎前周长）/致炎前周长×100%，比较各组间的差异。
表8.实验动物分组及给药方案。
2.实验结果。
如表9所示，在给药后不同时间点，与第1组（生理盐水组）相比，各给药组的肿胀率都有显著下降（p﹤0.01）；其中含安乃近的双组分组和各复方银黄注射剂组肿胀率显著降低，且与其余单组分和双组分组（除第7、9组）均有显著性差异（p﹤0.01），说明在一定比例范围内的复方银黄注射液可对蛋清所致足肿胀有良好的消胀作用，其治疗效果优于任一单方或双方组合制剂。
表9.复方银黄组合物注射液用于大鼠抗炎试验结果。
实施例44。
复方银黄组合物注射液不良反应监测——类过敏反应试验。
1.实验方法。
取icr小鼠160只，雌雄各半，随机分成16组；第1组为生理盐水对照组（sterilenormalsaline,ns），其余每组为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第2-9组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（2组），1:10:100（3组），10:1:100（4组），1:100:100（5组），1:1:1（6组），10:1:10（7组），1:10:10（8组），1:100:10（9组）；第10-16组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）=0:1:1（10组），1:0:1（11组），10:10:3（12组），1:100:1（13组），20:1:1（14组），3:4:2（15组），1:1:2000（16组）。伊文思蓝（eb）浓度选用0.8%，与各组溶液按1:1混合后，对小鼠进行尾静脉注射20ml/kg，给药30min后观察内动物的一般状况和耳廓蓝染情况，记录每组出现耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数，然后将动物脱颈椎处死，沿耳根剪下双耳，剪碎，在室温下用2ml甲酰胺浸泡后，萃取耳廓内渗出的染料，过200目筛，取上清液于610nm处测吸光度。根据eb标准曲线，计算eb染料渗出量（μg）；根据每组发生耳廓蓝染的动物数计算各组呈现血管通透性增高的阳性率（简称反应率）；根据蓝染耳数计算耳蓝染率。若受试药可引起小鼠耳廓出现蓝斑，直径大于生理盐水的对照组，且有显著性差异，说明该药物引起毛细血管通透性增加，提示为皮肤类过敏反应。
2.实验结果。
生理盐水静脉注射后，所有动物均未见耳廓蓝染，实施例和对比例组均有动物出现了耳廓蓝染，且eb渗出量与第1组相比均有所增高，说明本次试验没有造成假阴性或假阳性。由表10和图1可知，当复方组合物比例变化时，可见不同程度的血管通透性增高，表现为耳廓蓝染。经过数据统计学分析，当金银花：黄岑：安乃近比例为1:0:1,10:10:3,20:1:1,3:4:2,1:1:2000时，eb渗出量显著增加，且反应率（%）、耳蓝率（%）以及升高率（%），明显高于第1组；当组合物中黄岑比例增加，即金银花：黄岑：安乃近比例为1:100:10,时，各项类过敏指标的数值最低，无显著性差异；在第2、3、4、5、6、7、8、10、13组中，eb渗透量和耳廓蓝染现象均无显著性差异。以上结果说明，复方银黄组合物注射液中相对减小金银花的比例，增加黄岑比例，可以有效地控制类过敏反应。
表10.复方银黄组合物注射液——类过敏反应试验结果。
注：与第1组比较，p△＜0.05，p◇＜0.01.
