一种基于脂质膜和金属有机框架的核壳纳米颗粒的制备方法与流程

本发明涉及一种药物载体的制备方法和应用，具体涉及一种基于脂质体和金属有机框架的核壳纳米颗粒的制备方法，发明属于纳米药物载体领域。

背景技术：

纳米技术在人们生活、医疗和科技发展中的应用受到日益广泛的关注，特别的，新型纳米给药系统因其载药量高、靶向性好和毒副作用小，极具应用潜力。新型纳米给药系统是指借助纳米级载体、配体或抗体将药物选择性地浓集于靶组织、靶器官或细胞内部结构的给药系统；同时借助药物载体的承载作用，辅助以外界刺激实现将药物缓慢释放至患处。然而，具有生物相容性好、靶向性好、尺寸合理、可体内降解等优点的纳米载体少之又少，因此设计并研究新型响应型纳米载体是实现纳米给药系统高效、低毒治疗疾病的基础。

目前响应型的药物载体主要有：超声控释型（中国专利：一种基于普鲁兰多糖的用于超声控制释放的纳米药物载体、药物载体系统及制备方法，公开号：cn10849845a。）；光控释型（中国专利：一种近红外光触发释放化疗药物的纳米载体及其制备方法，公开号：cn106512000a。）；内环境影响型：1）ph控释型（中国专利：ph控释靶向药物纳米运输载体及其制备方法和应用，公开号：cn107952081a。）；2）氧化还原控释型（中国专利：一种刺激响应型聚吡咯纳米管靶向药物载体及其制备方法，公开号：cn105412936a。）。然而针对复杂的生理环境，单一响应型药物载体难以实现最佳的药物递送和治疗效果，因此急需制备多刺激响应型、良好生物相容性的新型药物载体。

综合考虑材料本身的生物毒性、降解能力以及载药性能，沸石咪唑骨架zif-8纳米颗粒可以作为合适的载药核心。在药物控释性能方面，zif-8在肿瘤微酸环境下具有较好的缓释药物的特点，并且具有尺寸小、比表面积大、生物相容性好、可体内降解等多项优点，常被用于靶向递送和缓释药物。然而药物载体载带化疗药物进入机体后，其释放可能会造成正常细胞和组织的损伤，因此需要采取一定方法将其封闭。考虑易被修饰材料的低毒性和外壳保护性，以天然大豆磷脂分子hspc和磷脂酰胆碱dmpc两者材料为主的脂质膜可作为纳米药物传递系统外壳。脂质膜具有很多的优点：生物相容性好、生物可降解、无免疫原性、毒性低等。因此，使用zif-8作为核心，同时结合脂质体膜作为壳体制备药物载体，不仅可以利用脂质膜可以进行靶向修饰，而且可以解决多孔结构药物泄露问题，具有较高的研究意义和应用价值。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明目的在于提供一种基于脂质膜和金属有机框架的核壳纳米颗粒的制备方法。

本发明目的通过下述方案实现：一种基于脂质膜和金属有机框架的核壳纳米颗粒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）zif-m纳米颗粒制备：

1）选用六水合硝酸锌和2-甲基咪唑为zif-8合成材料，将0.5-0.9g2-甲基咪唑溶解于0.9ml水溶液，随后在溶液中加入0-0.5ml化疗药物溶液（1.5-2mg），于在37℃条件下搅拌均匀；

2）在上述溶液中加入0.1ml六水合硝酸锌（10-15mg）溶液，随后混合液于37℃，300-800rpm/min搅拌速度下反应15-240min；3）反应结束后，以3500-6500rpm/min离心30min分离去除上清液，洗涤三次得到zif-m纳米颗粒（其中m代表药物，可被所采用药物英文首字母代替）；

（2）中zif-m@pvp/dmpc纳米颗粒制备：

1）选用聚乙烯吡咯烷酮pvp(k30)和磷脂酰胆碱dmpc作为zif-m内脂质修饰材料；

2）首先将150mgzif-m颗粒分散溶解于4ml水溶液，随后依次加入0.5mlpvp（20-30mg）溶液，0.5mldmpc（25-40mg）溶液，上述混合液在37℃与低压条件下，以300-800rpm/min的搅拌速度下反应1-2h；

3）反应结束后，以3500-6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次，产物分散在1ml去离子水中，得到最终产物zif-m@pvp/dmpc；

