本发明涉及化妆品成分，其可局部施用于皮肤，以提供与香味有关的或随时间保持皮肤美容有关的有益效果。本发明特别涉及能够通过影响皮肤微生物群的组成发挥有益效果的所述化妆品成分。
在我们20多岁时，我们的皮肤大约每27天自我更新一次，而在我们50多岁时，这个过程需要长达39天。换句话说，在短短几十年内，我们的皮肤需要大约44％以上的时间来自我更新。
皮肤再生过程是复杂的。维持皮肤健康和美容的过程始于皮肤基底层中的干细胞活化，向上直至角质层和微生物层(stratummicrobium)的浅层。
微生物层是一个术语，其指的是大量有益微生物在我们的皮肤表面定植，虽然它在技术上不是一层皮肤，但它确实与皮肤共生相互作用，使个体能够以每日为基础维持健康。微生物层微粒保持在流动状态，其中常驻微生物群落(或微生物群)的组成随着时间的推移而响应于宿主的内在和外在因素而变化。目前认识到，健康、平衡的微生物群不仅可以为人类宿主提供健康益处，还可以提供美容益处。
需要通过提供化妆品成分以及可以提供有益效果的美容干预方法来改善人类皮肤的健康和/或外观，例如加速皮肤再生过程，并且可以从表皮的较低到较高层的整体上递送有针对性的生物作用，以及促进健康、平衡的微生物群。
申请人令人惊奇地发现了一种解决现有技术缺陷的化妆品成分。
因此，本发明在第一方面提供了一种化妆品成分，其包含圆齿列当甙(crenatoside)和阿克替甙(acteoside)的混合物。
另一方面，本发明提供改善人体皮肤状况或外观的方法，该方法包括将所述化妆品成分局部施用于皮肤的步骤。
另一方面，本发明提供平衡人体宿主皮肤微生物群的方法，该方法包括将所述化妆品成分局部施用于皮肤的步骤。
另一方面，本发明提供了一种适于局部施用于皮肤的含有所述化妆品成分的制剂。
鉴于以下对本发明特定实施方案的详细描述，将进一步理解本发明的这些和其他方面。
本发明的化妆品成分可以为富含圆齿列当甙和阿克替甙的植物提取物。
所述植物提取物可以得自列当科(orobanchaceaefamily)的植物，且更具体地得自欧列当(orobancherapum)。
虽然化合物圆齿列当甙和阿克替甙均为水溶性的，但申请人发现它们在水中不稳定。因此，优选通过使用醇、更特别是乙醇从植物材料中提取化合物来获得提取物。如果醇不含水，则是特别优选的。
为了确保提取物在活性物质的含量和着色方面都是稳定的，期望本发明的化妆品成分作为在含羟的溶剂中的提取物存在。
作为在本发明中使用的术语，含羟的溶剂是指含有至少两个羟基的溶剂。适合的含羟的溶剂包括甘油或二醇，例如一缩二丙二醇，二甘醇，一缩二丁二醇(dibutyleneglycol)，丙二醇，丁二醇，戊二醇，庚二醇和己二醇。
用于提取物的特别优选的溶剂为1,3-丙二醇。
可以使用上述涉及的含羟的溶剂直接提取植物材料。然而，优选的情况是，如果使用醇如乙醇作为提取介质，并且进行随后的溶剂交换步骤以用含羟的溶剂代替提取溶剂以稳定化妆品成分。如果提取溶剂是与含羟的溶剂相比较低沸点的溶剂，则可以以相对直接的方式除去提取溶剂。
在本发明的一个实施方案中，植物提取物形式的化妆品成分可以在一种方法中得到，该方法包括下列步骤：
i)用提取溶剂、优选乙醇提取包含化合物圆齿列当甙和阿克替甙的植物源；
ii)过滤该提取物以除去固体；
iii)进行溶剂交换步骤，其包括将提取物与含羟的溶剂混合并且通过蒸发除去提取溶剂；
iv)任选地使用适合的脱色剂例如活性炭使步骤iii)中得到的提取物脱色；
v)过滤提取物以除去固体；和
vi)任选地通过蒸发将提取物调整至期望的干物质含量。
