专利名称：增强免疫应答的方法
技术领域：
本发明涉及一种增强合成的弱免疫原抗原的免疫原性的方法。所谓合成的弱免疫原抗原是指下列具有肽或蛋白质结构的化合物，这些化合物或者化学地或者借助重组DNA技术来制造，这些化合物以水溶液或作为铝吸附物在不经胃肠给药之后，仅产生不足道的免疫应答，该免疫应答具有极低的抗体效价和不足的或者低的T细胞增生。下面，为了简便起见，将这组抗原称为合成抗原。当这里所描述的合成抗原以水溶液形式给药时，按照定义，对该合成抗原的免疫应答因此可以忽略。作为实验的参考配制品，使用弗洛伊德氏不全佐药(IFA)。IFA是一种油包水(W/O)配制剂，它以已知的方式不仅刺激体液的而且刺激细胞的免疫应答。可是，由于不希望的强副作用，IFA只允许用于试验目的。疫苗这一概念被理解为下述制剂，这种制剂含有附加用作抗原的物质，该物质本身执行纯助剂功能或免疫增强功能或者这两种功能的充分结合。纯助剂例如是为了不经胃肠给药用于溶解抗原的水，抗菌的、等渗的和pH稳定的助剂。免疫增强物质也经常称为佐药，其中涉及例如非溶性铝盐(磷酸铝、氢氧化铝)、某种脂多糖、胞壁酰肽、海藻糖化合物、各种细胞分裂素如白细胞间素1、亲油的嵌段共聚物(聚羟亚烃)。但是，佐药性能也具有实验的参考配制品，即不完全弗洛伊德氏佐剂，并且按其形成本身还具有各种的疫苗给药形式，如脂质体、乳剂、微胶囊。这些给药形式不仅在体内引起形成抗原贮存，而且也具有免疫刺激性能。
研制新疫苗和改进现有疫苗制剂，在近年来已变得越来越重要和急迫(E.Eppstein et al.，New adjuvants for Vaccinescontaining purified protein antigens，Advances in DrugDelivery Review 4，233-253(1990))。制造合成抗原也像开发合适的佐药制剂和给药形式一样，能够提高弱免疫原化合物的免疫原性，正引起普遍重视。一方面，开发新抗原是以某些疾病作为目标，对这些疾病例如像AIDS、疟疾、结核病、霍乱、甲型肝炎、癌症，还没有有效的疫苗或者只有一些效果不能令人满意的疫苗；另一方面，人们致力于用容易生产和纯化并改进特性的低分子肽和蛋白质代替传统的疫苗中所包含的抗原，如灭活的病毒、细菌或类毒素，这些肽和蛋白质在其结构中具有原来的传染病病原体的抗原区。这样的抗原肽和蛋白质可以采用生物化学方法或通过重组DNA技术，以高纯度来获得。这些新一代的合成抗原在其化学结构中具有刺激抗原特异的TH(辅助物)、TC(细胞毒素的)和B淋巴细胞的肽序列(抗原决定簇)。此时这种所谓的TH-、TC-和B-细胞抗原决定簇可以各自单独存在，或者共价地连接到一种化学的(chimeren)B-T抗原决定簇上。因为这些用基因技术或化学方法制造的抗原一般具有大约500-2000的低分子量，所以其免疫原性与具有50000-150000分子量的类毒素相反，或者与特殊抗体如灭活病毒和其他微生物相反，是很弱的。
迄今用于增强合成抗原的免疫原性的已知对策是基于，第一步通过共价结合增加这种抗原的分子量，第二步将这种较高分子量的构建体引入免疫增强的制剂中。
已经知道，将合成抗原共价地结合到高分子载体蛋白质例如白喉类毒素、破伤风类毒素、牛血清白蛋白、帽贝属血清蛋白上，能够实现提高分子量。使用昂贵和不太纯的来自外来生物体的载体蛋白质，为了抗原和载体蛋白质的共价结合不可缺少反应的和较有毒的病原体，以及这些化合物的纯化、同一性鉴定和纯度鉴定的困难性，是这些抗原载体蛋白质构建体的缺点。另一方面，有人提议通过下述方式增加B-T抗原决定簇的分子量，即这种抗原决定簇本身以某一种方式把支链结构共价地向多体结合(J.P.Tam，Y.-A.Lu，Proceedingsof the National Academy of Sciences of the USA 86，9084-9088(1989))。这种构建体被称为多抗原肽，简称MAP。
