一种布美他尼的药物组合物及其抗炎镇痛作用
【专利摘要】本发明公开了一种布美他尼的药物组合物及其抗炎镇痛作用，本发明提供的布美他尼的药物组合物中含有布美他尼和一种从射干的干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(I)，布美他尼和该天然产物单独作用时，抗炎镇痛效果一般；二者联合作用时，抗炎镇痛效果显著提高，可以开发成抗炎镇痛的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种布美他尼的药物组合物及其抗炎镇痛作用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及布美他尼的新用途，具体涉及一种布美他尼的药 物组合物及其抗炎镇痛作用。
【背景技术】
[0002] 布美他尼又称丁氧苯酸，为髓袢利尿药，其作用部位、作用机制、电解质丢失和作 用特点均与呋塞米、依他尼酸相似。具有高效、速效、短效和低毒的特点。
[0003] 布美他尼对水和电解质排泄的作用基本同呋塞米，其利尿作用为呋塞米20~60 倍。主要抑制肾小管髓袢升支厚壁段对NaCl的主动重吸收，对近端小管重吸收Na+也有抑制 作用，但对远端肾小管无作用，故排钾作用小于呋塞米。能抑制前列腺素分解酶的活性，使 前列腺素 E2含量升高，从而具有扩张血管作用。扩张肾血管，降低肾血管阻力，使肾血流量 尤其是肾皮质深部血流量增加，在布美他尼的利尿作用中具有重要意义，也是其用于预防 急性肾功能衰竭的理论基础。另外，与其他利尿药不同，袢利尿药在肾小管液流量增加的同 时肾小球滤过率不下降，可能与流经致密斑的氯减少，从而减弱或阻断了球-管平衡有关。 布美他尼能扩张肺部容量静脉，降低肺毛细血管通透性，加上其利尿作用，使回心血量减 少，左心室舒张末期压力降低，有助于急性左心衰竭的治疗。由于布美他尼可降低肺毛细血 管通透性，为其治疗成人呼吸窘迫综合征提供了理论依据。
[0004] 目前，尚未见布美他尼及其药物组合物与抗炎镇痛的相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种布美他尼的药物组合物，该药物组合物中含有布美他 尼和一种从射干中分离得到的结构新颖的天然产物，布美他尼和该天然产物可以协同抗炎 镇痛。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -种布美他尼的药物组合物，包括布美他尼、如上所述的化合物（I)和药学上可以 接受的载体。
[0010]如上所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将射干的干燥根茎粉 碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a) 中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱12个柱 体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗脱浓缩 物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到 4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到化合物(I)。
[0011] 进一步地，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0012] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
[0014] 如上所述的布美他尼的药物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点：
[0016] 本发明提供的布美他尼的药物组合物中含有布美他尼和一种从射干中分离得到 的结构新颖的天然产物，布美他尼和该天然产物单独作用时，抗炎镇痛效果一般;二者联合 作用时，抗炎镇痛效果显著提高，可以开发成抗炎镇痛的药物。本发明与现有技术相比具有 突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将射干的干燥根茎(5kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(20L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水饱和的 正丁醇(4LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇 洗脱12个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙 醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个 柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (254mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:无色粉末，HR-ES頂S显示[M+H]+为m/z 451.2182，结合核磁特征可得分 子式为C26H3QN2〇5，不饱和度为13。