本发明的化妆品成分的特征在于极高含量的圆齿列当甙和阿克替甙。在本发明的一个实施方案中，植物提取物形式的化妆品成分含有至少15wt％、更具体地至少16wt％、更具体地至少17wt％、更具体地至少18wt％且更具体地至少19wt％的圆齿列当甙和阿克替甙的混合物，以该提取物干物质总重为基准。在一个实施方案中，以所述混合物的总重为基准，所述提取物包含约20wt％至约60wt％的圆齿列当甙和约80wt％至约40wt％的阿克替甙，优选约30wt％至约50wt％的圆齿列当甙和约70wt％至约50wt％的阿克替甙，更优选约35wt％至约45wt％的圆齿列当甙和约65wt％至约55wt％的阿克替甙，例如约40wt％的圆齿列当甙和约60wt％的阿克替甙。另外可能的情况是，本发明的化妆品成分包含至少15wt％，更具体地至少16wt％，更具体地至少17wt％，更具体地至少18wt％，且更具体地至少19wt％的圆齿列当甙和阿克替甙的每一种，以提取物的干物质总重为准。
本发明的一个优点在于化妆品成分易于掺入适用于局部应用的所有方式的制剂中，包括化妆品制剂和精细香料。
由于高度着色的成分作为化妆品制剂或精细香料制造商的原料可能是不可接受的，因此非常有利的是可以制备本发明的化妆品成分，使得其颜色或色调不会改变或损害化妆品制剂或精细香料的任何色调，它们可以以递送期望的美容或其它有益效果所需的水平掺入其中。
本发明的一个特别的优点在于可以获得植物提取物形式的化妆品成分，其具有必需的颜色或色调亮度，这使得它们能够在精细香料应用的化妆品制剂中以有效的水平使用，而不会影响化妆品或精细香料的色调。
根据本领域已知的比色法，可以通过cielab色品坐标l*a*b*表征化妆品成分的亮度和色调。l*值是指定物质亮度的值，并且由0到100之间的值表示。l*值为100表示最亮状态(全白)，且l*值为0表示最暗状态(全黑)。b*值指定物质的蓝黄色调。b*值越大，则黄度越高。b*值越小，则蓝度越高。
可以使用任意适合的商购分光光度计(例如lico690)测量样品的l*a*b*值。分光光度计典型地在进行测量之前通电至少一小时。为此提供的玻璃容器应填充一半待测量的样品，注意确保容器的底部完全被样品覆盖。此后，应将填充的容器放入为其提供的样品架中。应按下仪器上的样品键，并从显示面板上读出l*a*和b*值。在读取任何读数之前，应通过在仪器光学传感器的窗口上放置为此提供的黑色和白色物体来校准仪器的零和100％反射。
在本发明的一个实施方案中，化妆品成分具有的至少一个l*值为至少约70；a*值大于约4且小于约19；且b*值大于约78且小于约91，其中l*、a*和b*值代表cielab系统的色品坐标。
本发明的化妆品成分可以从顶部到底部，即从角质层和微生物层的浅层到皮肤基底层中的干细胞，对天然皮肤更新周期发挥再活化作用。
特别地，申请人已经证明所述化妆品成分是多功能的，即它可以对天然皮肤更新周期发挥至少一种，优选所有的以下整体效果：
-本发明的化妆品成分可以对表皮干细胞提供保护作用。
-本发明的化妆品成分可以传递抗凋亡活性。
-本发明的化妆品成分可以刺激表皮代谢。
-本发明的化妆品成分可以刺激表皮细胞分化。
-本发明的化妆品成分可以刺激皮肤屏障组分产生。
-本发明的化妆品成分可以激活天然表皮脱落过程。
-本发明的化妆品成分可以起到维持表皮微生物群落(微生物群)的平衡的作用。
更具体地，本发明的化妆品成分可以有助于干细胞维持其随时间复制的能力。通过使用光学显微镜检查、与和不与所述化妆品成分一起培养时干细胞随时间的克隆形成能力来证明这种效果。此外，在存在或不存在化妆品成分的情况下检查每日uv暴露对人体干细胞的影响的体外研究表明，暴露于所述化妆品成分的样品中抑制细胞凋亡的蛋白存活素的水平明显更高。