图1.复方银黄组合物注射液——类过敏反应试验结果。
见“说明书附图”图1。
实施例45。
复方银黄组合物注射液不良反应监测——血压变化试验。
1.实验方法。
取beagle犬45只，随机分为15组；每组均为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第1-8组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（1组），1:10:100（2组），10:1:100（3组），1:100:100（4组），1:1:1（5组），10:1:10（6组），1:10:10（7组），1:100:10（8组）；第9-16组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=0:1:1（9组），1:0:1（10组），10:10:3（11组），1:100:1（12组），20:1:1（13组），3:4:2（14组），1:1:2000（15组）；每只犬给药前基础血压水平作为阴性对照。各组犬按照3ml/min的注射速度，一次性静脉注射各组药物，给药10min后分别用血压计测量每只犬的收缩压(sbp)、舒张压(dbp)、平均动脉压(mbp)和心率(hr)，测5次，取平均值并记录。
2.实验结果。
不同比例的复方银黄注射液均可导致不同程度的血压降低；其中第11、12、13、14组相比给药前血压有显著性差异而下降明显（p＜0.01），下降趋势13组＞12组＞11组＞14组；随着组合物中金银花和黄岑的比例减少，血压变化随着减缓。说明适当控制组合物中金银花和黄岑用量，可以在保证治疗效果的同时，有效控制血压骤降。平均动脉血压、收缩压、舒张压、心率变化情况见表11。
表11.复方银黄组合物注射液——血压变化试验结果。
实施例46。
复方银黄组合物注射液不良反应监测——肌肉刺激性试验。
1.实验方法。
取家兔45只，随机分为15组；每组为不同分量比的复方银黄注射液（compoundlonicerajaponicaandscutellariainjection,ci），每组复方银黄注射液中安乃近的含量保持恒定。其中第1-8组是实施例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=1:1:1000（1组），1:10:100（2组），10:1:100（3组），1:100:100（4组），1:1:1（5组），10:1:10（6组），1:10:10（7组），1:100:10（8组）；第9-15组是对比例组，分别是金银花（以绿原酸计）：黄岑（以黄岑苷计）：安乃近=0:1:1（9组），1:0:1（10组），10:10:3（11组），1:100:1（12组），20:1:1（13组），3:4:2（14组），1:1:2000（15组）。采用同体自身对照法，每只家兔左、右侧（耳缘静脉或股四头肌)分别注射各组药物和0.9%生理盐水，连续给药5天，于每天给药前及末次给药后48-96h对注射部位进行肉眼观察。观察期结束后，每组取1/2动物注射部位进行病理组织学检查。剩余动物恢复21天后,同法进行病理组织学检查。
2.实验结果。
根据下表12中结果，第5、8、11、12、13、14组的肌肉刺激性试验肉眼观察给药局部未见红肿、渗出等病变,动物行走正常；纵行切开股四头肌,其中仅第8组观察到给药侧肌肉切面颜色略变深暗，其余5组均无变化；病理学组织检查结果基本正常。第1、2、3、4、6、7组给药局部有反应，但不明显，其中仅第1组可见红肿现象，纵行切开股四头肌，可见肌肉失去光泽与正常组织分界清楚；病理学组织检查结果未见明显异常。以上各组在停药21天后，纵行切开股四头肌观察未见明显异常,病理组织学检查末见坏死及炎症。而第9、10、15组给药局部有明显，甚至严重的红肿、渗出等病变,动物不能行走，正常病理组织学检查可见给药侧肌肉组织片状凝固性坏死,坏死组织中大量淋巴细胞浸润。坏死组织边缘肌纤维缩小,间隙增大，坏死组织周边肌肉中可见条索状炎症灶,伴有少量出血和纤维组织增生；动物恢复21天,第9、10组给药侧仍可见少量肌纤维萎缩,间隙增宽。所以组的对照侧肌肉仅见个别针眼周围轻微充血，无任何病变。说明该复方银黄注射液中，在一定的比例范围内增加金银花和黄岑份量，两者相互协同作用，可以有效地降低安乃近对肌肉的刺激，使制剂更加安全。
表12.复方银黄组合物注射液——肌肉刺激性试验结果。
注：“-”无病变；“+”基本上无病变；“++”有可见病变；“+++”有轻微病变；“++++”有明显病变；“+++++”有严重病变；“√”无病变或完全恢复；“×”未完全恢复。
由上述实验结果可知，金银花提取物（以绿原酸计）、黄岑提取物（以黄岑苷计）和安乃近中西药联合使用，三种药效成分相互协同增效，速效退热镇痛消炎，且作用长久；同时通过协调该复方中西药物组合物中三种成分之间的用量比例，并将金银花（以绿原酸计）和黄岑（以黄岑苷计）的总量与安乃近的比值控制在一定范围内，可以在疗效良好的各组复方制剂中筛选出不良反应较少的的复方制剂，从而极大地减少了药物使用时出现的过敏、血压骤降、肌肉红肿等不良反应，使制剂处方更加安全合理。
本发明的上述实施例仅是为了较为清楚地说明本发明而作的举例，并非是对本发明实施方式的限定。对于相关领域的技术人员来说，在上述说明和举例的基础上还可以做出其他各种形式的调整和变动。本说明书无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的调整和变动仍处于本发明的保护范围之列。