此外人们还知道，为了实现一种抗体形成，B和TH抗原决定簇的组合是必不可少的，并且TC抗原决定簇与TH抗原决定簇的组合，在以IFA给药后能够改善细胞毒素的淋巴细胞应答，也称为CTL应答(C.Widmann et al.，J.Immunol.Methods 155，95-99(1992))。
PS-EP-A1-513861描述了用于这种弱免疫原抗体的各种免疫增强制剂及其高分子构建体。首先含有免疫刺激剂的O/W乳剂属于此。这些粗分散或者胶质分散体系的缺点是其固有的热力学的不稳定性，这种不稳定性本身在贮藏过程中能以聚集现象反映。此外，这样的液体分散制剂的组分经受化学变化，如氧化和水解。此外，所述的制剂大多数需要免疫刺激剂，如胞壁酰肽，这种免疫刺激剂在毒物学上是完全不令人担心的。最后这些制剂丝毫没有显示长期作用。因此，为了达到能延续多年的接种预防，需要按照规定的接种计划注射3到4次(所谓的“增强”注射)的疫苗制剂。
此外，国际专利WO92/19263-A1中公布了一种用于抗原免疫增强的体系，该体系使用所谓的可生物降解的微球体、也称为微胶囊或微粒。这种方法的缺点是，免疫增强主要在胃肠粘膜上觉察到，因而可能仅对少数病原体(所谓的肠病原微生物)起作用。再者，这种微粒须在十二脂肠内用药，及不可以经口给药或服药的事实，排除了实际应用-至少在人体上的应用-的可能性。此外，按照PS-EP-A2-333523，一种称量过的细的(1-10μm)和粗的(20-50μm)微粒尺寸对于免疫增强作用似乎是一个重要的先决条件。这种对微粒的粒度范围的要求意味着，在微粒的制造和加工时要增加额外的成本，这是其缺点。
本发明的任务是，借助特殊的生物聚合物将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中，这种微粒悬浮在一种分散介质中并不经胃肠给药，引起系统的免疫应答增强。
按照本发明，这个任务是采用按照权利要求1-12所描述的方法来解决的。为此在例子1-6中描述了实施例。下面参照附
图1-7详细地说明本发明的方法。
图1示意地描述按照本发明的免疫增强。
图2表示在含MAP的快释微胶囊和IFA制剂一次给药后的抗体效价。
图3表示在含MAP的缓释微胶囊和IFA制剂一次给药后的抗体效价。
图4表示在含MAP的快释和缓释微胶囊的混合物和IFA制剂一次给药后的抗体效价。
图5表示在含MAP的快释微胶囊和IFA制剂三次给药后的抗体效价。
图6表示在含不同的MAP的微胶囊和IFA制剂一次给药后，增生的T淋巴细胞应答。
图7表示在总是含一种合成Tc抗原和相应的MAP的快释微胶囊混合物一次给药后的Tc应答。
1.将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中方法的出发点是，合成抗原按照本专利说明书开头部分中的定义，在其已知的化学结构中至少含有一种所定义的并且可被免疫系统识别的病原体微生物的抗原决定簇。此时在抗原决定簇中不仅可以涉及B细胞抗原决定簇、TH细胞抗原决定簇、TC抗原决定簇，而且可以涉及这些抗原决定簇的任何混合物。所谓的多抗原肽(MAP)，单独或者与TC抗原决定簇组合，优先构成本发明方法的出发点。抗原决定簇的来源包括细菌、病毒、原虫和肿瘤细胞。按照本发明将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中。本发明的实质是，选择具有特殊物理和化学性能的生物聚合物，用于制造可生物降解的微粒。决定性的性能是这种生物聚合物以及由其制成的球状微粒在水介质和生理溶液中的润湿性、不溶性、溶胀能力和可生物降解性。生物聚合物的溶胀能力大小及其生物降解时间决定性地决定抗原从微胶囊中的释放动力学。现已令人惊异地发现，这种释放动力学也影响免疫应答的时间进程。具有不同的润湿性、溶胀能力和生物降解时间的这种生物聚合物的例子是聚(乳酸)、聚(乳酸-乙醇酸共聚物)、聚(羟基丁酸)、聚(羟基丁酸-戊酸共聚物)、聚(己内酯(caprolacton))。将合成抗原嵌入生物聚合物中可采用各种已知方法来进行，如喷雾干燥、溶剂蒸发或凝聚。在此情况下，制造成以1-200μm等级的载有抗原的球形微粒。