核磁共振氢谱数据δ Η(ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-3 (3 · 98，t，J = 3.2Hz)，H-5(3.48，d，J = 7.3Hz)，H-6a(3.32，dd，J=16.3,7.3Hz)，H-6b(2.61，br，d，J = 16.3Hz)，H-9(7.49，d，J = 8.2Hz)，H-10(7.11，td，J = 8.2，1.3Hz)，H-ll(7.22，td，J = 8.2， 1.3Hz)，H-12(7.30，d，J = 8.2Hz)，H-14a(2.74，d，J = 13.0Hz)，H-14b(1.88，d，J=13.0Hz)， H-17a(4.33，d，J=12.1Hz)，H-17b(4.16，d，J=12.1Hz)，H-18(1.57，s)，H-20(2.89，dd，J = 12.3,8.4Hz)，H-21(1.88，m)，H-21(2.41，m)，H-23(4.10，d，J=5.2Hz)，H-24(2.09，m)，H-24 (2.53，m)，H-25(4.94，m)，H-26(9.36，d，J = 4.6Hz)，Ni-Me(3.64，s)，N4-Me(2.34，s);核磁共 振碳谱数据3。（？？111，〇0(：13，1251!^):132.4((：，2-〇,53.5(〇1，3-〇,61.4(〇1，5-〇,23.7 (CH2,6-C)，107.3(C，7-C)，126.8(C，8-C)，118.4(CH，9-C)，119.2(CH，10-C)，121.2(CH，n- C)，109.5(CH，12-C)，136.7(C，13-C)，33.3(CH2，14-C)，126.2(C，15-C)，130.0(C，16-C)， 59.6(CH2，17-C)，24.3(CH3，18-C)，116.2(C，19-C)，40.1(CH，20-C)，24.7(CH2,21-C)，115.3 (C，22-C)，77.8(CH，23-C)，33.8(CH2,24-C)，72.4(CH，25-C)，204.3(CH，26-C)，30.2(CH 3， Λ-Me)，41.3 (CH3，N4_Me)。红外波谱中在341 δαιΓ1234与1675cnf1吸收峰分别是由该化合物中的 羟基与醛基产生;且UV谱图表明在231nm与285nm有紫外吸收，显示该化合物含有吲哚发色 基团。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有26个碳信号，包括三个甲基δ[24.3，30.2，41.3;五个 亚甲基(一个连氧亚甲基)知23.7,33.3,59.6,24.7,33.8;十个次甲基(两个连氧次甲基，一 个醛基）δ63·5,61·4，118·4，119·2，121·2，109·5,40·1，77·8,72·4,204·3;以及八个季碳 (两个二连氧季碳）δ〔132·4,107.3,126.8,136.7,126.2,130.0,116.2,115.3;以上功能结 构再结合不饱和数表明该化合物为七环结构。1H-NMR谱显示一组无取代吲哚片段的质子信 ·3Ηζ)与 δΗ-127.30( lH，d，J = 8.2Hz);-个醛基质子信号 δΗ-269.36( lH，d，J = 4.6Hz);-个甲 2 基质子信号δΗ-l8l.57(3H，s，Me);两个N-CH3质子信号δ H3.64(3H，s，N1-Me)与2.34(3H，s，N4- Me);-组移向低场的连氧亚甲基质子信号δH-17a4.33(lH，d，J=12.1Hz)与δ H-17b4.16(lH，d， J = 12·1Ηz);四组亚甲基质子信号δΗ-633.32(lH，dd，J= 16.3，7·3Ηζ)与δΗ.2.61(lH，br，d，J 3 = 16·3Ηζ)、δΗ-1如2.74(1!1，(1，了=13.0抱）与3[1- 1仙1.88(1!1，(1，了=13.0!^)、3[1-21(1.88，111)与 4 (2.41，m)以及δΗ-24 ( 2.09，m)与（2.53，m)。130匪1?谱、DEPT谱显示该化合物中存在吲哚结构
[0022] ο
[0023] 实施例2:抗炎镇痛作用
[0024] 1、材料与方法
[0025] 1.1药物及试剂
[0026] 布美他尼购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。阿 司匹林肠溶片(济南永宁制药股份有限公司），吐温80(天津市广成化学试剂有限公司）；二 甲苯(天津市博通化工有限公司）；依文思蓝（国药集团化学试剂有限公司）。
[0027] 1.2动物
[0028] 昆明种小鼠，体重18~22g，雌雄各半，清洁级，由泰山医学院实验动物中心提供。 [0029] 1 · 3镇痛实验:小鼠扭体法
[0030]取小鼠50只，雌雄各半，体重18~22g，随机分为布美他尼组(0.2g · kg"1)、化合物 (I)组(〇.2g · kg^1)、布美他尼与化合物⑴组合物组(O.lg · kgAo.lg · kg"1)、阿司匹林组 (0.2g · kg<)及生理盐水对照组。每组10只，灌胃给药。给药容积20mL · kg<。生理盐水组和 阿司匹林组给药30min后、给药组给药60min后，腹腔注射0.6 %冰醋酸10mL · kg^1，观察记录 15min内小鼠出现扭体反应鼠数和扭体次数，计算扭体次数均值及抑制扭体反应率。
[0031 ] 抑制率=(对照组扭体数-给药组扭体数)/对照组扭体数X 100%
[0032] 1.4镇痛实验:小鼠甩尾法实验
[0033] 取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~22g，实验前12h禁食不禁水。把小鼠装入 小鼠固定筒内，尾部暴露于外，测痛时，使小鼠尾尖部1/3处与聚光灯灯孔重合，待动物安静 后进行测量，以鼠尾受热刺激出现甩尾作为疼痛反应指标。记录小鼠从开始光照射到甩尾 反应的潜伏期(TFLs)作为痛阈。分组及给药同1.3。生理盐水组和阿司匹林组给药30min后、 给药组给药60min后，测定其甩尾时间。计算痛阈均值及痛阈提高率。
