专利名称：二硫化物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的含一个二硫基的硝酸酯及其制备方法。
有机硝酸酯是治疗心脏病的有效药物。该药物之所以发挥其作用，不仅由于降低前负荷和后负荷而减轻心脏负担，而且也由于扩张冠状动脉而改善心肌供氧。
然而，在过去的年代中已确定，在治疗中使用的常规有机硝酸酯如甘油三硝酸酯、异山梨醇二硝酸酯或异山梨醇-5-单硝酸酯，当短时间内连续输入高剂量时，作用明显减弱，此即硝酸酯耐药性。这种缺点可用欧洲专利EP 0362575和EP 0451760中提出的化合物来排除。
据EP 0362575和EP 0451760记载，硝基化合物的作用系由该种化合物生成的NO-基所致。就此而言，由于硝酸酯与半胱氨酸中的硫羟基反应，首先生成活性而短寿命的，至今仍为假设的中间产物，该中间产物也许是硝酸硫羟酯或硫代硝酸酯，它经分子内重排，并随着分解成一个药理学活性的NO基和一个不稳定的硫基，它同另外的硫基反应，生成相应的二硫化物。NO-基的形成和释放，需要被还原的、含有一个硫羟基的半胱氨酸，该半胱氨酸可转化为二硫化物，故而在持续供药或给予高剂量时，硝基化合物作用的减弱，应归因于SH-基存储源(SH-(Gruppenpools)的衰竭。在EP 0362575和EP 0451760中要求保护含氢硫基的化合物，并基于这种共同的结构原则(Bauprinzips)，防止了硝酸酯耐药性，或者减弱了已出现的硝酸酯耐药性。
现已出乎意料地发现，代之以一个自由硫羟基而含有二硫基的硝基化合物也是有效的，并在持续给药时也同样无硝酸酯耐药性。因此，本发明的主题是通式I所示的化合物及其生理上可承受的盐 式中R和R′的通式为 R11是氢，具1至6个碳原子的烷基，取代的低级烷基，其中取代基是卤素、羟基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级烷硫基、芳硫基，R12如R11，为氢或低级烷基，R13是具有1至6个碳原子的硝酸基烷基，r的数值为0至10，而且式中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′为氢、低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基低级烷基、羟苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基低级烷基、氨基-低级烷基、酰氨基低级烷基、氢硫基低级烷基或低级烷硫基-低级烷基R3、R3′为羟基、低级烷氧基、低级链烯氧基、二低级烷氨基-低级烷氧基、酰氨基-低级烷氧基、酰氧基低级烷氧基、芳氧基、芳基低级烷氧基、取代基为甲基、卤素或甲氧基的取代芳氧基或取代芳基低级烷氧基、氨基、低级烷氨基、二低级烷氨基、芳基低级烷氨基、羟基低级烷氨基、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或经肽连接的氨基酸基。R4、R4′是氢或低级烷基，R5、R5′如R4、R4′，为氢或低级烷基，R2和R3及R2′和R3′，可互相结合形成酯或酰胺，R1和R2如R1′和R2′，可互相结合生成具有2至4个碳原子的亚烷基桥、具有2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，具有3至4个碳原子、含有一个双键或如上亚烷基桥并由羟基、低级烷氧基、低级烷基或二低级烷基取代的亚烷基桥，m、n、o、p、q及m′、n′o′p′和q′的数值为0至10。
本发明的化合物也可以其酸加成盐的形式存在。
根据本发明的改进，硝酸基烷基芳基链烷酸和硝酸基链烷酸组成部分的(诸)脂肪部分，其链长为2-6个碳原子；它们可以是直链的，支链的，外消旋的或光学异构体的。
通式(I)所示的本发明硝酸基烷烃羧酸衍生物和硝酸基烷基芳基烷烃-羧酸衍生物，优选包括含硫氨基酸的二硫化物，特别是胱氨酸，均胱氨酸或青霉胺二硫化物。
根据本发明的另一改进，胺基酸二硫化物以立体化学的L-型或DL-型存在。
根据本发明尤具优点的改进，所欲保护的化合物为下列化学式所示者N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二乙酯N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸-二乙酯N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-特-丁酯N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二甲酯N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二甲酯N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-青霉素胺-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-甲基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-特-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-酰吗啉N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二异丙基酯根据EP 