本发明涉及一种含二十八烷醇脂质体的制备方法及应用，属于生物工程领域。
背景技术：
牛磺酸(taurine)又称牛胆酸，是一种含硫非蛋白质氨基酸，化学名为2－氨基乙磺酸，是人体内存在的一种具有多种生理功能的含硫氨基酸，具有促进大脑发育、增强视力、抗炎、解热、降血压、降血糖、强肝利胆等作用，是人体内最重要的氨基酸之一。牛磺酸无任何毒副作用，故发达国家对它的研究和应用十分重视。近年来随着对其生理作用、营养价值的深入研究，其应用变得非常广泛，牛磺酸在国外大量用作营养保健品和食品添加剂，据报道，美国和日本是最主要的消费国，年消费量分别达一万吨和五千多吨。二十八烷醇是一种生物活性物质，其主要生理作用包括：1)增进耐力、精力和体力；2)缩短肌神经反应时间，提高反应敏锐性；3)促进激素功能，减轻肌肉疼痛；4)改善心肌功能，降低收缩期血压；5)提高机体基础代谢率。二十八烷醇可用于治疗血钙过多的骨质疏松，治疗高胆固醇和高脂蛋白血疾病，刺激动物及人类的性行为，含有二十八烷醇的化妆品能促进皮肤血液的循环和活化细胞，有消炎、防治皮肤病等功效。而且二十八烷醇安全性极高，用量很少。而且二十八烷醇和牛磺酸联合作用于机体，不会产生任何毒性和致突变作用，能共同发挥其保健功效。由于高级脂肪醇的水溶性较差，因此在饮料中添加会影响其风味和感观。因此，需要做适当修饰，增加其溶解性能。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供一种含二十八烷醇脂质体的制备方法，以增强二十八烷醇的溶解性，并且和牛磺酸联用达到保健功效。本发明还要解决的技术问题是提供上述含二十八烷醇脂质体的应用。为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：一种含二十八烷醇脂质体的制备方法，包括如下步骤：步骤一：在水-二氯甲烷乳化液中，加入二十八烷醇和牛磺酸，以硫酸酯酶为催化剂催化合成牛磺酸二十八烷醇酯(to)溶液；步骤二：将胆固醇水溶液加入到步骤一得到的牛磺酸二十八烷醇酯(to)溶液中进行超声乳化，然后室温旋蒸除去二氯甲烷，得到脂质体溶液；步骤三：将脂质体溶液进行水化，然后通过脂质体挤出器制成粒径均匀的含二十八烷醇脂质体(to脂质体)，最后冻干成粉。进一步地，步骤一中，所述水-二氯甲烷乳化液通过如下方法制备：将含有1～2wt％(优选1.5wt％)聚乙烯醇的水溶液与二氯甲烷以体积比1:1～2:1(优选1:1)混合，在8000～10000r/min高速搅拌下制得水-二氯甲烷乳化液。二十八烷醇和牛磺酸的质量比为3:1～4:1(优选3.3:1)，二者总的加入质量为5～10mg/ml(优选8.6mg/ml)水-二氯甲烷乳化液。所述硫酸酯酶的比活力为1000-5000u/mg蛋白，加入量为20～50mg/ml(优选50mg/ml)水-二氯甲烷乳化液。催化合成的反应温度为30～40℃(优选37℃)，反应时间为4～8h(优选6h)，反应结束后静置分层，取下层即为牛磺酸二十八烷醇酯溶液(to溶液)，牛磺酸二十八烷醇酯结构式如下：步骤二中，所述胆固醇水溶液的浓度为5～10mg/ml(优选8mg/ml)，其加入量与牛磺酸二十八烷醇酯溶液体积比为1:4～1:2(优选1:2.5)；超声乳化功率为200～300w，(优选250w)，乳化时间为10～30min(优选20min)。步骤三中，水化的方法为：将脂质体溶液与20～40g/l(优选30g/l)的柠檬酸水溶液混合水化2～4h(优选3h)，脂质体溶液与柠檬酸水溶液的混合体积比为5:1～2:1(优选3:1)；冻干温度为-50～-55℃(优选-50℃)，真空度为0.006～0.012mbar(优选0.008mbar)，冻干时间为72～96h(优选80h)。上述制备方法制备得到的含二十八烷醇脂质体(to脂质体)也在本发明的保护范围中，该脂质体粒径为100～400nm，优选200nm。本发明还要求保护上述含二十八烷醇脂质体(to脂质体)作为添加剂加入食品、饮料或化妆品中的应用，将该脂质体配制成100～500mg/l(优选200mg/l)的水溶液加入食品、化妆品或饮料中。有益效果：本发明利用二十八烷醇和牛磺酸合成制备了含二十八烷醇脂质体，解决了高级脂肪醇水溶性差的问题，其在食品、化妆品和饮料中添加不会产生任何风味及感观的问题，均一性较好；同时，牛磺酸与二十八烷醇对机体调节具有互补，协同的作用，利于吸收和体内循环。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。