2.在分散介质中悬浮在第二个步骤中，将本发明的载有抗原的微粒引入适合于将微粒不经胃肠给药的分散介质中。就此而言，本发明的实质是，分散介质是生物相容的和可生物降解的，而且还要具有对于增强免疫应答有利的性能。这样有利的分散介质例如有卵磷脂的水溶液和油溶液，或者具有0.1-20％、尤其是2-10％浓度范围的卵磷脂的水-油乳化液。其他合适的分散介质是所谓的微乳化液，它由水、油、表面活性剂和辅助表面活性剂组分组成。此外，使用生物相容的和可生物降解的物质例如天然的和合成的单酸甘油酯、甘油二酯和甘油三酯，卵磷脂、聚羟亚烃(Poloxamere)和聚山梨酸酯。所述的分散介质的特点是对于可生物降解的微粒有惊人好的润湿性能和悬浮性能。举例来说，这种润湿性能和悬浮性能显著地优于那些通常使用的分散介质，如羧甲基纤维素或聚山梨酸酯。将微粒分散在分散介质中可以通过简单的摇动来实现，这样就形成了可以注射的配制剂。
3.给药将载有抗原并悬浮在分散介质中的微粒不经胃肠给药，这种给药可以一次完成，也可以以规定的时间间隔分几次进行。最新的给药方式是以“增效”这一概念而为人们所知晓。1和2增效剂量例如可以在第一次注射之后1-4周和3-6个月给药。在将本发明的制剂一次或多次给药之后，产生持续数月的增强免疫应答。
4.增强免疫应答的效果在BALB/c小鼠中，一般在一次、作为例外也可以在三次不经胃肠投给本发明的载有合成抗原的微粒后，测定免疫应答的增强。作为合成的模型抗原使用由破伤风毒素(序列947-967)的普通TH抗原决定簇和贝格海(berghei)疟原虫围孢子小体蛋白质的重复区B细胞抗原决定簇构造的MAP，以及贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质(序号252-260)的TC抗原决定簇(S.Demotz et al.，J.ofImmunology，142，394-402(1989)；P.Romero et al.，Nature341，323(1989)；J.L.Weber et al.，Exp.Parasitology 63，295(1987))。按照特定的抗体效价、T淋巴细胞增生和特定的细胞毒素的T淋巴细胞活性测定免疫增强的强度和持续时间。按照已知的免疫方法测定这三个参数。
图1示意地说明由本发明的方法达到的免疫增强的重要参数。在本专利说明书中，免疫增强指的是在时间过程中免疫应答的强度，根据一种给药的合成抗原在抗体效价、T细胞增生和TC刺激等级上，与含水抗原溶液相比是增强的，并且与IFA制剂相比是大体相当或有所提高。
由此产生了一种可能性，即通过混合具有不同润湿性、溶胀能力和生物降解时间的生物聚合物，不仅大大增强体液的抗体应答，而且大大增强细胞的T淋巴细胞应答，其程度可比得上甚至高于用弗洛伊德氏不全佐药达到的增强。此外，按照这种方法的免疫应答在时间上是可控制的，与IFA和水溶液相比延长大约几周。
这里所描述的方法，根据所用的可生物降解微粒的特制的性能，使一种瞄准的并在其时间变化过程中可控制的体液和细胞的免疫应答增强成为可能，所述免疫应答是针对合成抗原，尤其是针对所谓的MAP。此外，该方法还具有一个突出的优点，即能够刺激包括B和TH淋巴细胞还有细胞毒物的T淋巴细胞的瞄准和增强的刺激，因此，尤其也能够对病毒、原虫和肿瘤细胞进行有效的免疫。在此令人惊异地首次能显示这种细胞毒物的T淋巴细胞刺激。与PS-EP-A2-333523和PCT WO92/19263中描述的免疫增强不同，这里所述的这种免疫增强主要是系统的，即不是粘膜的，并且不仅在强度上而且在持续时间上或者在时间过程中能够加以控制。此外，对于免疫增强，不需要狭窄的、精确定义的颗粒大小分布，这带来工艺上的优点。
这里所描述的方法在人和动物对疾病的免疫中获得应用，这些疾病是由细菌、病毒、原虫和肿瘤细胞所引起的。特别是这种方法的主要用途表现在能够实现对病毒、原虫和肿瘤细胞的免疫，这种免疫仅用传统的疫苗不能令人满意的，即效果不足并且要忍受不希望的副作用。利用本发明的方法刺激细胞毒物的T细胞以及持续长时间的免疫应答形成这种应用的基础。
