一种人脐带间充质干细胞注射液及其面部填充注射方法与流程

本发明涉及生物技术
技术领域：
，具体是涉及一种人脐带间充质干细胞注射液及其面部填充注射方法。
背景技术：
：脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。脐带间充质干细胞具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出mscs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓mscs，免疫原性比骨髓mscs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。同时研究脐带间充质干细胞形态学、生长特性、细胞周期、免疫表型等特性，旨在建立脐带间充质干细胞的富集方法，为建立脐带间充质干细胞库和临床应用提供有力的理论依据。现如今，传统的面部填充是从腹部或大腿抽吸多余脂肪，经过处理后再将其移植到需要的部位。但是少有研究将脐带间充质干细胞应用于面部填充注射的研究领域之中，经过我们的研究发现，脐带间充质干细胞在面部填充方面具有很多远优于脂肪的使用效果，且填充效果稳定，因此，现需要一种新型的采用人脐带间充质干细胞的面部填充注射液来推进面部填充领域的进一步发展。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明提供了一种人脐带间充质干细胞注射液及其面部填充注射方法。本发明的技术方案是:一种人脐带间充质干细胞注射液，所述人脐带间充质干细胞注射液按重量百分比计由：12～15％人脐带间充质干细胞、5～8％生物活性玻璃纳米粉体、10～12％人血白蛋白原液、3～6％玻尿酸、1～2％肝素钙、5～8％复方电解质、0.5～1％海藻糖、1.5％～2.5％葡聚糖、1～1.5％甘氨酸、1～1.5％尿囊素、2～4％柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、0.8～1.2％烟酰胺、0.5～1％ph调节剂、0.4～0.7％抗氧化剂、0.2～0.5％抗菌剂，余量为活化水。上述配比所制备的人脐带间充质干细胞注射液在面部填充方面具有优异的使用效果，可以提高填充结合度等，在上述注射液中，加入该比例的生物活性玻璃纳米粉体可以促进组织的结合，提高人脐带间充质干细胞的作用效果，加入该比例的人血白蛋白原液、肝素钙、复方电解质可以使人脐带间充质干细胞保存活性最强，进而提高注射液的使用效果，加入该比例的海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液可以提高人脐带间充质干细胞、生物活性玻璃纳米粉体等的稳定性并防止在可变环境中受到影响而降低使用效果。进一步地，所述人脐带间充质干细胞注射液的制备方法包括以下步骤：s1：按上述剂量选取生物活性玻璃纳米粉体、人血白蛋白原液、玻尿酸、肝素钙、复方电解质、海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、烟酰胺、ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂；s2：将玻尿酸、肝素钙、复方电解质、人血白蛋白原液混合得到混合液a，待用；将海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合得到混合液b，待用；s3：将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，按3.2×104cm2的密度接种到培养皿中培养，细胞培养到85～95％融合时，然后再加入体积比为6:3：0.2的质量分数为0.25％胰蛋白酶、质量分数为0.1％胶原酶、质量分数为0.05％1-三苯甲基甘露醇的混合酶液，消化25～40min，然后按照1：12分种比接种到新的培养皿中进行数次传代培养，取传代培养的p3-p8代人脐带间充质干细胞，得到人脐带间充质干细胞；通过组合