0362575所记载，通式I所示的本发明化合物可以本身已知的方法，使相应的硝酸基羧酸或其具有反应能力的衍生物，同游离的、酯化的或酰胺化的氨基酸二硫化物的氨基进行缩合来制备。
通式I中R3和R3′一起同相邻的羰基形成一个酰胺官能团的化合物，与至今已知的硝酸酯相比，具有缓释的和持久的作用。这使血管扩张所致生理反调控活动减弱，并可延长给药间隔。特别是代偿机理的减弱是有益的，因为它降低了在硝酸酯治疗情况下出现的副作用，如所预期的反射性心动过速。
因此，特别优选通式I中R3和R3′为取代或未取代氨基基团的化合物。
作为可选择的方案是，可使有关的硝酸基烷基羧酸或硝酸基烷基芳基烷基羧酸或其具反应活性的衍生物先与含一个硫羟基的氨基酸上的氨基缩合，生成相应酸的酰胺，它接着借助氧化剂如碘酸钾在二聚条件下氧化成相应的通式I所示二硫化物。
但是，按这些方法来制备这些化合物可导致非单一的产物混合物，其中含有所希望化合物的产量很低，并需要进行成本昂贵的提纯。
这些缺点可这样来避免首先使相应的硝酸基羧酸或其有反应能力的衍生物同较为自由地经由二硫化物桥连结的氨基酸上的氨基进行缩合，使所得化合物在其羧酸官能团上转化成活性酯，并接着将此酯以氨、伯胺或仲胺转化成所希望的化合物。因此，本发明的主题也是一种制备通式II所示化合物的方法 式中R和R′的通式为 其中R11为氢，具1至6个碳原子的烷基，取代的低级烷基，其中取代基是卤素、羟基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级烷硫基、芳硫基R12如同R11，为氢或低级烷基R13是具1至6个碳原子的硝酸基烷基r的数值为0至10而且式中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′是氢，低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基低级烷基、羟苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基低级烷基、氨基-低级烷基、酰氨基-低级烷基、氢硫基低级烷基或低级烷硫基-低级烷基R3、R3′是氨基、低级烷氨基、二低级烷基氨基，芳基低级烷基氨基、羟基低级烷氨基、吡咯烷、吗啉、哌嗪或经肽连接的氨基酸基，R4、R4′是氢或低级烷基，R5、R5′如同R4、R4′，为氢或低级烷基，R1和R2如R1′和R2′可互相连接，形成具有2至4个碳原子的亚烷基桥、具有2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，具有3至4个碳原子、有一个双键或如上所述亚烷基桥、被羟基、低级烷氧基、低级烷基或二低级烷基被取代的亚烷基桥，m、n、o、p、q及m′、n′o′p′和q′的数值为0至10，其特征是使通式III所示化合物 式中R的通式为 其中R11是氢，具1至6个碳原子的烷基，取代基为卤素、羟基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级烷硫基、芳硫基的取代低级烷基R12如同R11，为氢或低级烷基，R13为具有1至6个碳原子的硝酸基烷基m和r的数值为0至10以其游离酸、反应性酰基卤、酰基叠氮、酯和酸酐的形式同通式IV所示化合物 其中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′是氢、低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基低级烷基、羟基苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基低级烷基、氨基-低级烷基、酰氨基-低级烷基、氢硫基低级烷基或低级烷硫基-低级烷基R3、R3′为羟基或卤素R4、R4′是氢或低级烷基，R5、R5′如同R4′和R4′，为氢或低级烷基，R1和R2及R1′和R2′，可互相结合形成具有2至4个碳原子的亚烷基桥、具有2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，具有3至4个碳原子、有一个双键或如上所述亚烷基桥、被羟基、低级烷氧基、低级烷基或二低级烷基取代的亚烷基桥，m、n、o、p、q及m′、n′o′p′和q′的数值为0至10。