实施例1描述对具有标志P30B2的支链多抗原肽的抗体应答增强，这种多抗原肽由破伤风毒素(序列947-967)的普通TH细胞抗原决定簇和贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质的重复区的B细胞抗原决定簇构成0.02g P30B2被溶解在2.00g水中，接着用一台超声波发生器将该溶液分散在下述溶液中，所述溶液是2.0g聚(d，l-乳酸-乙醇酸共聚物)50∶50(Resomer 502，Boehringer Ingelheim)溶解在40.0g二氯甲烷中。通过喷雾干燥由这种分散液制成球状微粒(RG502)。接着，利用摇动将载有抗原的微粒悬浮在5％卵磷脂(0vothin 170，Lukas Meyer，D-Hamburg)的无菌溶液中。将该悬浮液皮下注射到一组8只BALB/c小鼠中(每只0.5ml)。给每只小鼠注射的抗原量是30μg。作为对照物，第二组8只BALB/c小鼠用在弗洛伊德氏不全佐药(IFA)中的相同抗原量进行免疫。采用ELISA测定抗体效价。
图2表示通过RG502与IFA比较，属于实施例1的免疫增强的时间曲线。用RG502和IFA达到的抗体效价在免疫后的第一个15周是对等的。此后由IFA诱发的效价下降，而由微胶囊诱发的效价至少在28周期间保持恒定。用亲水的强溶胀的快释和可迅速生物降解的生物聚合物，如PLGA(50∶50)，在给药2周后，抗体效价已经达到1－2×103，并且经过至少28周的继续时间里保持恒定。与此相反，IFA配制剂在一次给药15周之后测定的效价已降低，并且在28周后仅有2×102。
实施例2描述对具有标志P30B2(按照实施例1)的支链多抗原肽的抗体应答增强，这种多抗体肽是由破伤风毒素(序列947-967)的普通TH细胞抗原决定簇和贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质的重复区的B细胞抗原决定簇构成将0.02g P30B2溶解在2.00g水中，接着，用一台超声波发生器使该溶液分散在下述溶液中，所述溶液是2.0g聚(d，l-乳酸)(Resomer 206，Boehringer Ingelheim)溶解在40.0g二氯甲烷中。借助凝聚作用，通过添加硅油诱发，由这种分散液制成球状微粒(R206)。接着，利用摇动使载有抗原的微粒悬浮在5％的卵磷脂(Ovothin 170，Lukas Meyer，D-Hamburg)无菌溶液中。将该悬浮液给一组8只BALB/c小鼠皮下注射(每只0.5ml)。每只小鼠注射的抗原量是30μg。作为对照物，用在弗洛伊德氏不全佐药(IFA)中的相同量的抗原对第二组8只BALB/c小鼠进行免疫。采用ELISA测定抗体效价。
图3表示通过R206与IFA比较，属于实施例2的免疫增强的时间曲线。用疏水的弱溶胀能力的缓释和可慢速生物降解的R206达到的抗体效价在最初12周里连续增加，此后达到用IFA免疫已经2周后的水平。IFA效价在大约15周后又持续不断地下降，而R206效价至少28周时间保持恒定。
实施例3描述对具有标志P30B2(按照实施例1)的支链多抗原肽的抗体应答增强，这种多抗原肽由破伤风毒素(序列947-967)的普通TH细胞抗原决定簇和贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质的重复区的B细胞抗原决定簇构成与实施例1类似，P30B2掺入聚(d，l-乳酸-乙醇酸共聚物)75∶25(Resomer RG752，BoehringerIngelheim)，加工成球状微粒(RG752)。含有相同量的P30B2的微粒RG752、RG502(来自实施例1)和R206(来自实施例2)通过摇动而悬浮在无菌的5％卵磷脂(Ovothin 170，Lukas Meyer，D-Hamburg)溶液中。将该悬浮液给一组87BALB/c小鼠皮下注射(每只0.5ml)。每只小鼠注射的抗原量是30μg。作为对照物，用在弗洛伊德氏不全佐药(IFA)中的相同量抗原对第二组8只BALB/c小鼠进行免疫。采用ELISA测定抗体效价。