的混合酶液进行处理，加入了1-三苯甲基甘露醇可以起到增强并稳定胰蛋白酶和胶原酶的效果，提高混合酶液的使用效果；s4：将人脐带间充质干细胞加入到混合液a中，待用；然后将混合液b升温至35～39℃后，依次加入烟酰胺、生物活性玻璃纳米粉体，搅拌均匀后加入占混合液b总体积30％的超顺磁性颗粒，并施加双极性脉冲电压处理5～8分钟，过滤回收超顺磁性颗粒后，得到混合液c；其中，所述双极性脉冲电压为产生的频率为5～130hz，磁感应强度0.5t～3t的振荡磁场；通过双极性脉冲电压作用，使超顺磁性颗粒进行运动，促进生物活性玻璃纳米粉体与混合液的混合度，同时加入烟酰胺可以提高生物活性玻璃纳米粉体的稳定性；s5：将ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂依次加入到混合液c中，并加入活化水定容至人脐带间充质干细胞的浓度为7.2×105-8.2×105，得到人脐带间充质干细胞注射液。进一步地，所述超顺磁性颗粒具体为汝铁硼磁铁颗粒，且外层包被有厚度为0.2mm陶瓷薄膜，超顺磁性颗粒的粒径为2mm。汝铁硼磁铁磁力效果强，通过陶瓷薄膜包被可有效避免汝铁硼磁铁与混合液接触。进一步地，所述生物活性玻璃纳米粉体的制备方法为：将十六烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚、去离子水按照摩尔比为(1～1.8)：(2～6)：(0.5～0.8)：(0.2～0.3)：800配成混合液，然后依次将四氯化硅、三乙基磷酸及柠檬酸钙加入到所述混合液中，磁力搅拌均匀得到混合初液；再将所述混合初液离心、沉淀、清洗后得到沉淀物，再将沉淀物通过热风去掉表面水后，再在真空度0.1～0.15mpa，65～75℃下微波干燥20～25min，随后阴干1～2天，得到粉状物；再将粉状物在720～890℃下热处理2～3h后制粉，得到所述生物活性玻璃纳米粉体；通过在混合液中加入上述比例的聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚，可以提高生物活性纳米粉体的活性以及制备均匀度，依次通过热风干表面、微波干燥、阴干的方法的进行干燥，可以使粉状物性能更加稳定，通过上述方法制备的生物活性玻璃纳米粉体可完美配合于人脐带间充质干细胞的作用，结合度高，提高注射液的使用效果。其中，所述十六烷基三甲基氯化铵质量浓度为2.7mmol/l；所述四氯化硅、三乙基磷酸、柠檬酸钙、混合液的摩尔比为(40～55)：(25～32)：(7～14)：1000。进一步地，所述复方电解质按重量份数计由10～15份氯化钠、9～12份氯化镁、15～18份葡萄糖酸钠、4～7份聚天冬氨酸钠、2～3份海藻酸钠、200～300份去离子水。采用上述配比的复方电解质能够补充微量元素，同时提高注射液的极性，保证注射液的稳定性。进一步地，所述活化水的制备方法为：将高压电极置入水中，并向水中导入工作气体直到放电结束，将高压电极通电，放电12～15min，再不断磁力搅拌并加入氯化钠至其质量浓度为0.9％，得到活化水；所述工作气体由氧气：二氧化碳气体：氩气按照质量比为16：3：1比例混合而成。通过上述方法制备活化水，所制备的活化水相对于传统去离子水等，配合人脐带间充质干细胞的应用效果更好，活性高，含氧量大，注射使用效果优。一种人脐带间充质干细胞注射液的面部填充注射方法，在进行面部填充注射前需要对人脐带间充质干细胞注射液使用预处理器进行预处理后才可使用注射器注射。进一步地，所述预处理器包括球壳、主杆和隔板，所述球壳内部中空，球壳的上顶面、下底面分别设有抽液口、注液口与其内部连通，所述主杆竖向设置在球壳内中心轴线处，且贯穿多个所述隔板，所述隔板等间距设置并与球壳内壁固定连接，隔板上均匀设有密集的通孔，每相邻的两个隔板之间的主杆上各设有一个磁套，所述磁套配设有磁环，所述磁环的左右两外侧各设有一个磁叶，所述磁叶中部设有通槽，所述通槽内横向设有螺旋叶。通过设置球壳可以便于拿捏，同时提高对注射液的预处理效果，通过设有多个隔板可以将其有效分成多层进行磁叶搅拌，同时结合螺旋叶进行辅助搅拌，可以在注射液使用前处理后，使注射液处于均一稳定的状态，提高面部注射填充的效果。