（3）zif-m@lip纳米颗粒制备：

1）选用天然大豆磷脂分子hspc和胆固醇作为zif-m@lip外脂质材料；首先将步骤（2）制备的zif-m@pvp/dmpc颗粒溶于圆底烧瓶，依次加入300μlhspc溶液（25-30mg/ml），100μl再加入胆固醇溶液（18-27mg/ml），0-150µlir780(2mg/ml)，0-50µl靶向多肽-dspe(18-20mg/ml)和550µl氯仿溶液，上诉混合液在低压旋转蒸发条件下反应1-3h；

2）反应结束后，先加入水溶液在温和超声条件下将吸附在烧瓶壁上的产物溶解，溶解物分别经过核孔膜为400nm、200nm的挤压处理5-10次，并经过3500-6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到最终产物zif-m@lip。

所述药物为抗肿瘤药物或者活性蛋白药物、生长因子、rna、肽类的一种或者多种，其中优选的药物为盐酸阿霉素(dox)。

所述的靶向多肽-dspe合成方法采用2013年10月8日发表在internationaljournalofnanomedicine第8卷第3855-3866页题为anovelapplicationofmaleimideforadvanceddrugdelivery:invitroandinvivoevaluationofmaleimide-modifiedph-sensitiveliposomes中第3857页中liposomepreparation所记载的方法。

优选的靶向多肽为abarelix，优选的靶向癌细胞为前列腺癌相关细胞。

本发明提供一种脂质体-金属有机框架复合的多功能核壳结构颗粒载药体系，包括颗粒及其负载物。所述的纳米颗粒以沸石咪唑骨架zif-8为核心，可加载多种药物小分子；以脂质膜为外壳包被材料，将多孔结构zif-8核心进行密封保护，避免化学药物的随机释放；同时外壳脂质膜可修饰性强，可将靶向多肽及光敏剂嵌入壳体，实现药物载体在化疗、光热和光动力疗法的协同作用。

一种多功能核壳结构zif-8@lipidfilm(zif-8@lip)纳米粒子载药体系，实现对不同药物小分子的递送，同时通过多肽修饰提高载体对肿瘤部位靶向性，达到提高药物利用度和可控释药的目的。

本发明的有益效果为：本发明制备了负载抗肿瘤相关药物的核壳结构纳米复合粒子zif-m@lip。该药物具有很好的生物相容性和稳定性，其中脂质体壳层可修饰靶向材料和光敏剂，实现药物载体在特定靶细胞或靶组装的聚集和热疗；zif-m内核颗粒的孔隙中可以载带药物分子，并作为刺激响应型药物递送平台，在特定光照和肿瘤微酸性环境下实现药物快速释放。该载药平台的制备简单、成本较低、制备的颗粒均一稳定，极具应用前景。

本发明的实例效果为：本发明以负载抗癌药物dox的zif-8纳米颗粒（zif-d，zif-dox，负载dox的zif-8纳米颗粒）作为内核，以嵌入靶向多肽abarelix和光敏剂ir780的脂质体作为外壳，制备核壳药物载体（zif-d@alip，zif-dox@abarelix-lipidfilm，外壳嵌入了靶向多肽abarelix和光敏剂ir780的药物载体颗粒），并以前列腺癌细胞及荷瘤小鼠测试该载体的靶向性和药效。实例效果显示，该载药体系具有很好的靶向性，可以响应ph和nir刺激进行药物可控释放，是集成像、化疗和热疗等一体化的纳米药物载体。