缩合成通式V化合物， 将此化合物在其自由的或卤代的羧酸官能团上以N-羟基琥珀酰亚胺转化成活性的通式VI所示羧酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯 式中R3和R3′与上述含义不同 并接着使该化合物同氨、伯胺或仲胺，特别是同低级烷基胺、二低级烷基胺、芳基低级烷基胺、羟基低级烷基胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或氨基酸反应成通式II所示的化合物。
本发明的通式I和II所示新化合物及其盐可以液态或固态经口腔、肠道或胃肠外给药。
注射介质优先使用含有在注射液中常用的添加物如稳定剂、增溶剂或缓冲剂的水。这类添加物例如为酒石酸缓冲剂和柠檬酸缓冲剂、乙醇、配合剂(如乙二胺四乙酸及其无毒盐)、调节粘度用的高分子聚合物(如液态聚环氧乙烷)。固态载体例如为淀粉、乳糖、甘露醇、甲基纤维素、滑石、高度分散的硅胶酸、高分子脂肪酸(如硬脂酸)、明胶、琼脂、磷酸钙、硬脂酸镁、动物脂肪与植物脂肪，以及固态高分子聚合物(例如聚乙二醇)；适用于口服的制剂在需要时可含有调味剂和增甜剂。
根据本发明的另一改进，药含有一种本发明化合物和/或本发明化合物的混合物。
这种药物可用于治疗心脏循环系统疾病，例如用作治疗冠动脉性心脏病，高血压和心力衰竭，以及扩展周围血管，包括脑血管和肾血管的药物。
含有预先计算量的一种或多种本发明化合物的药物制剂，可每天一次以缓释制剂形式或每天多次以有规则的间隔(每天2-3次)给药。以体重75kg为准计，通常每天给药的有效物质量为每天200-300mg。本发明化合物可以注射形式每日1-8次或通过连续输液给药。通常每天5-200mg的量就够了。
典型的药片可有下列组成1)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二酰胺 30mg2)淀粉，U.S.P.57mg3)乳糖，U.S.P.73mg4)滑石粉U.S.P.9mg5)硬脂酸 6mg将物质1，2和3过筛，制粒，同4和5均匀混合并接着制片。
实施例阐明发明，但不限制本发明。
实施例1制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸使149.1g(3.727mol)氢氧化钠溶于2.5升水，冷却至0℃，并在搅拌和冰浴冷却下，分数次加入448.0g(1.864mol)L-半胱氨酸，并使温度不超过5℃。向其中加入2.0升二氯甲烷。接着在冷却和同时剧烈搅拌下，同时缓慢滴加由734.0g(3.961mol)3-硝酸基三甲基乙酰氯溶于1.0升二氯甲烷所成的溶液和167.8g(4.195mol)氢氧化钠溶于1.0升水所成的溶液，此时温度最高升至29℃。经室温下搅拌2.5小时后，分出二氯甲烷相，用1.0升二氯甲烷洗涤水相，并在搅拌下加入350ml 37％的(4.227mol)盐酸，同时析出油状产物。各用2.0升乙酸乙酯萃取该混合物三次之后，合并提取液，并用旋转蒸发器(Rotavapor)浓缩，剩下棕色油状残留物。使该残留物溶于2.0升沸腾着的乙酸乙酯，并在强负压(油泵真空)和约55℃浴温下，浓缩至恒重(产物剧烈发泡)。将以此得到的残留物溶入1.0升沸腾着的乙酸乙酯，冷至室温，用1.0升二氯甲烷稀释，并在约-30℃的冰箱中加入晶种，使之结晶。将结晶出来的物质吸滤出来，各用250ml由300ml二氯甲烷和200ml的乙酸乙酯组成约-30℃的溶液洗涤二次，并在约40℃的真空干燥箱中干燥至恒重。
产量为318.03g(相当于理论产量的32.16％)。熔点47.2℃。
实施例2制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸制备和处理同实施例1相似。用37％盐酸酸化，析出固体产物，此产物如上所述用乙酸乙酯萃取并浓缩，此时剩下51.3g白色固态产物(相当于理论产量的73.5％)。
将此产物在加温下溶于400ml甲醇，过滤，并冷至室温。边搅拌边向其中加入400ml蒸馏水，并在室温下搅拌3小时，其间慢慢结晶出产物。吸滤出产物，用由60ml蒸馏水和40ml甲醇组成的混合物洗涤一次，并接着在约40℃和约2托的真空干燥箱中干燥至恒重。
产量为31.3g(相当于理论产量的44.8％)。熔点约42℃。