更进一步地，所述球壳左右两侧外壁各设有一个防滑垫。设置有防滑垫可以便于拿捏，操作更加方便。本发明的预处理器使用方法为：将人脐带间充质干细胞注射液通过注液口注入预处理器内，用手拿捏球壳，进行摆臂快速晃动，晃动期间每相邻两个隔板之间的磁环随着磁套转动，进而磁叶进行转动，同时螺旋叶受到流液作用进行转动，晃动1-2min后，静置1min，将注射器插入抽液口将人脐带间充质干细胞注射液吸入进行面部填充注射。本发明的有益效果是:(1)本发明的人脐带间充质干细胞注射液利用人脐带间充质干细胞的优良效果，进行面部填充注射应用，应用前景好，使用效果优。(2)本发明在该配比所制备的人脐带间充质干细胞注射液在面部填充方面具有优异的使用效果，可以提高填充结合度等，通过生物活性玻璃纳米粉体可以促进组织的结合，提高人脐带间充质干细胞的作用效果。(3)本发明的面部填充注射方法通过预处理器处理，操作简单，使用方便，可以在注射液使用前处理后，使注射液处于均一稳定的状态，提高面部注射填充的效果。附图说明图1是预处理器整体结构示意图。图2是图1的a-a处截面图。其中，1-球壳、2-主杆、3-磁套、4-磁环、5-磁叶、51-通槽、52-螺旋叶、6-隔板、61-通孔、7-注液口、8-抽液口、9-防滑垫。具体实施方式实施例1一种人脐带间充质干细胞注射液，人脐带间充质干细胞注射液按重量百分比计由：12％人脐带间充质干细胞、5％生物活性玻璃纳米粉体、10％人血白蛋白原液、3％玻尿酸、1％肝素钙、5％复方电解质、0.5％海藻糖、1.5％葡聚糖、1％甘氨酸、1％尿囊素、2％柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、0.8％烟酰胺、0.5％ph调节剂、0.4％抗氧化剂、0.2％抗菌剂，余量为活化水。复方电解质按重量份数计由10份氯化钠、9份氯化镁、15份葡萄糖酸钠、4份聚天冬氨酸钠、2份海藻酸钠、200份去离子水。采用上述配比的复方电解质能够补充微量元素，同时提高注射液的极性，保证注射液的稳定性。上述配比所制备的人脐带间充质干细胞注射液在面部填充方面具有优异的使用效果，可以提高填充结合度等，在上述注射液中，加入该比例的生物活性玻璃纳米粉体可以促进组织的结合，提高人脐带间充质干细胞的作用效果，加入该比例的人血白蛋白原液、肝素钙、复方电解质可以使人脐带间充质干细胞保存活性最强，进而提高注射液的使用效果，加入该比例的海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液可以提高人脐带间充质干细胞、生物活性玻璃纳米粉体等的稳定性并防止在可变环境中受到影响而降低使用效果。人脐带间充质干细胞注射液的制备方法包括以下步骤：s1：按上述剂量选取生物活性玻璃纳米粉体、人血白蛋白原液、玻尿酸、肝素钙、复方电解质、海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、烟酰胺、ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂；s2：将玻尿酸、肝素钙、复方电解质、人血白蛋白原液混合得到混合液a，待用；将海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合得到混合液b，待用；s3：将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，按3.2×104cm2的密度接种到培养皿中培养，细胞培养到85％融合时，然后再加入体积比为6:3：0.2的质量分数为0.25％胰蛋白酶、质量分数为0.1％胶原酶、质量分数为0.05％1-三苯甲基甘露醇的混合酶液，消化25min，然后按照1：12分种比接种到新的培养皿中进行数次传代培养，取传代培养的p3代人脐带间充质干细胞，得到人脐带间充质干细胞；通过组合的混合酶液进行处理，加入了1-三苯甲基甘露醇可以起到增强并稳定胰蛋白酶和胶原酶的效果，提高混合酶液的使用效果；s4：将人脐带间充质干细胞加入到混合液a中，待用；然后将混合液b升温至35℃后，依次加入烟酰胺、生物活性玻璃纳米粉体，搅拌均匀后加入占混合液b总体积30％的超顺磁性颗粒，超顺磁性颗粒具体为汝铁硼磁铁颗粒，且外层包被有厚度为0.2mm陶瓷薄膜，超顺磁性颗粒的粒径为2mm。