本发明属于植物提取领域，具体涉及一种低农残灵芝多糖提取物及其制备方法。
背景技术：
：灵芝是一种名贵药材，又称瑞草、灵芝草，其子实体、孢子粉、菌丝体均可入药，在我国已经有2000多年的用药历史。灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，具有极高的医疗价值和营养价值，是我国传统的名贵中药材，被认为具有滋补强身、扶正固本、轻身延年之功效。灵芝多糖是主要活性组分之一，近年来，越来越多的研究表明，灵芝多糖具有强烈的抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗氧化、降血糖及免疫活性作用。在灵芝栽培过程中，为了避免病虫害对灵芝生长造成的影响而使用农药的现象比较常见，农药的使用必然会产生残留，大大影响了灵芝相关制品的质量与价值。国际上(如欧盟)对保健品与食品中的农药残留规定了严格的限量标准。灵芝提取物中农药残留问题，已成为制约灵芝相关制品进入国际市场的重要因素之一。现有技术专利公开号cn101711777a将灵芝药材粉碎后加入活性炭，乙醇提取，过滤，收集提取滤液，浓缩，加六号溶剂油萃取脱毒，干燥，粉碎，过筛，混合得到灵芝提取物脱农残的产物；该工艺采用乙醇混合活性炭提取、混合溶剂萃取脱除灵芝提取物中的农药残留，未其提及灵芝提取物中对一些顽固型农残的脱除效果。现有技术专利公开号cn108042590a使用乙醇提取人参茎叶，经过水沉除杂，凝胶柱层析得到低农残的人参茎叶提取物；该工艺使用凝胶柱层析纯化、脱除人参茎叶提取物中的农残，但凝胶填料价格过高，而且会产生填料中化学物质残留的问题。现有技术专利cn104839378a以成品茶、半成品茶或茶鲜叶为原料，经原料拼配、低温水提、膜过滤、反渗透膜浓缩、树脂吸附、灭菌，得到脱农残的茶浓缩液，喷雾干燥后得到脱农残的速溶茶粉；该工艺使用树脂吸附技术脱除茶叶中的农残，但其会造成树脂残留问题。现有专利技术公开号cn104173399a公开了一项应用亚临界技术去除农药残留制得低农残人参茎叶总皂苷的方法，各项农残均小于0.01ppm，人参茎叶总皂苷含量为65～90％；该工艺应用亚临界技术去除人参茎叶中的农药残留，但其对设备要求高，难以实现大规模生产。现有专利技术公开号cn101157731a公开了一项采用人参、西洋参不同部位为原料，应用大孔树脂去除农药残留的方法，各项农残均小于10ppb，半乳糖醛酸含量为1.0％～25.0％。该专利使用大孔树脂吸附的方法脱除人参、西洋参提取物的农残，缺点是可能会造成树脂残留问题，而且大孔树脂对农残种类多、性质差异大的一类提取物中的农残脱除效果较差。现有专利技术公开号cn1723969a公开了一种超临界co2脱除人参中有机氯农药方法，有机氯农残脱除率在94％以上；该专利使用超临界co2脱除人参中有机氯农药残留，该工艺设备成本高，较难工业化生产。综上所述，现有技术在脱除保健品与食品中的农药残留、尤其是灵芝多糖中提取物的农药残留方面存在诸多问题，因此亟待改进。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是克服
背景技术：
的技术缺陷，提供一种低农残灵芝多糖提取物及其制备方法。本发明以灵芝为原料，经提取、纯化、脱农残后的灵芝多糖提取物具有多糖含量高、农残(特别是顽固型农残)含量低等优点；其中，灵芝多糖提取物中多糖含量≥35.32％，且顽固型农残α-硫丹、β-硫丹、氟虫腈、毒死蜱、高效氯氟氰菊酯、吡虫啉、马拉硫磷、水胺硫磷、乐果、氯氰菊酯、三唑磷的含量均低于0.05ppm，灵芝多糖提取物各项农残含量符合usp561标准；本发明工艺简单，易于操作，适合工业化生产。本发明解决上述技术问题所采用的技术手段为：一种低农残灵芝多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)提取：取灵芝药材，粉碎成粗粉，热水回流提取，过滤，减压浓缩，得浓缩液；(2)醇沉：向步骤(1)所述浓缩液中加入乙醇，搅拌，室温静置，抽滤，保留滤渣；(3)吸附：用水溶解步骤(2)所述滤渣，加入吸附剂，搅拌吸附，抽滤，保留滤液；(4)萃取：向步骤(3)所述滤液中加入萃取溶剂进行萃取，保留下层水相，减压浓缩收集所述水相，真空干燥，粉碎，即得低农残灵芝多糖提取物。优选地，所述步骤(1)中，所述粗粉的目数为20～30目。优选地，所述步骤(1)中，所述热水回流提取的次数为两次，加入的水的量分别为所述药材量的10倍量、8倍量(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h。优选地，所述步骤(1)中，所述过滤采用300目滤布，合并滤液。优选地，所述步骤(1)中，所述减压浓缩的真空度为-0.07～-0.09mpa，温度为60～80℃。优选地，所述步骤(1)中，所述浓缩液的体积为所述药材量的1/5～1/10(v/m)。优选地，所述步骤(2)中，所述乙醇的浓度为95％，所述乙醇的量为4～6倍的步骤(1)所述浓缩液(v/v)。优选地，所述步骤(2)中，所述室温下静置时间为2～5h。优选地，所述步骤(3)中，所述水的量为1/5～1/10倍的步骤(1)所述药材量(v/m)。优选地，所述步骤(3)中，所述吸附剂为活性炭与硅藻土的混合物。更优选地，所述活性炭与硅藻土的混合物的量为1/20～1/30的步骤(1)所述药材量(m/m)。进一步优选地，所述活性炭与所述硅藻土的比例为1∶1～2∶1(m/m)。最优选地，所述活性炭与所述硅藻土的比例为2∶1(m/m)。优选地，所述步骤(3)中，所述搅拌吸附的时间为1～2h。优选地，所述步骤(4)中，所述萃取溶剂的量为1～2倍的步骤(3)所述滤液(v/v)。优选地，所述步骤(4)中，所述萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂。更优选地，所述乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂的比例为5∶2∶1(v/v)。优选地，所述步骤(4)中，所述萃取次数为1～3次。优选地，所述步骤(4)中，所述减压浓缩的真空度为-0.07～-0.09mpa，温度为60～80℃。一种低农残灵芝多糖提取物，采用上述方法制备得到。上述技术方案中，所述顽固型农残是指使用常规处理方法，如常规的有机溶剂萃取、大孔吸附或者活性炭吸附、用溶剂或者洗涤剂清洗等较难脱除的一类农残。本发明的基本原理：本发明利用特定使用量的由特定比例的活性炭与硅藻土组成的混合吸附剂对灵芝多糖提取物中的农残(特别是顽固型农残)的物理吸附(范德华力或静电引力)作用，将一部分农残(特别是顽固型农残)吸附在其中，从而达到脱农残(特别是顽固型农残)的效果；另外，特定量的硅藻土具有良好的助滤效果。