实施例3制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰酸)-L-胱氨酸二乙酯在室温下，使24.4g(82.9mmol)3-硝酸基三甲基乙酰-L-半胱氨酸乙酯溶于150ml醋酸，并在搅拌下慢慢滴入由2.9g(13.9mmol)碘化钾溶于300ml蒸馏水所成的溶液，其间配料呈棕色，并在搅拌15分钟后，析出一种晶态物质。吸滤出此物质，使之溶于150ml二氯甲烷，并依次各用100ml 1％硫代硫酸钠、100ml 1n盐酸和100ml蒸馏水洗涤一次。浓缩二氯甲烷相，使剩下的残留物(25.4g)溶于150ml甲醇，并掺加45ml蒸馏水。加入晶种后，此物质在室温下结晶。为使结晶完全，将烧瓶置入冰箱中(约0℃)过夜。将吸滤出的物质各用30ml约-25℃的1∶1甲醇和蒸馏水所组成的冷混合液洗涤二次，并在真空干燥箱中，在约35℃和约250Pa下，用五氧化二磷干燥至恒重。
产率为16.9g(相当于理论值的69.5％)。熔点84.9℃。
实施例4制备二-(硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸二乙酯将11.4g(35mmol)均胱氨酸二乙酯和12.0g(73.5mmol)3-硝酸基三甲基醋酸溶于200ml二氯甲烷，冷却至约10℃，并约在15分钟内，边搅拌边滴加15.2g(73.5mmol)DCC溶于100ml二氯甲烷所成的溶液，并滴加将近结束时沉淀出DCC-尿素。接着，在室温下搅拌过周末，吸滤出尿素，并各用50ml二氯甲烷洗涤两次。将合并后的二氯甲烷溶液各用100ml 1n盐酸洗涤两次，各用100ml碳酸氢钠溶液洗涤两次并用100ml蒸馏水洗涤一次，在Rotayapor中浓缩之，并将由此所得的残留物在加热条件下溶于由175ml无水乙醇和25ml乙酸乙酯组成的混合物中。过滤所得溶液，在冰箱(0℃)中放置过夜。吸滤出所生成的结晶，并各用20ml约0℃的无水乙醇洗涤两次后，在室温和约250Pa真空干燥箱内干燥至恒重。
产量为12.4g(相当于理论产量的57.6％)。熔点120.4℃。
实施例5制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二叔丁酯将17.76g(0.03mol)L-胱氨酸叔丁酯和10.36g(0.126mol)乙酸钠溶于80ml水和120ml二氯甲烷，并在10至15℃下，滴加由12.0g(0.066mol)3-硝酸基三甲基乙酰氯和50ml二氯甲烷组成的溶液。在室温下，搅拌此配料过夜，分出有机相，并用各50ml 1n盐酸和浓碳酸氢钠溶液洗涤之。经用硫酸钠干燥后，过滤并浓缩之。
剩下的残留物用乙醇再结晶，使其在-25℃过夜，以便结晶完全，并用10ml乙醇(-25℃)洗涤。
产量为12.73g(相当于理论值的66.02％)。熔点93.7℃。
实施例6制备N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸二甲基酯将1.48g(0.055mol)L-胱氨酸二甲基酯-碱在搅拌下溶于10ml二氯甲烷，添加0.56g(0.055mol)三乙基胺，接着慢慢滴加2.16g(0.01mol)4-硝酸基甲基苯酰氯溶于10ml二氯甲烷所成的溶液。搅拌2小时后吸滤出产物，用2×15ml 1n盐酸和2×15ml水洗涤，干燥，并用乙酸乙酯再结晶，以此制得无色的晶体。
产量为1.89g(相当于理论产率的60.4％)。熔点155℃。
实施例7制备N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸二甲酯类似于4-硝酸基甲基苯酰基衍生物来进行制备。此时由于粗产物留溶在反应配料的二氯甲烷中，故在搅拌2小时后用15ml 1n盐酸和2×15ml水洗涤，干燥，在真空中蒸浓并接着用二异丙醚重结晶，以此制得无色针状物。
产量为2.68g(相当于理论值的85.6％)。熔点91℃。
实施例8制备二-N，N′-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二-N，N′-丁基酰胺将1.23g(0.0035mol)L-胱氨酸-二-N，N′-丁基酰胺-碱溶于20ml二氯甲烷，加入0.61g(0.006mol)三乙胺，并慢慢滴加1.29g(0.006mol)4-硝酸基甲基苯酰氯溶于10ml二氯甲烷所成的溶液。搅拌2小时后，用20ml 1n盐酸和2×15ml水洗涤，用硫酸钠干燥，在真空中浓缩至于，并用二氯甲烷重结晶，以此得到无色粉末。
产量为0.93g(相当于理论值的26.3％)。熔点183℃。
实施例9制备(S，S)-双-N，N′-(3-硝酸基甲基苯酰基)-胱氨酸-二-N，N′-丁基酰胺按类似于4-硝酸基甲基苯酰基衍生物的方法进行制备。
外观无色粉末产量为0.4g(相当于理论值的11.3％)。