汝铁硼磁铁磁力效果强，通过陶瓷薄膜包被可有效避免汝铁硼磁铁与混合液接触。并施加双极性脉冲电压处理5分钟，过滤回收超顺磁性颗粒后，得到混合液c；其中，双极性脉冲电压为产生的频率为5hz，磁感应强度0.5t的振荡磁场；通过双极性脉冲电压作用，使超顺磁性颗粒进行运动，促进生物活性玻璃纳米粉体与混合液的混合度，同时加入烟酰胺可以提高生物活性玻璃纳米粉体的稳定性；s5：将ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂依次加入到混合液c中，并加入活化水定容至人脐带间充质干细胞的浓度为7.2×105，得到人脐带间充质干细胞注射液。生物活性玻璃纳米粉体的制备方法为：将十六烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚、去离子水按照摩尔比为1：2：0.5：0.2：800配成混合液，然后依次将四氯化硅、三乙基磷酸及柠檬酸钙加入到混合液中，磁力搅拌均匀得到混合初液；再将混合初液离心、沉淀、清洗后得到沉淀物，再将沉淀物通过热风去掉表面水后，再在真空度0.1mpa，65℃下微波干燥20min，随后阴干1天，得到粉状物；再将粉状物在720℃下热处理2h后制粉，得到生物活性玻璃纳米粉体；通过在混合液中加入上述比例的聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚，可以提高生物活性纳米粉体的活性以及制备均匀度，依次通过热风干表面、微波干燥、阴干的方法的进行干燥，可以使粉状物性能更加稳定，通过上述方法制备的生物活性玻璃纳米粉体可完美配合于人脐带间充质干细胞的作用，结合度高，提高注射液的使用效果。其中，十六烷基三甲基氯化铵质量浓度为2.7mmol/l；四氯化硅、三乙基磷酸、柠檬酸钙、混合液的摩尔比为40：25：7：1000。活化水的制备方法为：将高压电极置入水中，并向水中导入工作气体直到放电结束，将高压电极通电，放电12min，再不断磁力搅拌并加入氯化钠至其质量浓度为0.9％，得到活化水；工作气体由氧气：二氧化碳气体：氩气按照质量比为16：3：1比例混合而成。通过上述方法制备活化水，所制备的活化水相对于传统去离子水等，配合人脐带间充质干细胞的应用效果更好，活性高，含氧量大，注射使用效果优。上述人脐带间充质干细胞注射液的面部填充注射方法，在进行面部填充注射前需要对人脐带间充质干细胞注射液使用预处理器进行预处理后才可使用注射器注射。实施例2一种人脐带间充质干细胞注射液，人脐带间充质干细胞注射液按重量百分比计由：14％人脐带间充质干细胞、6％生物活性玻璃纳米粉体、11％人血白蛋白原液、5％玻尿酸、1.6％肝素钙、7％复方电解质、0.6％海藻糖、2.1％葡聚糖、1.2％甘氨酸、1.4％尿囊素、3％柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、1％烟酰胺、0.7％ph调节剂、0.6％抗氧化剂、0.4％抗菌剂，余量为活化水。复方电解质按重量份数计由13份氯化钠、10份氯化镁、16份葡萄糖酸钠、5份聚天冬氨酸钠、3份海藻酸钠、275份去离子水。采用上述配比的复方电解质能够补充微量元素，同时提高注射液的极性，保证注射液的稳定性。上述配比所制备的人脐带间充质干细胞注射液在面部填充方面具有优异的使用效果，可以提高填充结合度等，在上述注射液中，加入该比例的生物活性玻璃纳米粉体可以促进组织的结合，提高人脐带间充质干细胞的作用效果，加入该比例的人血白蛋白原液、肝素钙、复方电解质可以使人脐带间充质干细胞保存活性最强，进而提高注射液的使用效果，加入该比例的海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液可以提高人脐带间充质干细胞、生物活性玻璃纳米粉体等的稳定性并防止在可变环境中受到影响而降低使用效果。