专利名称：一株有益菌株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属生物工程技术领域，特别是涉及一种利用微生物发酵技术培养的华星一号(BF893)菌株及其应用。
近年来，欧美先进国家从事病源微生物的学者，不少人转向对有益的正常微生物的研究，采用生物工程技术来解决农业、畜牧业、人体保健、防治疾病(包括攻克癌症顽固堡垒)和延长寿命等方面存在的问题。经国际联机检索，有涉及双歧杆菌的抗肿瘤作用文献(J55092322，1978)，但未见有关华星一号(BF839)这类菌株分离、培养和应用的报道。
人体的微生态系和免疫、代谢、营养有关，随着年令的增加该系统逐渐残衰和老化，故60岁以上的人易衰弱和易患癌症，小于60岁健状的人则否。本发明的目的旨在从低龄人或动物体内微生态系统正常生理性细菌中分离出某些起重要作用的有益菌种，移植到高龄人或动物体内，使其恢复和建立生物量更高的新微生态系统，提高定植耐性因子水平，达到恢复或部分恢复低龄时期所具有的营养、代谢和免疫等状态。
本发明是通过下述步骤实施的从发育良好的婴儿或低龄动物肠道菌群中筛选、分离出多功能华星一号(BF839)菌株，利用微生物发酵技术制成活菌制剂，用于医治多种疾病、制备保健食品、饮料、饮料添加剂和化妆品等。
华星一号(BF839)系人体正常的生理性厌氧细菌之一，经中国科学微生物研究所和中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所鉴定，均暂定为脆弱拟杆菌族(BacteroidesFragilis)中的一个种。因国内设备和条件所限，尚未对华星一号(BF839)的超微结构及其某些特征作出园满的结论。
经过近10年的研究表明，该菌有以下功能(1)提高人体免疫力，增加免疫T细胞活性;(2)有助于人体吸收消化食物;(3)降解肠内某些毒性物质;(4)排除外来细菌在肠道定居，调整肠内菌群分布;(5)在肠腔内合成多种维生素和蛋白质;(6)抑制癌细胞生长等。
通过数百例临床验证华星一号(BF839)制剂能增加儿童生长发育，对防治急慢性肠炎、菌群失调、上呼吸道感染和神经官能症等均有很好的疗效，特别对小儿腹泻、营养不良疗效尤为显著。用作饲料添加剂可增加畜、动物体重、产蛋量及增强抗病力，还可用于制备化妆品、保健食品和饮料等。
华星一号(BF839)是从发育良好的婴儿肠道菌群中分得，置自配的厌氧发酵培养基中发酵制成活菌制剂。厌氧发酵培养基成份蛋白胨0.5～25%，葡萄糖0.2～0.5%，半胱氨酸0.01～0.5%，Nac10.2～0.5%，Na2HPO40.1～0.3%硫乙醇酸钠0.02～0.1%，牛肝或猪肝浸液30～100%牛肉浸液30～100%，酵母膏0.1～0.8%。32～40℃恒温发酵培养12～72小时，3500转/分离心去上清液，测菌应用。
实例一将华星一号(BF839)接种于10立升厌氧发酵培养基中，37℃培养24小时。测得每毫升活菌数为2084×106＝108.2(按log10n/ml计算)。3000～4000转/分离心去上清液，洗涤，稀释备用。
实例二将华星一号(BF839)接种于3立升厌氧发酵培养基中37℃培养30小时，测得每毫升活菌数为1132×107＝109.1(按log10n计算)。3000～4000转/分离心去上清液，洗涤，稀释备用。
实例三将华星一号(BF839)接种于10立升厌氧发酵培养基中，37℃培养24小时，测得每毫升活菌数为588×108＝109.8(按log10n计算)。3000～4000转/分离心去上清液，洗涤，稀释备用。
实例四给幼儿园3～6岁全托儿童隔日早餐后10分钟服一次BF839活菌液10ml(活菌数40亿/ml)，共观察11.5个月，结果表明服用Bf839活菌液显著地增加了儿童的身高和体重(表1、2)。
表1、幼儿服用BF839后体重变化结果持续服用时间(月) n1(试验组) n2(对照组) T值 P值2 64 54 2.50 ＜0.055 53 46 2.97 ＜0.017.5 59 56 3.58 ＜0.01
儿腹泻、阿米巴痢疾、抑郁型精神病、细菌性痢疾、便秘等236名患者每天早、晚饭后各服一次BF839活菌液，每次20ml(活菌数40亿/ml)，有效率达98.3%(表4)。