熔点174-175℃实施例10制备N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-胱氨酸二酰胺将1.03g(0.0035mol)胱氨酸二酰胺-碱悬浮于20ml二氯甲烷，加入0.60g(0.006mol)三乙胺，并慢慢滴加1.29g(0.006mol)4-硝酸基甲基苯酰氯溶于10ml二氯甲烷所成的溶液。搅拌过夜后，用20ml 1N盐酸和2×20ml水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸浓(einrotieren)，并用二氯甲烷使残留物再结晶，以此制得无色粉末。
产量为0.32g(相当于理论值的15.3％)。熔点143℃。
实施例11制备(S，S)-N，N′-双-(3-硝酸基甲基苯酰基)-胱氨酸二酰胺按相似于4-硝酸基甲基苯酰基-衍生物的方法进行制备，以此制得无色粉末。
产量为0.25g(相当于理论值的12.2％)。熔点136℃。
实施例12制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-青霉胺二硫化物-二酰胺步骤1制备L-青霉胺二硫化物二酰胺在约100ml液氨中，于-40--50℃下加入7.95g(0.02mol)L-青霉胺二硫化物二甲基酯×2HCl，在-40℃至-30℃下搅拌过夜，并撤去冷浴，以蒸除氨。跟着，在Rotavapor中以50℃浴温进行浓缩，将全部残留物溶于40ml温热的异丙醇中，并过滤之。向滤液中导入HCl-气，以此沉淀出产物，将之吸滤出来。
产量为4.6g(相当于理论值的62.61％)。
步骤2制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-青霉胺二硫化物-二酰胺将4.4lg(12mmol)L-青霉素胺二硫化物二酰胺×2HCl和4.03g(48mmol)碳酸氢钠溶于100ml水，加入60ml二氯甲烷，并缓慢搅拌至二相相溶解澄清为止。然后，在室温下滴加由4.36g(24mmol)3-硝酸基三甲基乙酰氯溶于60ml二氯甲烷所成的溶液，搅拌过夜，分离出有机相，并各用50ml 1M盐酸洗涤二次。抽去二氯甲烷，剩下一种油状残留物，对其进行柱色谱提纯。
产量为3.45g(相当于理论值的49.17％)。
实施例13制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二酰胺步骤1制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-羟基琥珀酰亚胺酯)将477.5(0.9mol)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸(实施例1)和213.4g(1.854mol)N-羟基琥珀酰亚胺溶于1400ml四氢呋喃，冷却至5℃，并在搅拌和冰浴冷却下，在30分钟内滴加382.5g(1.854mol)DCC溶于600ml四氢呋喃所成的溶液。此时反应物温度升至30℃，并结晶，故而为保持搅拌起见，首先加入0.5升四氢呋喃，然后加温至约50℃，并接着再用0.5升丙酮再次稀释。此后在约50℃下搅拌约30分钟，吸滤出DCC-尿素(干燥后为393.1g＝理论值的94.5％)并用0.5升丙酮洗涤。将合并后的有机溶液用Rotavapor浓缩至干，使残留物在回流下溶于1.7升乙酸乙酯，并滤出剩下的DCC-尿素残留物(7.5g＝理论值的1.8％)。经室温放置过夜后，分离出结晶出来的物质，各用0.2升乙酸乙酯洗涤两次，并在真空干燥箱中，于室温和约250Pa下干燥至恒重。
产量为373.9g(相当于理论值的57.3％)。
步骤2制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二酰胺72.4g(0.1mol)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)溶于300ml乙酸乙酯。在搅拌下，向其中滴加由16.5ml(25％)氨溶液和60ml水组成的溶液，再搅拌15分钟，再次加入由1.65ml(25％)氨溶液和60ml水组成的溶液并接着搅拌30分钟。
分出有机相后，用100ml水洗涤，用硫酸钠干燥，用活性炭澄清，并完全抽出溶剂，剩下56.72g残留物。将之溶于90ml甲醇，掺加40ml水，并在-25℃下再结晶。
吸滤出所沉淀的产物，并各用25ml 1∶1甲醇/水洗涤两次。
产量为37.4g(相当于理论值的70.75％)。熔点82.3℃。
实施例14制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-甲基酰胺)使72.4g(0.1mol)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)(实施例13，步骤1)溶于300ml乙酸乙酯，在室温下，边搅拌边滴加由19ml(40％)N-甲基胺溶液和60ml水组成的溶液，并再搅拌15分钟。此后再加入1.7ml，并再搅拌30分钟。分离出有机相，用100ml水洗涤，用硫酸钠干燥，并用活性炭澄清。完全抽出溶剂，剩下59.44g残留物。将其溶于90ml甲醇，掺入40ml水，并再结晶。