人脐带间充质干细胞注射液的制备方法包括以下步骤：s1：按上述剂量选取生物活性玻璃纳米粉体、人血白蛋白原液、玻尿酸、肝素钙、复方电解质、海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、烟酰胺、ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂；s2：将玻尿酸、肝素钙、复方电解质、人血白蛋白原液混合得到混合液a，待用；将海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合得到混合液b，待用；s3：将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，按3.2×104cm2的密度接种到培养皿中培养，细胞培养到90％融合时，然后再加入体积比为6:3：0.2的质量分数为0.25％胰蛋白酶、质量分数为0.1％胶原酶、质量分数为0.05％1-三苯甲基甘露醇的混合酶液，消化36min，然后按照1：12分种比接种到新的培养皿中进行数次传代培养，取传代培养的p7代人脐带间充质干细胞，得到人脐带间充质干细胞；通过组合的混合酶液进行处理，加入了1-三苯甲基甘露醇可以起到增强并稳定胰蛋白酶和胶原酶的效果，提高混合酶液的使用效果；s4：将人脐带间充质干细胞加入到混合液a中，待用；然后将混合液b升温至37℃后，依次加入烟酰胺、生物活性玻璃纳米粉体，搅拌均匀后加入占混合液b总体积30％的超顺磁性颗粒，超顺磁性颗粒具体为汝铁硼磁铁颗粒，且外层包被有厚度为0.2mm陶瓷薄膜，超顺磁性颗粒的粒径为2mm。汝铁硼磁铁磁力效果强，通过陶瓷薄膜包被可有效避免汝铁硼磁铁与混合液接触。并施加双极性脉冲电压处理6分钟，过滤回收超顺磁性颗粒后，得到混合液c；其中，双极性脉冲电压为产生的频率为110hz，磁感应强度2.5t的振荡磁场；通过双极性脉冲电压作用，使超顺磁性颗粒进行运动，促进生物活性玻璃纳米粉体与混合液的混合度，同时加入烟酰胺可以提高生物活性玻璃纳米粉体的稳定性；s5：将ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂依次加入到混合液c中，并加入活化水定容至人脐带间充质干细胞的浓度为7.8×105，得到人脐带间充质干细胞注射液。生物活性玻璃纳米粉体的制备方法为：将十六烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚、去离子水按照摩尔比为1.5：3：0.7：0.3：800配成混合液，然后依次将四氯化硅、三乙基磷酸及柠檬酸钙加入到混合液中，磁力搅拌均匀得到混合初液；再将混合初液离心、沉淀、清洗后得到沉淀物，再将沉淀物通过热风去掉表面水后，再在真空度0.12mpa，72℃下微波干燥23min，随后阴干2天，得到粉状物；再将粉状物在830℃下热处理2.5h后制粉，得到生物活性玻璃纳米粉体；通过在混合液中加入上述比例的聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚，可以提高生物活性纳米粉体的活性以及制备均匀度，依次通过热风干表面、微波干燥、阴干的方法的进行干燥，可以使粉状物性能更加稳定，通过上述方法制备的生物活性玻璃纳米粉体可完美配合于人脐带间充质干细胞的作用，结合度高，提高注射液的使用效果。其中，十六烷基三甲基氯化铵质量浓度为2.7mmol/l；四氯化硅、三乙基磷酸、柠檬酸钙、混合液的摩尔比为50：28：11：1000。活化水的制备方法为：将高压电极置入水中，并向水中导入工作气体直到放电结束，将高压电极通电，放电14min，再不断磁力搅拌并加入氯化钠至其质量浓度为0.9％，得到活化水；工作气体由氧气：二氧化碳气体：氩气按照质量比为16：3：1比例混合而成。