本发明的优点在于：

（1）本发明纳米颗粒的主要材料为zif-8和脂质体，其本身毒性低、生物相容性好，同时降解能力较好，克服了化学合成法中有毒残留的问题。

（2）本发明制备的纳米颗粒具有高结晶度、颗粒均一、物理化学性质稳定的优点。

（3）本发明中反应原料廉价易得，制备方法工艺简单，可操作性强，能进一步满足生产和应用需求。

（4）本发明纳米颗粒在脂质外壳嵌入ir780时，可以实现药物可控释放，即ph和近红外nir控制释放药物。

（5）本发明纳米脂质外壳可修饰性强，在嵌入靶向多肽条件下，可以实现精准靶向目标肿瘤部位，本发明以前列腺癌为实例模型进行测试。

附图说明

附图1为实施例1所制备zif-d@alip的透射电镜成像图；

附图2为实施例1所制备zif-d@alip的p元素映射图像；

附图3为实施例1所制备的zif-8和zif-d@alip的尺寸分布图；

附图4为实施例1所制备的zif-8、zif-d、zif-d@lip和zif-d@alip的zeta电位图；

附图5为实施例1所制备的zif-d和zif-d@alip的紫外光谱；

附图6为实施例1所制备的zif-8、ir780、abarelix-dspe和zif-d@alip红外光谱；

附图7为实施例1所制备的zif-d@alip响应激光照射后温度变化图谱；

附图8为实施例1所制备的zif-d@alip响应激光照射后热成像图；

附图9为实施例1所制备的zif-d@alip响应ph和nir双重刺激的释药曲线；

附图10为实施例1所制备的dox、ir780、zif-8、zif-d、zif-d@lip和zif-d@alip的细胞毒性图；

附图11为实施例1所制备的不同浓度zif-d@alip的细胞毒性图；

附图12为实施例1所制备的zif-d@alip（有靶向多肽修饰）纳米颗粒被前列腺正常细胞rwpe-2细胞吞噬的共聚焦成像图；

附图13为实施例1所制备的zif-d@alip（有靶向多肽修饰）纳米颗粒被前列腺癌细胞pc-3细胞吞噬的共聚焦成像图；

附图14为实施例1所制备的zif-d@lip（无靶向多肽修饰）被前列腺癌细胞pc-3细胞吞噬的共聚焦成像图；

附图15为实施例1所制备的zif-d@alip（有靶向多肽修饰）纳米颗粒处理荷瘤小鼠后的肿瘤组织体积成像图。

具体实施方式

以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下的实施例是对本发明的进一步说明，而不限制本发明的范围。

本发明所用的试剂除非特别指明，以下实施例所有的试验方法均为本领域中所用的常规方法。

除非特别说明，以下实施例中所使用的试剂均为分析纯级试剂，且可以从正规渠道购买获得。

实施例1

一种核壳式药物载体，其中zif-8载带盐酸阿霉素dox/抗肿瘤活性药物为核心载药模型，表面修饰嵌入abarelix多肽和ir780脂质体外壳，本发明采用前列腺癌细胞测试zif-8靶向性和肿瘤细胞杀伤效果，按如下步骤制备：

（1）zif-d纳米颗粒制备：

1）选用六水合硝酸锌和2-甲基咪唑为zif-8的合成材料，将0.786g的2-mim溶解于0.9ml水中得到水溶液，随后在溶液中加入0.5ml含1.6mgdox的水溶液，于在37℃条件下混合并搅拌2分钟搅拌均匀；

2）在上述溶液中加入0.1ml含12.6mg的zn（no3）2·6h2o水溶液，随后混合液于37℃，300-800rpm/min搅拌速度下反应15分钟；

3）反应结束后，以6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到载药dox的沸石咪唑骨架材料zif-d纳米颗粒；

（2）zif-d@abarelix-lipidfilm（zif-d@alip）核壳纳米结构的合成：

1）选用聚乙烯吡咯烷酮pvp(k30)和磷脂酰胆碱dmpc作为zif-d内脂质修饰材料；

2）首先将150mgzif-d颗粒分散溶解于4ml水溶液，随后在连续搅拌下快速依次加入0.5ml含26mgpvp的溶液，0.5ml含32mgdmpc的溶液，在搅拌下反应1h；

3）反应结束后，离心去除上清液，洗涤三次，产物分散在1ml去离子水中，得到最终产物zif-d/dmpc；

（3）zif-d@alip纳米颗粒制备：

1）选用天然大豆磷脂分子hspc和胆固醇作为zif-d@alip外脂质材料；首先将步骤（2）制备的zif-d@dmpc颗粒分散液置于圆底烧瓶中，同时加入将300μl浓度28mg/mlhspc的溶液、100μl浓度20mg/ml胆固醇溶液、150µl浓度2mg/mlir780和50µl浓度15mg/ml靶向多肽-dspe溶解于550µl氯仿的混合液，上述二种混合液在低压旋转蒸发条件下反应1h，并除去有机溶剂，再低温真空干燥获得最终产物；

2）反应结束后，将产物分散在水溶液中，进行快速超声，将吸附在烧瓶壁上的产物溶解，溶解物分别经过规格为400nm、200nm的多孔膜挤压处理10次，并经过6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到最终产物zif-d@alip。

