一种具有抗炎镇痛活性的塞隆骨提取物、制备方法及中药制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药物提取物，具体地说，涉及一种具有抗炎镇痛活性的塞隆骨提 取物、制备方法及中药制剂。
【背景技术】
[0002] 塞隆骨为仓鼠科动物高原齡鼠（MyospalaxbaileyiThomas)去脑的干燥全架骨 骼。夏、秋两季器械捕捉，猎获后立即处死，剥去皮、肉、去脑，剔净残留筋肉，及时阴干或低 湿烘干。用时打碎，水煎或泡酒服。具有祛风散寒除湿、通络止痛、补益肝肾的功效，可用于 风寒湿痹引起的肢体关节疼痛、肿胀、屈伸不利，肌肤麻木，腰膝酸软。研究表明（海平.塞 隆骨抗炎作用（II).高原医学杂志，2002, 12(1) ;8-10 ;海平.塞隆骨镇痛作用和对脑内 单胺类神经递质的影响.山东中医杂志，2001，20(4) ;232-234)塞隆骨具有一定的抗炎和 镇痛作用，但现有技术中采用的都是用塞隆骨泡水或泡酒服用，其成分复杂，效果不明显， 因此十分有必要制备分离塞隆骨的活性部位。
[0003] 中国专利文献CN201410472564. 5,公开日2015. 01. 14,公开了 一种从塞隆骨 中提取7-0 -羟基胆固醇的方法，包括以下步骤：用1-15%乙醇-正己烷溶解塞隆骨至 50-200mg/mL;-维液相色谱：A相正己烷，B相乙醇，洗脱方式为B相1%等度12min、5% 等度 10min、8%等度 10min、15%等度 10min、30%等度 25min、50%等度 15min、70%等度 15min、100%等度15min，根据紫外吸收光谱收集目的组分；用2-15%乙醇-正己烷溶解至 50-100mg/mL;二维液相色谱：A相正己烷，B相乙醇，5%B相等度30min洗脱，根据紫外吸收 光谱收集目的组分，即得到目的提取物。该方法得到的7-0 -羟基胆固醇纯度可达到99% 以上。
[0004] 然而，目前还未见从塞隆骨中分离纯化获得具有显著抗炎镇痛活性成分的相关报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种具有抗炎镇痛活性的塞隆骨提 取物。
[0006] 本发明的再一的目的是提供所述的塞隆骨提取物的制备方法。
[0007] 本发明的另一的目的是提供供所述的塞隆骨提取物的用途。
[0008] 本发明的第四个目的是提供一种具有抗炎镇痛活性的中药制剂。
[0009] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
[0010] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种塞隆骨提取物的制备方 法，包括以下步骤：
[0011] ⑴粉碎；
[0012] (2)提取：减压蒸馏提取塞隆骨脂溶性提取部位；
[0013] (3)萃取：将步骤⑵所得脂溶性提取部位用去离子水溶解，先用石油醚萃取，水 相再用乙酸乙酯进行萃取，浓缩至干得到乙酸乙酯部分；
[0014] (4)柱分离：
[0015] 干法拌样：在乙酸乙酯部分中加入甲醇充分溶解，再加入硅胶进行拌样，研碎至粉 末状；
[0016] 干法装柱：在柱子中装入硅胶和拌好的样品，以乙酸乙酯：甲醇=1:1的溶剂作为 洗脱液进行洗脱，洗脱液干燥即得塞隆骨提取物。
[0017] 优选的，所述步骤（2)为在70摄氏度下用体积比为95%乙醇减压蒸馏提取，提取 液浓缩至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。
[0018] 优选的，所述步骤（4)中装入柱子的硅胶为200-300目。
[0019] 优选的，所述步骤（4)中装入柱子的硅胶为拌后的样品体积的40-60倍。
[0020] 优选的，所述步骤（4)中洗脱时依次以石油醚：乙酸乙酯=4:1、2:1和1:1进行 梯度洗脱。
[0021] 优选的，所述步骤（4)中通过TLC的位置和显色确定馏分是否一致，收集馏分一致 的部分进行干燥得塞隆骨提取物。
[0022] 为实现上述第一个目的，本发明公开了由上述的制备方法制备的塞隆骨提取物。
[0023] 为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：上述塞隆骨提取物在制备抗 炎镇痛药物中的应用。
[0024] 为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：一种具有抗炎镇痛活性的中 药制剂，其由上述塞隆骨提取物或者添加药物学常用的辅料和药学可接受的载体制成。
[0025] 优选的，所述塞隆骨提取物的质量分数20-90%。