通过上述方法制备活化水，所制备的活化水相对于传统去离子水等，配合人脐带间充质干细胞的应用效果更好，活性高，含氧量大，注射使用效果优。上述人脐带间充质干细胞注射液的面部填充注射方法，在进行面部填充注射前需要对人脐带间充质干细胞注射液使用预处理器进行预处理后才可使用注射器注射。实施例3一种人脐带间充质干细胞注射液，人脐带间充质干细胞注射液按重量百分比计由：15％人脐带间充质干细胞、8％生物活性玻璃纳米粉体、12％人血白蛋白原液、6％玻尿酸、2％肝素钙、8％复方电解质、1％海藻糖、2.5％葡聚糖、1.5％甘氨酸、1.5％尿囊素、4％柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、1.2％烟酰胺、1％ph调节剂、0.7％抗氧化剂、0.5％抗菌剂，余量为活化水。复方电解质按重量份数计由15份氯化钠、12份氯化镁、18份葡萄糖酸钠、7份聚天冬氨酸钠、3份海藻酸钠、300份去离子水。采用上述配比的复方电解质能够补充微量元素，同时提高注射液的极性，保证注射液的稳定性。上述配比所制备的人脐带间充质干细胞注射液在面部填充方面具有优异的使用效果，可以提高填充结合度等，在上述注射液中，加入该比例的生物活性玻璃纳米粉体可以促进组织的结合，提高人脐带间充质干细胞的作用效果，加入该比例的人血白蛋白原液、肝素钙、复方电解质可以使人脐带间充质干细胞保存活性最强，进而提高注射液的使用效果，加入该比例的海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液可以提高人脐带间充质干细胞、生物活性玻璃纳米粉体等的稳定性并防止在可变环境中受到影响而降低使用效果。人脐带间充质干细胞注射液的制备方法包括以下步骤：s1：按上述剂量选取生物活性玻璃纳米粉体、人血白蛋白原液、玻尿酸、肝素钙、复方电解质、海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、烟酰胺、ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂；s2：将玻尿酸、肝素钙、复方电解质、人血白蛋白原液混合得到混合液a，待用；将海藻糖、葡聚糖、甘氨酸、尿囊素、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合得到混合液b，待用；s3：将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，按3.2×104cm2的密度接种到培养皿中培养，细胞培养到95％融合时，然后再加入体积比为6:3：0.2的质量分数为0.25％胰蛋白酶、质量分数为0.1％胶原酶、质量分数为0.05％1-三苯甲基甘露醇的混合酶液，消化40min，然后按照1：12分种比接种到新的培养皿中进行数次传代培养，取传代培养的p8代人脐带间充质干细胞，得到人脐带间充质干细胞；通过组合的混合酶液进行处理，加入了1-三苯甲基甘露醇可以起到增强并稳定胰蛋白酶和胶原酶的效果，提高混合酶液的使用效果；s4：将人脐带间充质干细胞加入到混合液a中，待用；然后将混合液b升温至39℃后，依次加入烟酰胺、生物活性玻璃纳米粉体，搅拌均匀后加入占混合液b总体积30％的超顺磁性颗粒，超顺磁性颗粒具体为汝铁硼磁铁颗粒，且外层包被有厚度为0.2mm陶瓷薄膜，超顺磁性颗粒的粒径为2mm。汝铁硼磁铁磁力效果强，通过陶瓷薄膜包被可有效避免汝铁硼磁铁与混合液接触。并施加双极性脉冲电压处理8分钟，过滤回收超顺磁性颗粒后，得到混合液c；其中，双极性脉冲电压为产生的频率为130hz，磁感应强度3t的振荡磁场；通过双极性脉冲电压作用，使超顺磁性颗粒进行运动，促进生物活性玻璃纳米粉体与混合液的混合度，同时加入烟酰胺可以提高生物活性玻璃纳米粉体的稳定性；s5：将ph调节剂、抗氧化剂、抗菌剂依次加入到混合液c中，并加入活化水定容至人脐带间充质干细胞的浓度为8.2×105，得到人脐带间充质干细胞注射液。