图4表示通过将RG502、RG752和R206的混合物与IFA比较，属于实施例3的免疫增强的时间曲线。用由快释和缓释生物聚合物组成的这种微胶囊混合物达到的抗体效价迅速增加，并且在免疫2周后已经达到一定水平，该水平比用IFA诱发的抗体效价高2.5倍。IFA效价在大约15周后又持续不断地下降，而用微胶囊混合物达到的效价至少28周的时间保持相对恒定。
实施例4描述对具有标志P30B2(按照实施例1)的支链多抗原肽的抗体应答增强，该多抗原肽由破伤风毒素(序列947-967)的普通TH细胞抗原决定簇和贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质的重复区的B细胞抗原决定簇构成类似于实施例1，将P30B2掺入聚(d，l-乳酸-乙醇酸共聚物)50∶50(Resomer RG502，BoehringerIngelheim)，加工成球状微粒(RG502)。通过摇动使载有抗原的微粒悬浮在5％卵磷脂(Ovothin 170，Lukas Meyer，D-Hamburg)的无菌溶液中。将该悬浮液给一组8只BALB/c小鼠皮下注射(每只0.5ml)。每只小鼠注射的抗原量是3×10μg。在16天(1.增效)后和113天(2.增效)后重复注射。作为对照物，用在弗洛伊德氏不全佐药(IFA)中的相同量抗原并按照相同的接种计划对第二组8只BALB/c小鼠进行免疫。采用ELISA测定抗体效价。
图5表示与IFA比较，属于实施例4的在增效注射RG502后的免疫增强的时间曲线。用RG502和IFA达到的抗体效价同样地增加。因此本发明的方法也适用于通过增效达到的免疫增强。
实施例5描述对具有标志P30B2(按照实施例1-4)的多抗原肽的TH淋巴细胞增生的增强。按类似于实施例1、2和3的方法将P30B2装入到RG502、RG752和R206中，并加工成具有不同的溶胀能力的球状微粒。通过摇动使含有相同量的P30B2的微粒悬浮在5％卵磷脂(Ovothin 170，Lukas Meyer，D-Hamburg)的无菌溶液中。给一组8只BALB/c小鼠皮下注射这种悬浮液(每只0.5ml)。每只小鼠注射的抗原量是30μg。作为对照物，用在弗洛伊德氏不全佐药(IFA)中的相同量抗原对第二组8只BALB/c小鼠进行免疫。用已知方法测定淋巴结中的T细胞增生。
图6表示将不同的微胶囊制剂及一种IFA配制剂给药14天后，实施例5中描述的T淋巴细胞增生。由图中可以看出，所有微胶囊制剂，即具有快速抗原释放的RG502、具有中等延缓速度抗原释放的RG752和具有极低速度抗原释放的R206，以及所有三种微胶囊的混合物，与IFA配制剂相比，T淋巴细胞增生至少以一个可比得上的大小增强，部分地以更强的大小增强。
实施例6描述对于贝格海疟原虫围孢子小体蛋白质的TC细胞抗原决定簇(CTL359A，序列252-260)激发的细胞毒物的T淋巴细胞反应将0.008g CTL359A溶解在1.0g水中，接着，用一台超声波发生器使该溶液分散于4.0g聚(d，l-乳酸-乙醇酸共聚物)(Resomer 502，Boehringer Ingelheim)在60.0g二氯甲烷中形成的溶液中。采用喷雾干燥由这种分散液制成球状微粒。将载有CTL359A的微粒和载有P30B2的微粒(按照实施例1)以CTL359AP30B2＝1∶10的比例混合，以便提高对CTL的免疫应答。接着通过摇动使微胶囊混合物悬浮在5％卵磷脂(Ovothin 170，LukasMeyer，D-Hamburg)的无菌溶液中。给一组2只BALB/c小鼠皮下注射这种悬浮液(每只0.5ml)。每只小鼠注射的量共计4μg CTL359A和40μg P30B2。在10天和20天后采用细胞溶解试验测定TC细胞应答。