更具体地，本发明的化妆品成分已经在研究中显示出抑制酶半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，它们均为促凋亡酶。
更具体地，对来自未经处理和用本发明的化妆品成分处理的健康供体的人体皮肤外植体的研究表明，用所述化妆品成分处理的样品显示ki67阳性细胞的表达增加(通过免疫组织化学测量)，这表明细胞在表皮中的代谢增加。
更具体地，表皮分化基因的转录组学分析证明与表皮细胞分化相关的某些蛋白质的表达的刺激。这些蛋白质包括聚丝蛋白、内披蛋白和兜甲蛋白。
更具体地，本发明的化妆品成分可以增加神经酰胺的产生，从而证明了恢复皮肤屏障功能的能力。
更具体地，本发明的化妆品成分可以刺激牵涉脱屑过程的酶激肽释放酶5蛋白酶的产生。
人体皮肤表面是多种微生物的家园。这些微生物共同形成微生物组，通常被称为皮肤的微生物群。通常认为皮肤健康和外观需要皮肤微生物的平衡集合。然而，众所周知，由于内在和外在的原因，皮肤微生物群落的平衡可能随时间而变化。例如，某些不期望的微生物，例如病原菌、霉菌和酵母，可能试图定殖皮肤而损害常驻微生物；或到达皮肤表面的营养物可能对某些微生物有效，但对其他微生物则无效；人体宿主适应于其皮肤的消毒产品对某些微生物可能比其他微生物相对更有害。
然而，申请人发现皮肤微生物群落的平衡随时间以不同方式进展，这取决于皮肤表面是用本发明的化妆品成分处理还是未经处理。更具体地，申请人通过在t＝0和14天后对健康志愿者(女性，前臂皮肤)的总微生物dna进行擦拭、提取和测序来进行宏基因组学研究，并且发现化妆品成分基本上平衡了微生物群落的组成组分，所述微生物群落就相对丰度而言包括放线菌门(actinobacteria)，蓝细菌门(cyanobacteria)，变形菌门(proteobacteria)，绿弯菌门(chloroflexi)，厚壁菌门(firmicutes)，螺旋体菌门(saccharibacteria)和拟杆菌门(bacteroidetes)作为主要门。
通过以这种方式有利地平衡皮肤的微生物群，本发明的化妆品成分为宿主提供有益效果，包括改善皮肤健康和外观，以及潜在地减轻许多皮肤病。
如本文所用，与微生物群有关的术语“平衡”是指在适当的时间间隔例如2周内用所述化妆品成分处理的皮肤上主要门的至少一个的量的差异，与未处理的对照相比，变化不大(正面或负面)。如果在相同的时间间隔内，与未处理的对照相比，用所述化妆品成分处理的皮肤上病原体(例如，大芬戈尔德菌(finegoldiamagna))的生长较少，则微生物群也被认为是平衡的。
在下文的实施例中更详细地阐述了评估微生物群平衡的方法。
平衡的微生物群可以通过许多被动和主动机制来支持人类皮肤的健康和状况：常驻微生物可能被动地与病原体竞争皮肤表面的生态位或消耗对病原体生长必不可少的营养物质。它们还积极消耗皮肤上杂乱的物质，包含身体排泄物的混合物以及施用于皮肤或从外部来源与皮肤接触的物质，从而产生代谢物和副产物的复杂混合物，其可抑制乃至杀灭病原体。
由于微生物群和这种皮肤物质之间的相互作用，皮肤表面是化学化合物的混合物的家园，包括蛋白质，脂类和碳水化合物，以及代谢物和副产物，它们可能包含醇，脂肪酸，醛等。这种复杂的化学环境可能含有挥发性和有气味的化合物，并且可能导致个体特有的气味或恶臭。此外，该表面化学可影响施用于皮肤的香料组合物的顶空将在一段时间内放出的方式。
香料成分是油，且它们快速扩散到皮肤上方的顶空或分配到皮肤表层并缓慢蒸发的趋势在某种程度上取决于皮肤表面化学的组成构成，其直接受微生物群平衡的影响。例如，化学混合物的疏水/亲水平衡可能导致一些香料成分迅速地进入顶空，而其他香料成分固定在表面上。其他香料成分甚至可以与皮肤表面上存在的组分反应。