本实施例制备的zif-d@alip纳米颗粒，通过电子显微镜和红外进行基本表征，如附图1所示，可以看出zif-d@alip呈现近似圆球的形状，有比较明显的核壳结构，粒径大约在170nm左右。而zif-8内核呈现非圆球状，粒径大约在80nm左右。附图2中的元素分析显示，zif-d@alip中有p元素，且与zn元素的比例在预期范围。附图3为zif-d@alip的动态光散射图，测得其水合半径为180nm左右，与附图1结果接近。附图4测定zif-8、zif-d、zif-d@lip和zif-d@alip的zeta电位分别为+13.6mv,+14.9mv,-15.1mvand-15.7mv。附图5中zif-d@alip的uv光谱在480和780nm处显示了dox和ir780的特征吸收峰。附图6的红外数据显示zif-8粒子在2330cm^-1处出现明显的峰，这是由于c=o与zn²⁺离子形成配位键所致。与纯ir780相比，脂质膜包裹引起了嵌入在zif-d@alip中的ir780的特征峰2950cm^-1出现拉伸。特别是zif-d@alip纳米粒子在1685cm^-1处出现了一个abarelix多肽峰。

测试zif-d@alip纳米颗粒的光热效应：

将不同浓度的zif-d@alip核壳纳米结构分散在pbs溶液中，浓度范围为0mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml至0.2mg/ml。将不同的样品用808nmnir激光（1wcm^-2）照射8分钟，并通过温度计每20s记录这些溶液的温度。如附图7和附图8所示，在近红外辐射下，zif-d@alip(0.2mg/ml)溶液的温度在6min内从24.8℃迅速升高到60.8℃。相比较，在相同条件下pbs溶液的温度改变仅为6.9℃，表明zif-d@alip的脂质膜上成功负载ir780，具有显著的光热效应。

测试zif-d@alip颗粒的ph的响应性：

将相同量的纳米粒子添加到每个样品管中，并将溶液的ph分别调节至对应的ph7.4、6.5或5.5。我们将其分为六组：nir照射+ph5.5、无nir照射+ph5.5、nir照射+ph6.5、无nir照射、ph6.5组、nir照射+ph7.4和无nir照射+ph7.4。每组包含三个平行样品，nir激光的功率调整为1.0w。将试管在黑暗条件下于室温振荡器下孵育。在相同的时间间隔后，通过离心收集溶液，并通过uv光谱法对释放的dox的量进行定量。如附图9所示，zif-d@alip明显显示出ph和nir刺激反应性阿霉素的释放行为。具体来说，在酸性微环境（ph6.8和ph5.5）显然比ph7.4组药物释放快，并且在4小时内释放了超过50％的dox。相比之下，在ph7.4溶液中只有25％的药物。显然，ph酸性条件引发的zn-o和zn-n配位键断裂是造成不同释放效果的原因。

测试zif-d@alip纳米颗粒的生物相容性：

使用cck-8分析评估了其细胞活力。将细胞以2000个细胞/孔的密度接种在96孔微孔板中。孵育24小时后，将各种浓度（50、100、150、200、250和300µg/ml）的zif-d@alipnps加入每个孔中。同时，以相同的方式对pbs，free+dox，zif-8，zif-d，zif-d@lip和zif-d@alip。温育8小时后，在有或没有808nm的nir照射下处理细胞。然后，将cck-8溶液加入细胞中，并进一步孵育0.5小时。通过imark/xmark酶标准仪器在450nm处测量每个孔的吸光度。

如附图10和11所示，pbs(pbs+nir)，freedox(freedox+nir)，zif-8(zif-8+nir)，zif-d(zif-d+nir)，zif-d@lip(zif-d@lip+nir)andzif-d@alip(zif-d@alip+nir)的细胞活性分别为95.4%(93.9%)，67.5%(63.8%)，87.0%(67.1%)，94.9%(91.7%)，60.4%(59.6%)，74.1%(50.7%)及59.6%(20.8%)。其中zif-d@alip+nir（300µgml^-1）对前列腺癌pc3细胞的优异的肿瘤细胞杀伤率为79.2％，表明光热疗法和化学疗法的协同作用的治疗效果。

测试前列腺相关细胞对zif-d@alip颗粒的吞噬效果：

为了研究靶向吞噬作用的效果，将前列腺癌细胞pc-3细胞和前列腺正常细胞rwpe-2细胞接种在35毫米培养皿中生长12小时。然后，将细胞与含有120μg/mldox标记的zif-d@lipnp（无靶向修饰）和120μg/mldox标记的zif-d@alipnp（靶向修饰）的培养液在37℃孵育8小时。接下来，将细胞用冷pbs溶液洗涤3次，并用hoechst33258染色10分钟。通过在共聚焦显微镜成像来分析细胞吞噬作用。附图12显示，靶向修饰的zif-d@alip并不能被前列腺正常细胞rwpe-2细胞吞噬。同时附图13显示，在pc3细胞核周围观察到明显的药物载体的荧光，表明zif-d@alipnps可以被癌细胞有效地吞噬。与之相较，附图14中未修饰的zif-d@lip纳米颗粒表现出较差的细胞摄取能力。这些结果表明，zif-d@alip可以用作高性能纳米载体，具有高效的靶向性能，并且可改善细胞摄取效果，具有治疗前列腺癌的潜力。