同时，本发明利用农残(特别是顽固型农残)在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中(灵芝多糖水溶液与由特定比例的乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂组成的混合有机萃取溶剂)溶解度或分配系数的不同，使农残(特别是顽固型农残)从一种灵芝多糖水溶液内转移到混合有机萃取溶剂中；采用一定的、不同比例的混合有机萃取溶剂可以增强对一些农残(特别是顽固型农残)的萃取效果。与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点：(1)本发明以灵芝为原料，经提取、纯化、脱农残后的灵芝多糖提取物具有多糖含量高、农残(特别是顽固型农残)含量低等优点；其中，灵芝多糖提取物中多糖含量≥35.32％，且顽固型农残α-硫丹、β-硫丹、氟虫腈、毒死蜱、高效氯氟氰菊酯、吡虫啉、马拉硫磷、水胺硫磷、乐果、氯氰菊酯、三唑磷的含量均低于0.05ppm，灵芝多糖提取物各项农残含量符合usp561标准。(2)本发明工艺简单，易于操作，适合工业化生产。具体实施方式为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于对本发明进一步说明，而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容后，该领域的技术人员对本发明作出一些非本质的改动或调整，仍属于本发明的保护范围。实施例1～3及对比例1～6所述灵芝子实体药材产自浙江龙泉。实施例1～3及对比例1～6所述活性炭购自江苏绿安环保科技有限公司，为20～30目椰壳活性炭。实施例1～3及对比例1～6所述硅藻土购自嵊州华力硅藻土制品有限公司，cd07型。实施例1～3及对比例1～6所述低农残灵芝多糖提取物中的多糖含量、多糖得率计算公式如下所示：其中，公式中供试样品是指成品灵芝多糖提取物；多糖质量是指成品灵芝多糖提取物中灵芝多糖的质量；投料量是指原料灵芝子实体药材的质量。实施例1适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入500ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用150ml的水溶解沉淀，向溶液中加入40g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶1(m/m)搅拌吸附1h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入150ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照5∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。实施例2适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至30目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.08mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为150ml。向浓缩液中缓慢加入1l的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置4h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用200ml的水溶解沉淀，向溶液中加入50g的活性炭与硅藻土按照混合比例2∶1(m/m)搅拌吸附2h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入200ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照5∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。实施例3适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至30目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为200ml。向浓缩液中缓慢加入1l的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置5h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用200ml的水溶解沉淀，向溶液中加入47g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶1(m/m)搅拌吸附1.5h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入200ml的萃取溶剂，重复萃取3次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照5∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.09mpa，浓缩后60℃真空干燥，浓缩后真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例1适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入400ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用300ml的水溶解沉淀，向溶液中加入100g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶2(m/m)搅拌吸附，抽滤，保留滤液。向滤液中加入300ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照1∶1∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例2适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至30目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为150ml。向浓缩液中缓慢加入600ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置2h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用200ml的水溶解沉淀，向溶液中加入20g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶1(m/m)搅拌吸附，抽滤，保留滤液。