控制从身体散发的气味是一项重要的美容益处。事实上，几个世纪以来，香料一直被用作增强整体个人外观的一种方式。特别地，研究表明，吸引力可能会受到嗅觉的影响。目前还不清楚气味是否会改变面部特征的视觉感知，或者，大脑是如何通过情感评估面部的，但很清楚的是，令人愉快的气味和面部吸引力融入了一个联合情绪评估中。此外，如果个人幸福感受到个人感受的吸引力或个人对他人的吸引力的影响，则控制体臭可以促进社区内的积极社会影响，因为它可以改变人类互相感知的方式。
香料在掩盖恶臭或产生从皮肤散发的令人愉快的气味中的应用是一种在化妆品中特别有用的益处，因为令人愉快的气味可能有助于增强这些产品所设计的传递健康和吸引力的印象。
在香料的设计中，例如精细香料，香料的性能通过从纸质吸墨纸蒸发的方式来评估。这些吸墨纸本质上是纤维质的并且提供非皮肤代表的蒸发表面。经验丰富的调香师会理解，吸墨纸的表面与人体皮肤表面不同，并会在香料设计中考虑到这一点。但是，如果微生物群不平衡并且随着时间的推移不可预测地改变，从而以类似的不可预测的方式改变皮肤的表面化学，则调香师的任务是复杂的。
为了设计从皮肤表面更可预测地蒸发的香料，克服这些技术限制是未满足的需求。
令人惊讶的是，申请人已经发现，使用本发明的化妆品成分与香料组合物结合能够在一段时间期限内平衡皮肤微生物群，从而提供更一致的表面，香料组合物可以从该表面以更可预测的方式散发。
此外，通过使用本发明的化妆品成分来平衡皮肤的微生物群，调香师能够更加考虑选择香料成分以实现特定的享乐效果或改变香料组合物的暂时特性，例如，通过增强某些香料成分的初始盛放(bloom)或使其他香料成分在皮肤表面上更具实质性和持久性来实现。
因此，本发明在其另一方面提供了调节施用于皮肤表面的香料组合物的蒸发的方法，该方法包括将所述化妆品成分同时、依次或分开地施用于皮肤的步骤。
在本发明的具体实施方案中，调节香料组合物蒸发的方法增强了香料组合物在皮肤上的初始感知或增强了香料组合物在皮肤上的保留，或它们两者。
如今，许多人试图避免使用某些常用的止汗活性成分，例如铝或锆盐或杀菌剂和抑菌剂，因为它们被认为对人体皮肤或人体皮肤上含有的微生物菌群不利。因此，消费者越来越希望从止汗剂转变成更加亲肤的除臭产品。然而，由于转变期间可能出现突破性恶臭，它们在某些情况下会被劝阻。申请人认为，这种突破性的恶臭可能是微生物组改变的结果。
本发明的化妆品成分能够改善除臭剂组合物的效能和持久性。特别地，当用于除臭剂组合物时，它提供了更好的恶臭减少和增加的香味强度(参见下面的实施例3)。这对于从止汗剂转变成除臭剂组合物的人特别有利，因为它减少了两种类型组合物的效果之间的差异。
因此，在另一方面，本发明提供了一种用于改善除臭剂组合物的效能和/或持久性的方法，该方法包括将所述化妆品成分添加到所述除臭剂组合物中的步骤。
本发明进一步涉及通过提供包含本发明化妆品成分的除臭剂组合物促进从止汗剂向除臭剂组合物转变的方法。本发明进一步涉及化妆品成分在止汗剂或除臭剂组合物中的用途，特别是在不含铝盐或锆盐的除臭剂组合物中的用途。
本发明的另一个方面提供了包含香料组合物和上述定义的化妆品成分的加强的香料组合物。
在本发明的一个具体的实施方案中，所述加强的香料组合物为精细香料。
在本发明的一个更具体的实施方案中，所述加强的香料组合物为包含香料组合物、上述定义的化妆品成分和乙醇的精细香料。
所述化妆品成分可用于调理或平衡皮肤的微生物群落，因此在含有大量乙醇的局部制剂例如精细香料制剂中使用它有些反直觉，因为人们可能预期乙醇抑制或杀灭微生物群落。然而，在精细香料组合物中，本发明的化妆品成分可以有助于抵消乙醇对微生物菌群造成的任何损害。