图7表示属于实施例6的TC淋巴细胞应答，这种应答是在免疫后或者在制剂给药后10天和20天测定。这种按百分率计的细胞溶解活性表现依赖于效应/靶细胞比E/T。微胶囊化的TC抗原决定簇和TH抗原决定簇(P30B2＋359A在RG502中)同时给药，令人惊异地诱发有意义的TC淋巴细胞刺激，这种刺激在给药20天后可以观察到。尤其引人注意的是出现TC应答随时间的变化过程，这种TC应答与TH应答或抗体应答相反，需要相当长的时间。
本发明的实质是提出增强对合成抗原的免疫应答的可生物降解的球形微粒。通过确定所使用的生物聚合物的物理化学性能，可以在其程度上和时间进程中控制这种免疫增强。此外该方法能附加刺激抗体和TH淋巴细胞增强，也刺激细胞毒物的T淋巴细胞。免疫增强的程度至少与通过IFA配制剂达到的增强相当，并且在其时间过程中显著延长。同时，提供了可供在人和动物对疾病的免疫中使用的方法，所述疾病是由病毒、细菌、原虫或肿瘤细胞引起的。
权利要求
1.增强人和动物对合成抗原的免疫应答的方法，其特征在于，首先将合成抗原嵌入可生物降解的球状微粒中，然后使这种载有合成抗原的微粒悬浮在一种分散介质中，将这种配制剂不经胃肠给药，此时产生增强的免疫应答。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于，使用一种化合物作为合成抗原，该化合物由一种至少具有B细胞抗原决定簇和至少一种TH细胞抗原决定簇的单链组成。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于，使用一种化合物作为合成抗原，该化合物由重复共价结合的B细胞抗原决定簇和TH细胞抗原决定簇组成。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于，使用一种化合物作为合成抗原，该化合物由一种细胞毒物的T细胞抗原决定簇(TC)组成。
5.权利要求1所述的方法，其特征在于，使用一种混合物作为合成抗原，该混合物由至少一种TH抗原决定簇和至少一种TC抗原决定簇组成。
6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，合成抗原包含来自原虫或病毒或细菌或肿瘤细胞的B-和T-细胞抗原决定簇。
7.权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，合成抗原包含来自原虫或病毒或细菌或肿瘤细胞的，或者来自它们之中的任一种组合的B-和T-细胞抗原决定簇。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，球状微粒由一种生物相容的、可生物降解的生物聚合物构造成，其中生物聚合物来自聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸共聚物)、聚己内酯、聚(羟基丁酸)、聚(羟基丁酸-戊酸共聚物)、聚原酸酯或聚酐组成的组。
9.权利要求8所述的方法，其特征在于，生物聚合物来自至少两个不同的组。
10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，作为分散介质使用一种含水的或含油的卵磷脂溶液或一种含水-油的卵磷脂乳状液。
11.权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，作为分散介质使用一种微滴乳状液。
12.权利要求1-11中任一项所述的方法在人和动物对由病毒、细菌、原虫或肿瘤细胞引起的疾病中的免疫应用。
全文摘要
公开了一种增强对合成的或遗传工程制造的、具有弱免疫原性的抗原的免疫应答的方法。将抗原嵌入可生物降解的微粒中，然后将载有抗原的微粒分散在可生物降解的介质中，当它不经胃肠给药时，与抗原的水溶液相比，产生增强的抗体应答、T
文档编号A61K39/39GK1120809SQ94191709
公开日1996年4月17日 申请日期1994年12月23日 优先权日1993年12月23日
发明者B·甘达, G·科拉丁, Y·孟, C·托马辛, H·P·默克尔 申请人:Gff工业方向促进研究公司