本实施例验证了zif-d@alip的杀伤肿瘤组织的效果：将1×10⁶pc3细胞注入5周龄雄性小鼠后腿右后侧皮下，制备荷瘤小鼠。待肿瘤体积长至约100mm²时，荷瘤小鼠随机分为四组：pbs、zif-d、zif-d@lip和zif-d@alip,每组3只。小鼠尾静脉注射pbs（150μl）、zif-d（dox浓度为1mg/ml150μl）、zif-d@lip（等效dox浓度为zif-d，150μl）和zif-d@alip（等效dox浓度为zif-d，150μl）注射后第1天和第9天分别进行激光照射。每天测量肿瘤大小和小鼠体重。接种后18天处死所有小鼠，然后切除肿瘤并称重。附图15显示，经zif-d@alip处理的肿瘤组织体积最小，肿瘤抑制率可达90%。

以上是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应该为本发明的保护范围。

实施例2

一种以盐酸阿霉素dox/抗肿瘤活性药物为核心载药模型，同时以abarelix多肽和ir780嵌入脂质壳体为模型的zif-d@alip载药体系，来测试zif-8载药性和脂质壳体的易修饰性，按下述步骤制备：

一种基于脂质膜和金属有机框架的核壳纳米颗粒的制备方法，按以下步骤：

（1）zif-8@dox（zif-d）纳米颗粒制备：

1）选用六水合硝酸锌和2-甲基咪唑为zif-8的合成材料，将0.786g2-甲基咪唑溶解于0.9ml水溶液，随后在溶液中加入0.5ml含1.8mgdox的水溶液，于在37℃条件下混合并搅拌2分钟；然后，

2）在上述溶液中缓慢加入0.1ml含12.6mg六水合硝酸锌的水溶液，随后混合液于37℃，300-800rpm/min搅拌速度下反应30min；

3）反应结束后，以6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到载药m的沸石咪唑骨架材料zif-d纳米颗粒；

（2）zif-d@pvp/dmpc纳米颗粒制备：

1）选用聚乙烯吡咯烷酮pvp(k30)和磷脂酰胆碱dmpc作为zif-m内脂质修饰材料；

2）首先将150mgzif-d颗粒分散溶解于4ml水溶液，随后在连续搅拌下快速依次加入0.5ml含26mgpvp的溶液和0.5ml含32mgdmpc的溶液，上述混合液搅拌反应1h；

3）反应结束后，离心分离去除上清液，收集产物zif-d/dmpc，洗涤三次，产物分散在1ml去离子水中，得到最终产物分散液；

（3）zif-d@alip纳米颗粒制备：

1）选用天然大豆磷脂分子hspc和胆固醇作为zif-m@lip外脂质材料；首先将步骤（2）制备的zif-m@pvp/dmpc颗粒分散液置于圆底烧瓶，加入将300μl浓度28mg/mlhspc的溶液、100μl浓度20mg/ml胆固醇溶液、150µl浓度2mg/mlir780和50µl浓度15mg/ml靶向多肽-dspe溶解于550µl氯仿的混合液，上述二种混合液在低压旋转蒸发条件下反应1h，并除去有机溶剂，再低温真空干燥获得最终产物；

2）反应结束后，将产物分散在水溶液中，进行快速超声处理溶解，然后，溶解物分别经过400nm、200nm的核孔膜挤压处理10次，并经过3500-6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到最终产物zif-d@alip。

实施例3

一种以盐酸阿霉素dox/抗肿瘤活性药物为核心载药模型，同时以abarelix多肽和ir780嵌入脂质壳体为模型的zif-d@alip载药体系，来测试zif-8载药性和脂质壳体的易修饰性，按以下步骤制备：

（1）zif-8@dox（zif-d）的合成：

1）选用六水合硝酸锌和2-甲基咪唑为zif-8的合成材料，将0.8g2-甲基咪唑溶解于0.9ml水溶液，随后在溶液中加入0.5ml含1.6mgdox水溶液，于在37℃条件下混合并搅拌2分钟；然后，