如本文所用，如果通过同时、依次或分开地将化妆品成分施用于皮肤表面而相对于相同香料组合物的顶空来说皮肤表面上方的香料组合物的顶空被改变，则认为香料组合物的蒸发被调节。类似地，加强的香料组合物是这样一种香料组合物，其由于含有上述定义的化妆品成分而具有调节的顶空。
发现本发明的化妆品成分能够平衡皮肤的微生物群使得熟练的调香师能够制造定制的香料组合物，其含有选择的香料成分，以考虑到微生物群的组成构成和皮肤表面的相关化学环境以预定的速率蒸发。
本发明的化妆品成分可局部施用于皮肤以提供各种有益效果，包括与随时间推移保持皮肤美容以及上述涉及的香味益处有关的那些。特别地，所述化妆品成分可以以如下所有化妆品的形式使用：用于皮肤表面重修(resurfacing)；皮肤修复激活；皮肤再生；干燥皮肤处理；抗衰老；抗皱；皮肤保湿和水化；皮肤屏障加固；天然皮肤脱落；和皮肤微生物群保护。
通过应用本发明的化妆品成分可以实现的特定美容益处包括：改善皮肤外观，改善皮肤感觉，增加一层或多层皮肤的厚度，增加皮肤的弹性，增加皮肤回弹性，增加皮肤的紧致度，减少皮肤油腻的外观，减少皮肤的光泽外观，减少皮肤暗沉的外观，增加皮肤的水化，对皮肤产生保湿效果，减少细纹外观，减少皱纹外观，改善皮肤质地，改善皮肤光滑度，改善皮肤脱落，改善皮肤脱屑，使皮肤饱满，改善皮肤屏障性质，改善肤色，减少发红外观，减少皮肤斑点外观，改善皮肤的亮度，改善皮肤的光泽，和改善皮肤的半透明性。
可以将本发明的化妆品成分配制成适合于局部施用于皮肤的制剂形式。
适合局部施用的制剂可以是驻留型或冲洗型的所有形式的个人护理产品，包括但不限于化妆品，精细香料，古龙香水，花露水，肥皂和洗涤剂，除臭剂，灌注剂(douches)，女性卫生除臭剂，剃须制剂，护肤品例如清洁、脱毛、面部和颈部、身体和手部制品，保湿剂，防晒剂例如凝胶、霜剂和液体，和室内褐变制剂。
适合于局部施用的制剂可以包含至少一种化妆品可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，化妆品可接受的赋形剂是指化妆品可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂，稀释剂，溶剂或包封材料。在一些实施方案中，赋形剂在与局部制剂的其他成分相容的意义上是化妆品可接受的，并且适合用于与皮肤接触。通常用于制备适于局部施用于人体皮肤的制剂的任何赋形剂、例如化妆品制剂和精细香料可用于本发明。适合的赋形剂包括但不限于可影响感官特性、皮肤渗透性和化妆品成分的生物利用度的成分。更具体地，它们包括液体如水，油或表面活性剂，包括石油，动物，植物或合成来源的那些，例如但不限于花生油，大豆油，矿物油，芝麻油，蓖麻油，聚山梨醇酯(polysorbates)，失水山梨醇酯，醚硫酸盐，硫酸盐，甜菜碱，糖苷，麦芽糖苷，脂肪醇，壬苯醇醚(nonoxynols)，泊洛沙姆，聚氧乙烯，聚乙二醇，右旋糖，甘油，毛地黄皂苷等。
局部施用于皮肤的制剂可以采取任意物理形式。
所述制剂可以是脂质体组合物，混合型脂质体，油质体，类脂质体(niosomes)，醇质体(ethosomes)，毫微型颗粒(milliparticles)，微粒，纳米颗粒和固体-脂质纳米颗粒，囊泡，胶束，表面活性剂的混合型胶束，表面活性剂-磷脂混合型胶束，毫微球，微球和纳米球，脂质球(liposphere)，毫微型胶囊(millicapsule)，微胶囊和纳米胶囊，以及胶囊和纳米乳液的形式，可以加入它们以实现化妆品成分的更大穿透力。