吸滤出沉淀出来的产物，并各用25ml 1∶1甲醇/水洗涤两次。
产量为38.51g(相当于理论值的69.18％)。熔点166.5℃。
实施例15制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-丁基酰胺)使7.3g(0.01mol)N，N′-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)(实施例13，步骤1)在室温下溶于80ml二氯甲烷中，在搅拌下加入由1.61g(0.022mol)n-丁基胺溶于20ml二氯甲烷所成的溶液，并再搅拌一小时。接着，依次用10ml 1n盐酸、10ml 9％的碳酸氢钠溶液和10ml水各洗涤一次，并用Ratavapor蒸馏，从而制得5.7g(＝理论值的89.0％)残留物，在0℃下，用20ml甲醇和2ml H2O使该残留物再结晶。
产量为4.3g(相当于理论值的67.1％)。熔点78.4℃。
实施例16制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-叔丁基酰胺)使7.3g(0.01mol)N，N′-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)(实施例13，步骤1)溶于80ml二氯甲烷，在搅拌下加入由1.61g(0.022mol)叔丁基胺溶于20ml二氯甲烷所成的溶液，并再搅拌一小时。接着，依次用10ml 1n盐酸、10ml 9％浓度的碳酸氢钠溶液和10ml水洗涤有机相各一次，并在Ratavapor中蒸馏，以此得到6.1g残留物(＝理论值的95.2％)，该残余物用由25ml甲醇和2ml H2O组成的溶液在0℃下进行再结晶。
产量为2.4g(相当于理论值的37.5％)。熔点81-82℃。
实施例17制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二酰吗啉使7.3g(0.01mol)N，N′-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)(实施例13，步骤1)溶于80ml二氯甲烷，边搅拌边滴加由1.92g(0.022mol)吗啉溶于20ml二氯甲烷所成的溶液，并在室温搅拌过夜。接着，依次用10ml1n盐酸、浓碳酸氢钠溶液和水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤并蒸馏，剩下6.06g残留物(相当于理论值的91.2％)，对之进行柱色谱提纯。
产量为4.71g(相当于理论值的70.9％)。熔点33.6℃。
实施例18制备N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二异丙酯将7.3g(10mmol)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N-羟基琥珀酰亚胺酯)(实施例13，步骤1)溶于150ml丙醇-2，室温下搅拌过夜，并接着在Rotavapor中进一步抽出丙醇-2。将剩下的残留物溶于50ml二氯甲烷，各用25ml水洗涤两次，用硫酸钠干燥，并在旋转式蒸发器中完全浓缩，从而剩下5.86g油状物(理论值的95.28％)。
加温下，将残留物溶于35ml甲醇，并在-25℃再结晶，吸滤出所沉淀的产物，各用5ml深冷的甲醇洗涤两次，并在室温真空干燥箱中干燥。
产量为4.01g(相当于理论值的65.31％)。熔点88.2℃。
药理学的论据体外血管松弛在试管内对分离的鼠主动脉环进行通式I化合物的血管松弛作用试验。为此，在麻醉后取出鼠的胸主动脉，除去胸主动脉的脂肪组织和附着的组织，并切成约5mm宽的环弓形段。将主动脉环放入盛有台罗德氏液的定时用炭合气加热的多个浴器中，并施以2克预负荷。在连续记录显示力的情况下，在90分钟平衡后，用2×10-7mol/升脱羟肾上腺素使血管环预收缩。在达到稳定收缩水平后，向血管浴液中渐增地掺加硝酸基化合物，从而在达到稳定松弛水平后，才加入各自的高一级的浓度。由得到的浓度作用曲线确定使预收缩的血管环松弛50％(EC50-值)的各自化合物浓度。表1含有这样确定的举例选出的化合物EC50-值。