实施例11)将5ml含1.5wt％聚乙烯醇(购自阿拉丁试剂公司，货号p119363)的水溶液与5ml二氯甲烷混合，在8000r/min高速搅拌下制得水-二氯甲烷乳化液；2)将66mg二十八烷醇和20mg牛磺酸加入到制得的水-二氯甲烷乳化液中，加入500mg硫酸酯酶(酶的比活力为5000u/mg蛋白)，在37℃下反应6h，反应结束，静置分层，取下层即为牛磺酸二十八烷醇酯溶液(to溶液)；3)将40mg胆固醇加入到2ml水中制得胆固醇水溶液，然后与to溶液混合，以250w功率进行超声乳化，乳化20min，室温旋蒸除去二氯甲烷，再加入0.6ml30g/l柠檬酸水溶液混匀，水化3h，之后用脂质体挤出器制成平均粒径为200nm的to脂质体，最后放入冻干机，在温度-50℃，0.008mbar下冻干80h即得to脂质体冻干粉。实施例21)将10ml含1.0wt％聚乙烯醇(购自阿拉丁试剂公司，货号p119363)的水溶液与5ml二氯甲烷混合，在10000r/min高速搅拌下制得水-二氯甲烷乳化液；2)将60mg二十八烷醇和15mg牛磺酸加入到制得的水-二氯甲烷乳化液中，加入300mg硫酸酯酶(酶的比活力为1000u/mg蛋白)，在30℃下反应4h，反应结束，静置分层，取下层即为牛磺酸二十八烷醇酯溶液(to溶液)；3)将25mg胆固醇加入到2.5ml水中制得胆固醇水溶液，然后与to溶液混合，以200w功率进行超声乳化，乳化30min，室温旋蒸除去二氯甲烷，再加入0.5ml20g/l柠檬酸水溶液混匀，水化2h，之后用脂质体挤出器制成平均粒径为100nm的to脂质体，最后放入冻干机，在温度-55℃，0.006mbar下冻干72h即得to脂质体冻干粉。实施例31)将5ml含2.0wt％聚乙烯醇(购自阿拉丁试剂公司，货号p119363)的水溶液与5ml二氯甲烷混合，在9000r/min高速搅拌下制得水-二氯甲烷乳化液；2)将75mg二十八烷醇和25mg牛磺酸加入到制得的水-二氯甲烷乳化液中，加入400mg硫酸酯酶(酶的比活力为4000u/mg蛋白)，在40℃下反应8h，反应结束，静置分层，取下层即为牛磺酸二十八烷醇酯溶液(to溶液)；3)将50mg胆固醇加入到1.25ml水中制得胆固醇水溶液，然后与to溶液混合，以300w功率进行超声乳化，乳化10min，室温旋蒸除去二氯甲烷，再加入0.625ml40g/l柠檬酸水溶液混匀，水化4h，之后用脂质体挤出器制成平均粒径为400nm的to脂质体，最后放入冻干机，在温度-52℃，0.012mbar下冻干96h即得to脂质体冻干粉。对比例1将66mg二十八烷醇、40mg胆固醇加入2ml水中，以250w功率进行超声乳化，乳化20min，再加入0.6ml30g/l柠檬酸水溶液混匀，水化3h后，用脂质体挤出器制成平均粒径为200nm的脂质体，最后放入冻干机，在温度-50℃，0.008mbar下冻干80h制得二十八烷醇胆固醇冻干粉。对比例2将20mg牛磺酸、40mg胆固醇加入2ml水中，以250w功率进行超声乳化，乳化20min，再加入0.6ml30g/l柠檬酸水溶液混匀，水化3h后，用脂质体挤出器制成平均粒径为200nm的脂质体，最后放入冻干机，在温度-50℃，0.008mbar下冻干80h制得牛磺酸胆固醇冻干粉。对比例3将66mg二十八烷醇、20mg牛磺酸、40mg胆固醇加入2ml水中，以250w功率进行超声乳化，乳化20min，再加入0.6ml30g/l柠檬酸水溶液混匀，水化3h后，用脂质体挤出器制成平均粒径为200nm的脂质体，最后放入冻干机，温度-50℃，0.008mbar冻干80h制得含牛磺酸和二十八烷醇酯的脂质体冻干粉。将实施例1～3、对比例1～3制备的脂质体冻干粉分别配制成200mg/l水溶液，然后进行粒径及多分散度测试和澄清度测试，结果见表1。其中，粒径及多分散度测试利用zetasizernanos90测定溶液中溶质的粒径和多分散度。澄清度测试采用分光光度法，以蒸馏水作参比，用1cm比色皿，在680nm波长下测定透光率，表示样品的澄清度。表1粒径(nm)多分散度透光率(％)实施例1202±80.112±0.01999.89±0.08实施例2105±120.221±0.03495.97±0.15实施例3403±320.249±0.02594.58±1.95对比例1502±3320.674±0.12558.23±12.43对比例2492±3230.853±0.04845.68±14.68对比例3574±3940.838±0.08437.56±17.94从表1数据可以看出，采用二十八烷醇和牛磺酸合成to溶液，然后与胆固醇超声乳化，再经水化、脂质体挤出得到的含二十八烷醇脂质体(to脂质体)能够有效解决高级脂肪醇水溶性差的问题，具有显著的进步。本发明提供了一种含二十八烷醇脂质体的制备方法及应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。当前第1页12