所述制剂可以以任何固体，液体或半固体形式生产，其可用于局部施用于皮肤。因此，这些局部施用制剂包括但不限于霜剂，多层乳剂，例如但不限于水包油和/或硅氧烷型乳剂，油包水和/或硅氧烷型乳剂，水/油/水或水/硅氧烷/水型乳剂，和油/水/油或硅氧烷/水/硅氧烷型乳剂，微乳，乳剂和/或溶液，液晶，无水组合物，水分散体，油，乳液，香脂，泡沫体，水性或油性洗剂，水性或油性凝胶，乳膏，水醇溶液，水-二醇溶液(hydro-glycolicsolution)，水凝胶，搽剂，浆液(sera)，肥皂，面膜，浆液(serum)，多糖薄膜，软膏，摩丝，润发油，糊状物，粉末，棒状物，笔型物和喷雾剂或气雾剂(喷雾剂)，包括驻留型和冲洗型制剂。
现在提供用于进一步示例本发明的一系列实施例。
实施例1：化妆品成分的制备
将在法国lozére手工收集的干燥欧列当在阴凉条件下干燥1个月，然后研磨成粉末。在没有水存在下，在6kg的96％乙醇中提取1kg的欧列当粉末。此后，通过纤维质滤器(0.7微米)过滤将固体材料与液体提取物分离。
将滤液与等质量的1,3-丙二醇合并，然后通过真空蒸发除去乙醇。将得到的1,3-丙二醇提取物用活性炭过滤器过滤。将脱色的提取物调节至1wt％干物质并用0.3微米过滤器过滤。
通过2dnmr分析鉴定出两个主要峰，其占18.9wt％(基于干物质的总重)，该峰相当于圆齿列当甙和阿克替甙。
实施例2：宏基因组学分析
根据实施例1形成的化妆品成分的临床评估对人体志愿者进行。
对患有皮肤干燥的19名女性(年龄：18至50岁，平均年龄：39.5岁)进行双盲和安慰剂对照的临床评估(水分测试仪(corneometer)值低于40au)。参与本研究的所有受试者在研究开始时签署了他们的知情同意书。在使用14和28天后，使用含有0.5％根据实施例1获得的提取物的测试制剂(如下举出)进行测量。安慰剂由不含所述提取物的相同制剂(下文)组成。
本研究中，遵循皮肤宏基因组学进展。所研究的体表面积为前臂。
霜剂形式的测试制剂包含如下成分：
水，癸酸/辛酸甘油三酯，鲸蜡酸脂醇小麦秸苷类(cetearylwheatstrawglycosides)，鲸蜡硬脂醇，实施例1的提取物，苯氧基乙醇，聚二甲基硅氧烷，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸乙酯，香料，己基肉桂醛，丁基苯基甲基丙醛，香茅醇，α异甲基紫罗兰酮，羟基异己基3-环己烯甲醛，氢氧化钠。
安慰剂制剂与测试制剂相同(上述)，除了不使用实施例1的提取物之外。
通过使用用0.15mnacl的无菌溶液润湿的无菌拭子的非侵入性擦拭方法从健康志愿者(50cm2)的前臂采集皮肤微生物菌群的皮肤样品。将拭子在-20℃转移并保持冷冻直至dna提取。
使用
测序和dna分析如下所述进行。
16srrna基因测序：
使用miseq装置(illumina，inc.，sandiego，ca，usa)，通过500次循环配对末端运行进行测序，使用以下引物靶向v3v416s可变区：16s-mi341f正向引物5′-cctacgggnggcwgcag-3′和16s-mi805r反向引物5′-gactachvgggtatctaatcc-3′，产生约460bp的扩增子。
pcr1s如下进行：将8μl模板dna(0.2ng)与5μl每种反向和正向引物(1μm)、5μlkapa高保真缓冲液(5x)、0.8μlkapadntp混合物(各10nm)、0.7μlrt-pcr级水(ambion)和0.6μlkapahifihotstarttaq(1u/μl)混合，总体积为25μl。重复每次扩增，并在扩增后合并重复的样品。pcr1循环由如下组成：95℃3min，然后32个循环：95℃30s，59℃30s，72℃30s，然后在72℃最终延伸3min，使用bioradcfx1000热循环仪。在检查污染的所有步骤中都包括阴性和阳性对照。通过凝胶电泳控制所有重复的库，并使用荧光分析法定量扩增子。