2）在上述溶液中缓慢加入0.1ml含12.6mg六水合硝酸锌的水溶液，随后混合液于37℃，300-800rpm/min搅拌速度下反应60min；

3）反应结束后，以6500rpm/min离心20min分离去除上清液，回收zif-8@dox（zif-d）纳米颗粒，洗涤三次；

（2）zif-m@pvp/dmpc纳米颗粒制备：

1）选用聚乙烯吡咯烷酮pvp(k30)和磷脂酰胆碱dmpc作为zif-d内脂质修饰材料；

2）首先将150mgzif-d颗粒重新分散溶解于4ml水溶液中，随后连续搅拌下快速依次加入0.5ml含26mgpvp的溶液和0.5ml含32mgdmpc的溶液，上述混合液在搅拌下反应1h；

3）反应结束后，离心收集产物zif-d/dmpc，洗涤三次，产物分散在1ml去离子水中，得到最终产物zif-d@dmpc分散液；

（3）zif-d@abarelix-lipidfilm（zif-d@alip）核壳纳米结构的合成：

1）选用天然大豆磷脂分子hspc和胆固醇作为zif-d@alip外脂质材料；首先将步骤（2）制备的zif-d@pvp/dmpc分散液置于圆底烧瓶，同时将300μl浓度28mg/mlhspc的溶液、100μl浓度20mg/ml胆固醇溶液、150µl浓度2mg/mlir780和50µl浓度15mg/ml靶向多肽-dspe脂质膜的微乳液溶解于550µl氯仿溶液中的混合液，上述分散液和混合液在低压旋转蒸发条件下反应1h，并除去有机溶剂，再低温真空干燥获得最终产物；

2）反应结束后，将产物分散在水溶液中，进行快速超声，将吸附在烧瓶壁上的产物溶解，溶解物分别经过400nm、200nm的核孔膜挤压处理10次，并经过3500-6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到最终产物zif-d@alip。

实施例4

一种以盐酸阿霉素dox/抗肿瘤活性药物为核心载药模型，同时以abarelix多肽和ir780嵌入脂质壳体为模型的zif-d@alip载药体系，来测试zif-8载药性和脂质壳体的易修饰性，按以下步骤制备：

（1）zif-m纳米颗粒制备：

1）选用六水合硝酸锌和2-甲基咪唑为zif-8的合成材料，将0.8g2-甲基咪唑溶解于0.9ml水溶液，随后在溶液中加入0.5ml含1.8mgdox水溶液，混合并搅拌2分钟；然后，

2）在上述溶液中缓慢加入0.1ml含12.6mg六水合硝酸锌的水溶液，随后混合液于37℃，300-800rpm/min搅拌速度下反应120min；

3）反应结束后，以6500rpm/min离心20min分离去除上清液，回收zif-8@dox（zif-d）纳米颗粒，洗涤三次；

（2）zif-d@dmpc纳米颗粒制备：

1）选用聚乙烯吡咯烷酮pvp(k30)和磷脂酰胆碱dmpc作为zif-m内脂质修饰材料；

2）首先将150mgzif-d颗粒重新分散溶解于4ml水中，然后在连续搅拌下快速加入0.5ml含26mgpvp的溶液，0.5ml含32mgdmpc的溶液，反应1h；

3）反应结束后，离心去除上清液，收集产物zif-d/dmpc，洗涤三次，产物分散在1ml去离子水中，得到最终产物zif-d@dmpc分散液；

（3）zif-d@abarelix-lipidfilm（zif-d@alip）核壳纳米结构的合成：

1）选用天然大豆磷脂分子hspc和胆固醇作为zif-d@alip外脂质材料；首先将步骤（2）制备的zif-d@pvp/dmpc分散液置于圆底烧瓶，同时将300μl浓度28mg/mlhspc的溶液、100μl浓度20mg/ml胆固醇溶液、150µl浓度2mg/mlir780和50µl浓度15mg/mlabarelix-dspe脂质膜的微乳液溶解于550µl氯仿溶液中的混合液，上述分散液和混合液在低压旋转蒸发条件下反应1h，并除去有机溶剂，再低温真空干燥获得最终产物；

2）反应结束后，将产物分散在水溶液中，进行快速超声，将吸附在烧瓶壁上的产物溶解，溶解物分别经过400nm、200nm的核孔膜挤压处理10次，并经过3500-6500rpm/min离心20min分离去除上清液，洗涤三次得到最终产物zif-d@alip。