[0026] 其中经检测，具有明显抗炎镇痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脱部分 (得到白色粉末状和针状晶体混合物）。
[0027] 本发明优点在于：本发明所获得的塞隆骨提取物具有抗炎镇痛活性，可以制备抗 炎镇痛药物，尤其是中药制剂。该中药制剂中的塞隆骨提取物可占制剂总质量的20-90%， 其余可添加药物学常用的辅料和药学可接受的载体。
【具体实施方式】
[0028] 实施例1本发明的塞隆骨提取物的制备
[0029] 一、方法步骤
[0030](1)取塞隆骨风干品进行粉碎，可以为粉碎后过120目筛。
[0031] (2)提取：在旋转蒸发仪70摄氏度下用体积比为95%乙醇提取4次，2h/次，再将 这4次的提取液合并，减压浓缩至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。（高浓度乙醇提取可避 免大极性物质被同时提出，减少分离过程中的物质干扰）。
[0032] (3)脂溶性部分的萃取：去离子水溶解，分别用石油醚和用乙酸乙酯进行萃取，每 次萃取静置半小时，萃取4一6次，合并萃取液分别浓缩至干得到石油醚部分和乙酸乙酯部 分。具体是：先用石油醚进行萃取，目的是减少乙酸乙酯部分中的小极性杂质。石油醚萃取 的水相再用乙酸乙酯萃取，有机相即萃取液。
[0033] (4)柱分离：乙酸乙酯部分
[0034] 干法拌样：在5g的乙酸乙酯部分中加入15ml纯甲醇溶液充分溶解，再加入约15g 200-300目硅胶进行拌样，研碎至粉末状；
[0035] 干法装柱：装柱硅胶为200-300目，约干法拌样所得粉末状样品的50倍
[0036] 必须保证柱子平、实、正三个原则；将拌好的样品均匀的倒入柱子里，放一团棉花， 防止冲柱时把样品冲起来；则以石油醚：乙酸乙酯=4:l(v/v)的溶剂开始冲柱，至淡黄色 色带无色为止，换石油醚：乙酸乙酯=2:1的梯度继续冲，同上，依次以石油醚：乙酸乙酯 =1:1梯度冲到色带跑完为止，最后点板子进行合并。
[0037] 所述点板子即以硅胶板为固定相，乙酸乙酯：石油醚=1:1. 5(体积比）为流动相， 显示剂为5%硫酸乙醇溶液，以色谱板上至下第二个点（最大的点）显色为紫色点的部分进 行合并。
[0038] 点板子的目的是合并洗脱液中馏分相同的部分。
[0039]二、结果
[0040] 其中经检测，具有明显抗炎镇痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脱部 分（得到白色粉末状和针状晶体混合物），本发明所得塞隆骨脂溶性部分部分的纯化产物 称之为SLG-e。
[0041] 本发明所得的塞隆骨提取物可以制备抗炎镇痛药物，尤其是中药制剂。该中药制 剂中的塞隆骨提取物可占制剂总质量的20-90%，其余可添加药物学常用的辅料和药学可 接受的载体。
[0042] 三、实验
[0043] 1.本发明的塞隆骨提取物SLG-e对以二甲苯所致的小鼠耳肿胀急性炎症模型的 影响
[0044] 1. 1实验动物
[0045] 昆明种小鼠，雌性，6-8周龄，体重20 - 25g，分为5组，每组10只。购自青海省实 验动物中心。
[0046] 1.2受试药物及实验材料：；
[0047] 二甲苯，塞隆骨脂溶性部分部分纯化产物SLG-e
[0048] 1. 3实验方法
[0049] 小鼠随机分组，连续给药一周，每鼠于右耳廓均匀涂10-50iil二甲苯，左耳作对 照。2小时后脱椎处死，剪下小鼠耳廓，用9mm的穿孔器将耳廓圆片取下，称重。
[0050] 1. 4结果
[0051] 表1 :塞隆骨提取物对二甲苯所致的小鼠耳肿胀的抑制作用
[0052]
[0053] *p〈0. 05, **p〈0. 01，***p〈0.OOlvsModel
[0054]SLG-e能明显抑制（P〈0. 05,P〈0. 01)二甲苯所致的小鼠急性炎症反应，表现出很 好的量效关系。
[0055] 2.SLG-e对蛋清致大鼠足肿胀的影响
[0056] 2. 1实验动物
[0057]SD大鼠，雌雄性兼备，6-8周龄，体重120 - 150g，分为5组，每组10只。购自青海 省实验动物中心。
[0058] 2. 2受试药物及实验材料：
[0059] 塞隆骨提取物（SLG-e)，新鲜鸡蛋清。自制大鼠足肿胀测定仪。
[0060] 2. 3实验方法
[0061] 选用健康SD大鼠50只，雌雄各半，体重150 士 30g，随机分为5组，分别为空白对 照组、阳性对照组和SLG-e高、中、低剂量组，按照表2所列剂量与途径给药。空白对照组灌 胃等容积的生理盐水，每日给药1次，连续给药7d实验前于每只大鼠左后足踩关节处做标 记，用外径千分尺测定大鼠左后足厚度。末次给药30min后于大鼠左后足拓皮下