然后根据illumina的16s宏基因组学库制备指南制作产生准备进行分析的文库。简言之，使用agilent2100生物分析仪(agilenttechnologies，santaclara，usa)纯化和控制pcr1扩增子。为了能够同时分析多个样品(多重化)，在pcr2期间使用15-30ngpcr1扩增子添加
使用miseq试剂盒v3600循环(illumina)在miseq测序仪(illumina)上实现运行(500个循环)。测序运行产生了2500万个250碱基的配对末端读数的输出，即高达6千兆碱基。文库和miseq运行由libragen在get-plage平台(inra，auzeville，france)进行。
在miseq运行后，对原始数据序列进行多路解编用并进行质量检查以去除具有模糊碱基的所有读数。然后修剪索引和引物序列，并将正向和反向序列配对。然后使用内部管道处理配对序列以除去嵌合体并用pcr错误读数，并将序列分成1％不同水平的操作分类单位(otu)。将质量良好的分级配对序列映射到silvassuref数据库(版本123；https://www.arb-silva.de/)进行分类指定。然后将数据标准化，并使用white的非参数检验进行比较(white等人，2009)。
结果显示在下面的两个表中。
表1：用媒介物和媒介物+活性成分处理14天后的前臂微生物群门组成
表1列出了研究中发现的主要门(就相对丰度而言)。表1还表明，根据皮肤是否用测试制剂(“媒介物+活性成分”)或安慰剂(“媒介物”)制剂处理的不同，微生物群的进化不同。在门水平，用安慰剂制剂处理的皮肤在d0和d14之间显示出厚壁菌门显著增加，而其他门的水平保持基本稳定。另一方面，对于用测试制剂处理的皮肤，包括厚壁菌门在内的所有门的水平保持基本稳定。
可以得出结论，化妆品成分稳定微生物群并维持皮肤微生物群的基本平衡。
表2：在d0和d14的大芬戈尔德菌的相对丰度比较
表2显示在14-天期限内用测试制剂和安慰剂(媒介物)的皮肤上大芬戈尔德菌的水平。
大芬戈尔德菌是一种人体皮肤的正常栖居者，且最常见的是从感染病灶中分离出的革兰氏阳性球菌。大芬戈尔德菌牵涉皮肤、骨骼、心脏和脑膜的单微生物和多微生物感染。文献报道了一例由大芬戈尔德菌引起的中毒性休克综合征。
研究结果表明，用测试制剂(“活性成分0.5％”)处理的皮肤在14天试验期间显示出大芬戈尔德菌的相对丰度显著降低(-58％)。另一方面，当用安慰剂制剂(“媒介物”)处理皮肤时，大芬戈尔德菌的水平保持稳定。这些发现启示所述化妆品成分抑制机会性病原体的生长。
实施例3：除臭剂组合物
为了评估本发明的化妆品成分对除臭效能的影响，对10名志愿者进行了双盲研究。所有志愿者都是止汗剂使用者。
志愿者不得不停止使用他们通常的止汗剂。相反，他们每天早上在他们的左腋下施用第一种测试除臭剂组合物，并且在他们的右腋下使用第二种测试除臭剂组合物。
在为期五天的测试期结束时，志愿者对每一侧的恶臭和香味进行了自我评估。
两种测试除臭剂组合物均以喷雾剂形式提供，并含有以下标准除臭剂基质：
将上述成分在没有抛射剂的情况下混合，并补充1.75wt％的香料组合物。对于两种测试除臭剂组合物中的一种，加入0.5wt％的本发明化妆品成分。将该混合物填充入喷雾容器中并装入抛射剂。
自我评估显示，10名志愿者中的9名发现含有本发明化妆品成分的测试除臭剂组合物提供了更好的恶臭减少和增加的香味强度。
因此，本发明的化妆品成分能够改善除臭剂组合物的持久性。