表4、服用BF839对肠道疾病的疗效例数 各人服用瓶数(100nl/瓶) 康复 好转 无效慢性肠炎 81 1～10 746 1急性肠炎 17 1～3 17 2肠功能紊乱 22 1～6 164一般性消化不良 32 1～4 302肝性消化不良 8 4～10 53老年性消化不良 6 3～10 6婴儿腹泻 58 1～3 58阿米巴痢疾 1 4 1抑郁型精神病 33细菌性痢疾 4 4便秘 4 4总数 236 21418 4百分率 100% 90.7% 7.6% 1.7%
表2、幼儿服用BF839后身长变化结果持续服用时间(月) n1(试验组) n2(对照组) T值 P值6 53 46 1.78 ＞0.0511.5 44 46 2.90 ＜0.01实例五给幼儿园3～6岁全托儿童隔日早餐后10分钟服一次BF839活菌液10ml(活菌数40亿/ml)，11个月后采血用酯酶染色法测定T细胞，结果表明服用BF839活菌液显著增加了儿童的免疫功能(表3)。
表3、T细胞测定结果n1(试验组)2(对照组) T值 P值分组试验 45 38 4.18 ＜0.01配对试验 30 30 3.25 ＜0.01实例六给按常规标准确诊的急性肠炎、久治不愈的慢性肠炎(部分经肠镜检查确诊)、肠功能紊乱、一般，肝性和老年性消估不良、婴实例七给幼儿园3～6岁全托儿童隔日早餐后10分钟服一次BF839活菌液10ml(活菌数20亿/ml)，共观察11.5个月，结果表明BF839活菌液有预防儿呼吸道疾病的作用(表5)。
表5、服BF839对儿童上呼吸道感的预防作用持续服用时间(月) n1(试验组) n2(对照组) T值 P值11.5 63 55 3.12 ＜0.01实例八将养鸡场同种同日令的产蛋鸡120只，在本同生活条件下，用同种饲料喂养，随机抽样，分成试验组和对照组各60只。试验组每日按每只鸡服菌数20亿的量将BF839活菌液拌入饲料中一次喂食吃尽，试验期31天和停药后继续观察21天，在总共52天中试验组60只产蛋鸡比对照组60只产蛋鸡增加产蛋17.43Kg(表6)。
表6、BF839增加鸡的产蛋量产蛋总数(只) 平均产蛋数(只)/天 产蛋总重(Kg) 平均产蛋重量(Kg)/天试验组 2379 45.75 143.09 2.7对照组 2124 40.85 125.56 2.4权利要求
1.一种华星一号菌株(BF839)，其特征是该菌是从发育良好的婴儿或低龄动物肠道菌群中筛选、分离出具多功能提高人体免疫力，增加免疫T细胞活性，有助于人体吸收消化食物，降解肠内某些毒性物质，排除外来细菌在肠道定居，调整肠菌群分布，在肠腔内合成多种维生素和蛋白质，抑制癌细胞生长等。将该菌接种于自配的厌氧发酵培养基中发酵培养制成活菌制剂能增加儿童生长发育，对防治急慢性肠炎菌群失调、上呼吸道感染和神经官能症等均有很好的疗效，特别对小儿腹泻、营养不良疗效尤为显著。用作饲料添加剂可增加畜禽、动物体重、产蛋量及增强抗病力，还可用于制备化妆品、保健食品和饮料等。
2.按权利要求1所述的那种华星一号菌株(BF839)，其特征是接种于自配的厌氧发酵培养基由下述成分组成蛋白胨0.5～25%，葡萄糖0.2～0.5%，半胱氨酸0.01～0.5%，Nacl0.2～0.5%，NaHP-O40.1～0.3%，硫乙醇酸钠0.02～0.1%，牛肝或猪肝浸液30～100%，牛肉浸液30～100%，酵母膏0.1～0.8%。
3.按权利要求1所述的那种华星一号菌株(BF839)，其特征是该菌接种于自配的厌氧发酵，培养基发酵培养12～72小时，恒温温度为32～40℃。
全文摘要
从发育良好的婴儿或低龄动物肠道菌群中筛选分离出的一种多功能华星一号(BF839)菌株，利用发酵技术制成活菌制制剂，能增加儿童生长发育，对防治急慢性肠炎、菌群失调、上呼吸道感染和神经官能症等均有很好的疗效，特别对小儿腹泻、营养不良疗效尤为显著。用作饲料添加剂可增加畜禽、动物体重、产蛋量及增强抗病力，还可用于制备化妆品、保健食品和饮料等。
文档编号A61K39/02GK1056314SQ9010284
公开日1991年11月20日 申请日期1990年5月3日 优先权日1990年5月3日
发明者张李阶 申请人:张李阶