向滤液中加入200ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照2∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例3适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入400ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用200ml的水溶解沉淀，向溶液中加入40g的中性氧化铝搅拌吸附2h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入200ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照5∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例4适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入400ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用200ml的水溶解沉淀，向溶液中加入40g硅藻土搅拌吸附2h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入200ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂按照5∶2∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例5适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入500ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用150ml的水溶解沉淀，向溶液中加入40g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶1(m/m)搅拌吸附1h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入150ml的乙酸乙酯，重复萃取2次，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。对比例6适量饮用水漂洗后的灵芝子实体药材粉碎至20目粗粉，称取1kg，热水回流提取2次，加入的水的量分别为药材量的10倍、8倍(v/m)，提取时间分别为2h和1.5h，提取结束后300目滤布过滤，合并滤液，60℃、-0.07mpa条件下减压浓缩至浓缩液体积为100ml。向浓缩液中缓慢加入500ml的95％乙醇，边加边搅拌，室温下静置3h后抽滤，保留滤渣。将滤渣用150ml的水溶解沉淀，向溶液中加入40g的活性炭与硅藻土按照混合比例1∶1(m/m)搅拌吸附1h，抽滤，保留滤液。向滤液中加入150ml的萃取溶剂，重复萃取2次，萃取溶剂为乙酸乙酯、石油醚两种有机溶剂按照1∶1比例的混合溶剂，萃取保留下层水相，60℃减压浓缩收集的水相，真空度-0.07mpa，浓缩后60℃真空干燥，干燥后粉碎，即得灵芝多糖提取物。效果实施例一、本发明灵芝多糖含量检测方法(苯酚-硫酸法)：1.对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含100μg的溶液，即得。2.标准曲线的制备：分别精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，补加水至2.0ml，分别加入5％苯酚溶液1ml，混匀，迅速垂直加入硫酸7.0ml，摇匀，置沸水浴中显色2min，取出。置冰水浴中10min，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录va)，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.供试品溶液的制备取本品约1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水20ml超声溶解并不时震摇，待样品分散均匀无结块后，再加40ml水，超声30min，待冷却后加水稀释至刻度，摇匀，室温放置1小时。精密量取上清液2ml，垂直加入乙醇(95％乙醇)10ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，4000r/min离心20min，小心倾去上清液，离心管轻轻倒扣在滤纸上，待不再流下液体后，再加入水适量超声溶解沉淀，全部转移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“分别加入5％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中的无水葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。实施例1～3和对比例1～6制备得到的灵芝多糖提取物中灵芝多糖含量见表1，顽固型农残含量见表2(检测方法与标准：gb/t20769-2008水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定，液相色谱-串联质谱法)。表1实施例1～3及对比例1～6制备得到的灵芝多糖提取物中灵芝多糖含量及灵芝多糖得率产品多糖含量％得率％实施例136.251.53实施例235.321.66实施例338.851.37对比例133.581.13对比例234.731.36对比例334.251.41对比例435.511.55对比例537.151.49对比例635.251.53表2实施例1～3及对比例1～6制备得到的灵芝多糖提取物中顽固型农残含量注：农残检测限量0.01ppm。由对比例1和2可知，当采用本发明所述范围外的由活性炭与硅藻土组成的混合吸附剂及其使用量和比例、以及采用本发明所述范围外的由乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂组成的混合有机萃取溶剂及其使用量和比例，均无法得到本发明所述技术效果。由对比例3和4可知，虽然吸附剂的使用量在本发明所述范围内，但采用常规的单一吸附剂也是无法得到本发明所述技术效果。由对比例5和6可知，虽然吸附剂及有机萃取溶剂的使用量在本发明所述范围内，但采用常规的单一有机萃取溶剂或两种常规的混合有机萃取溶剂同样无法得到本发明所述技术效果。由此可知，只有采用本发明所述特定使用量的由特定比例的活性炭与硅藻土组成的混合吸附剂、以及采用本发明所述特定使用量由特定比例的乙酸乙酯、正丁醇、石油醚三种有机溶剂组成的混合有机萃取溶剂才能实现本发明所述技术效果。上述说明并非对发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本
技术领域：
的普通技术人员在发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。当前第1页12