生物活性玻璃纳米粉体的制备方法为：将十六烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚、去离子水按照摩尔比为1.8：6：0.8：0.3：800配成混合液，然后依次将四氯化硅、三乙基磷酸及柠檬酸钙加入到混合液中，磁力搅拌均匀得到混合初液；再将混合初液离心、沉淀、清洗后得到沉淀物，再将沉淀物通过热风去掉表面水后，再在真空度0.15mpa，75℃下微波干燥25min，随后阴干2天，得到粉状物；再将粉状物在890℃下热处理3h后制粉，得到生物活性玻璃纳米粉体；通过在混合液中加入上述比例的聚氧乙烯-聚苯乙烯-聚氧乙烯三嵌段聚合物、纳米银、叔丁基对苯二酚，可以提高生物活性纳米粉体的活性以及制备均匀度，依次通过热风干表面、微波干燥、阴干的方法的进行干燥，可以使粉状物性能更加稳定，通过上述方法制备的生物活性玻璃纳米粉体可完美配合于人脐带间充质干细胞的作用，结合度高，提高注射液的使用效果。其中，十六烷基三甲基氯化铵质量浓度为2.7mmol/l；四氯化硅、三乙基磷酸、柠檬酸钙、混合液的摩尔比为55：32：14：1000。活化水的制备方法为：将高压电极置入水中，并向水中导入工作气体直到放电结束，将高压电极通电，放电15min，再不断磁力搅拌并加入氯化钠至其质量浓度为0.9％，得到活化水；工作气体由氧气：二氧化碳气体：氩气按照质量比为16：3：1比例混合而成。通过上述方法制备活化水，所制备的活化水相对于传统去离子水等，配合人脐带间充质干细胞的应用效果更好，活性高，含氧量大，注射使用效果优。上述人脐带间充质干细胞注射液的面部填充注射方法，在进行面部填充注射前需要对人脐带间充质干细胞注射液使用预处理器进行预处理后才可使用注射器注射。如图1和2所示，上述预处理器主要包括球壳1、主杆2和隔板6，球壳1左右两侧外壁各设有一个防滑垫9。设置有防滑垫9可以便于拿捏，操作更加方便。球壳1内部中空，球壳1的上顶面、下底面分别设有抽液口8、注液口7与其内部连通，主杆2竖向设置在球壳1内中心轴线处，且贯穿多个隔板6，隔板6等间距设置并与球壳1内壁固定连接，隔板6上均匀设有密集的通孔61，每相邻的两个隔板6之间的主杆3上各设有一个磁套3，磁套3配设有磁环4，磁环4的左右两外侧各设有一个磁叶5，磁叶5中部设有通槽51，通槽51内横向设有螺旋叶52。通过设置球壳1可以便于拿捏，同时提高对注射液的预处理效果，通过设有多个隔板6可以将其有效分成多层进行磁叶5搅拌，同时结合螺旋叶52进行辅助搅拌，可以在注射液使用前处理后，使注射液处于均一稳定的状态，提高面部注射填充的效果。上述预处理器使用方法为：将人脐带间充质干细胞注射液通过注液口7注入预处理器内，用手拿捏球壳1，进行摆臂快速晃动，晃动期间每相邻两个隔板6之间的磁环4随着磁套3转动，进而磁叶5进行转动，同时螺旋叶52受到流液作用进行转动，晃动1-2min后，静置1min，将注射器插入抽液口8将人脐带间充质干细胞注射液吸入进行面部填充注射。面部填充注射临床实验数据本发明人脐带间充质干细胞注射液的面部填充注射应用：在本市某医院选取待试志愿人员200人，男女各100人，且年龄均在25-45之间，并随机分成实验组1、实验组2、实验组3和对照组，其中实验组1、实验组2、实验组3分别对应本发明具体实施例1、实施例2、实施例3，对照组采用传统面部填充方法进行填充；显效：面部填充完美达到预期填充效果，经过1个月后待观察，效果稳定且不反弹；有效：面部填充完美基本达到预期填充效果，经过1个月后待观察，效果较稳定，反弹较轻微但不明显，肉眼难以察觉；无效：面部填充完美未达到预期填充效果，经过1个月后待观察效果，效果不稳定，反弹严重，肉眼可察觉，需要进行重新填充。具体疗效数据如下表所示：组别人数/人显效/人有效/人无效/人实验组1504190实验组25034151试验组35037130对照组5026213总结，从上表可以看出，实验组1、2、3的疗效均优于对照组，尤其是在显效人数上实验组明显高于对照组，同时由上述数据可知，三个实验组里，实验组1的效果最优，使用效果最为稳定。最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。当前第1页12