[0034] 痛阈提高率=(给药后痛阈-基础痛阈)/基础痛阈X 100%
[0035] 1.5抗炎实验:对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
[0036] 分别称取18~22g健康小白鼠40只，分为5组，每组8只，雌雄各半。每只小鼠按 20mL · kg^1灌胃给药，剂量设置同1.3。连续给药7d。第7天给药0.5h后，各组小鼠于右耳正反 面涂上二甲苯50yL致炎，lh后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm直径打孔器 分别在同一部位打下圆耳片，立即称重并记录其质量，计算肿胀度和肿胀率。
[0037] 肿胀度=右耳质量-左耳质量；肿胀率=[(右耳质量-左耳质量）/左耳质量]X 100%
[0038] 1.6抗炎实验:对冰醋酸致小鼠血管通透性改变的影响
[0039] 分组给药同1.3。第7天给药0.5h后，尾静脉注射1 %的依文思蓝生理盐水溶液 10mL · kg-S立即腹腔注射0.6%醋酸生理盐水溶液10mL · kg-ISOmin后脱颈椎处死小鼠， 轻揉小鼠腹部lmin后，打开腹腔，收集腹腔液，待收集完毕用4mL生理盐水分数次冲洗腹腔， 用注射器吸出洗涤液，合并后加入生理盐水至5mL，以lOOOr · mirT1离心5min，取上清液用 721型分光光度计于680nm处测吸光度(A)，计算渗出抑制率。
[0040] 渗出抑制率=(阴性对照组A-给药组A)/阴性对照组AX 100%
[0041 ] 1.7统计方法
[0042]采用SPSS19.0软件，数据以X土s表示，比较用t检验，P<0.05为有统计意义。
[0043] 2、实验结果
[0044] 2.1镇痛作用
[0045] 与对照组比，布美他尼与化合物（I)组合物组小鼠扭体反应次数和扭体反应鼠数 均显著降低(P<〇.01)，对醋酸致小鼠扭体反应次数的抑制效果优于阳性药阿司匹林，且优 于布美他尼或化合物(I)单独作用时对醋酸致小鼠扭体反应次数的抑制效果。结果见表1。
[0046] 与对照组比，布美他尼与化合物（I)组合物组小鼠光热辐射致疼痛反应的痛阈显 著提高(P<〇.01)，痛阈提高率与阳性药阿司匹林基本一致，且优于布美他尼或化合物（I) 单独作用时对小鼠光热辐射致疼痛反应的痛阈提高率。结果见表2。
[0047 ] 表1对冰醋酸致小鼠扭体次数的影响(X ± s，η = 10)
[0048]
[0049 ] 表2对热刺激致小鼠痛阈改变的影响(X 土 s，η = 10)
[0050]
[0051 ] 2.2抗炎作用
[0052] 二甲苯致炎后，布美他尼组、化合物（I)组小鼠耳廓肿胀率低于对照组(Ρ<0.05)， 布美他尼与化合物(I)组合物组的小鼠耳廓肿胀率降低显著(Ρ<〇.01)。结果见表3。冰醋酸 致炎后，布美他尼组、化合物（I)组小鼠腹腔液依文思蓝Α低于阴性对照组(Ρ<0.05)，布美 他尼与化合物（I)组合物组的小鼠腹腔液A显著降低(P<0.01)。结果见表4。
[0053 ] 表3对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X ± s，η = 8)
[0054]
[0055] 表4对冰醋酸致小鼠血管通透性改变的影响(X 土 s，η = 8)
[0056]
?0057?~以上结果表明，布美他尼与化合物(I)组合物具有显著的抗炎镇痛作用，且优于布 美他尼或化合物（I)单独的抗炎镇痛作用，说明布美他尼与化合物（I)之间具有协同作用， 可以协同发挥抗炎镇痛作用，可以开发成抗炎镇痛药。
[0058]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物(I)，2. -种布美他尼的药物组合物，其特征在于:包括布美他尼、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可W接受的载体。3. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将射 干的干燥根茎粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用 70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b) 中70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为8:1、5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。4. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。5. 根据权利要求3所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。6. 权利要求1所述的化合物(I)在制备抗炎镇痛的药物中的应用。7. 权利要求2所述的布美他尼的药物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
【文档编号】C07D491/22GK105837589SQ201610176043
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月24日
【发明人】薛君, 李丽, 赵玉强
【申请人】薛君