表1物质 EC50[mol/升] 各个试验次数[n]N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二乙基酯 1.5×10-66N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸 1.2×10-46N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氢酸二酰胺 3.0×10-56N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-特-丁基酯5.9×10-53N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二哌啶物 1.0×10-46N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-甲基酰胺)2.4×10-54清醒狗的血压效果为证明在体内的硝酸酯作用，进行了本发明化合物对清醒狗的收缩动脉压(SAP)，中心静脉压(CVP)和肺动脉压(PAP)的效果试验·测SAP是用一经股动脉插入胸动脉的导管探头转化器进行的，测CVP及PAP是用一经颈静脉插入的Swan-Ganz-导管实现的，其导管尖端推至肺动脉或右心房，经其腔管在Statham-压力转化器上给出各压力。为了定量由本发明化合物引起的血压降低算出记录血压变化曲线下面的面积(AUC)。表2包括本发明二硫化物化合物静脉给药剂量为13.4μg/kg后或异山梨醇-5-单硝酸酯(5-ISMN)静脉给药剂量为26.8μg/kg后各血压降低的AUC-值。
表2AUC(SAP) AUC(CVP) AUC(PAP)(mg) (mg) (mg)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二乙基酯 94.1 85.7 12.0N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸 17.3 67.9 2.7N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二酰胺 55.3 46.9 28.1N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸二哌啶物 10.4 36.9 18.5N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-甲基酰胺)41.9 33.7 3.55-ISMN22.2 25.4 8.9与通常的硝酸酯5-ISMN相比在发明化合物给药以后明显的提高了AUC-值证明其有很高的效果。
权利要求
1.通式I化合物及其生理上可接收的盐 式中通式R和R′基团为 其中R11为氢，1至6个碳原子的烷基，取代的低级烷基，其中取代基是卤素、氢氧基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级烷硫基、芳硫基，R12如R11为氢或低级烷基，R13是1至6个碳原子的硝酸基烷基，r的数值为0至10，并在式中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′为氢、低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基-低级烷基、羟基苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基-低级烷基、氨基低级烷基、酰氨基低级烷基、氢硫基低级烷基或低级烷硫基-低级烷基R3、R3′是羟基、低级烷氧基、低级链烯氧基、二低级烷氨基-低级烷氧基、酰氨基低级烷氧基、酰氧基低级烷氧基、芳氧基、芳基低级烷氧基、取代基为甲基、卤素或甲氧基的取代的芳氧基或取代芳基低级烷氧基，氨基、低级烷氨基、二低级烷氨基、芳基低级烷氨基、羟基低级烷氨基、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或经肽连接的氨基酸酯。R4、R4′是氢或低级烷基，R5、R5′如R4、R4′为氢或低级烷基，R2和R3及R2′和R3′可在生成酯或酰胺情况下互相结合，R1和R2如R1′和R2′可互相结合生成具2至4个碳原子的亚烷基桥、具2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，具3至4个碳原子、有一个双键或如上亚烷基桥、被羟基、低级烷氧基、低级烷基或二低级烷基取代的亚烷基桥，m、n、o、p、q及m′、n′o′p′和q′有0至10的数值。
2.按照权利要求1的化合物，其特征在于，其硝酸基烷烃羧酸构分或硝酸基烷基芳基烷烃羧酸构分具有2至6个碳原子的链长，它为直链的，支链的，对映体的或光学异构体的。
3.按照权利要求1和2的化合物，其特征在于，在化合物中含有的氨基酸二硫化物是半胱氨酸、均半胱氨酸或青霉胺二硫化物。
4.按照权利要求1至3的化合物，其特征在于，氨基酸二硫化物是以立体化学的L-型存在。
5.按照权利要求1至4的化合物，其特征在于，氨基酸二硫化物是以立体化学的D，L-型存在。
6.按照权利要求1至5的化合物，其特征在于，化合物呈现下述化学式N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二乙基酯N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-D，L-均胱氨酸-二乙基酯N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二(2-甲基-2丙基酯)N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二甲基酯N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二甲基酯N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(4-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基甲基苯酰基)-L-胱氨酸二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-青霉素胺-二硫化物-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二酰胺N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-甲基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-(N，N′-特-丁基酰胺)N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-酰吗啉N，N′-二-(3-硝酸基三甲基乙酰)-L-胱氨酸-二-异丙基酯
7.制备按照权利要求1至6所述化合物的方法，其特征在于，使该化合物以本身已知的方法通过相应的硝酸基烷基羧酸或硝酸基烷基芳基烷基羧酸或其反应性衍生物同氨基酸二硫化物的氨基基团缩合来进行反应。
8.制备权利要求1至7所述化合物的方法，其特征在于，将相应的硝酸基烷基羧酸或硝酸基烷基芳基烷基羧酸或其反应性衍生物同含硫基团氨基酸的氨基缩合，并接着在二聚合情况下氧化所得化合物，生成相应的二硫化物。
9.制备通式II化合物的方法 式中通式的R和R′为 其中R11为氢，1至6个碳原子的烷基，取代的低级烷基，其中取代基是卤素、羟基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级烷硫基、芳硫基R12如同R11为氢或低级烷基R13是1至6个碳原子的硝酸基烷基r的数值为0至10并在式中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′是氢，低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基低级烷基、羟基苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基低级烷基、氨基-低级烷基、酰氨基-低级烷基、氢硫基低级烷基或低级烷硫基低级烷基R3、R3′是氨基、低级烷氨基、二-低级烷基氨基，芳基低级烷基氨基、羟基低级烷氨基、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或经肽连接的氨基酸基，R4、R4′是氢或低烷基，R5、R5′如同R4、R4′为氢或低级烷基，R1和R2及R1′和R2′可互相结合，生成2至4个碳原子的亚烷基桥、2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，3至4个碳原子、有一双键或如上一个亚烷基桥、被羟基、低级烷氧基、低级烷基或二-低级烷基被取代的亚烷基桥，m、n、o、p、q及m′、n′o′p′和q′具有0至10的数值，其特征在于，通式III化合物式III 式中通式的R基为式 其中R11为氢，1至6个碳原子烷基，取代的低级烷基，其中取代基是卤素、羟基、低级烷氧基、芳氧基、氨基、低级烷氨基、酰氨基、酰氧基、芳氨基、氢硫基、低级硫基、芳硫基R12如R11为氢基或低级烷基，R13是1至6个碳原子硝酸基烷基m和r的数值为0至10以其游离酸、反应性酰卤、酰基叠氮、酯和酸酐的形式以本身已知的方法同通式IV的化合物 其中R1、R1′为氢或低级烷基R2、R2′是氢、低级烷基、苯基、甲氧基苯基、苯基低级烷基、甲氧基-苯基-低级烷基、羟基苯基低级烷基、羟基低级烷基、烷氧基低级烷基、氨基低级烷基、酰氨基-低级烷基、氢硫基-低级烷基或低级烷硫基-低级烷基R2、R3′为羟基或卤素R4、R4′是氢或低级烷基，R5、R5′如R4、R4′，为氢或低级烷基，R1和R2及R1′和R2′可互相结合生成2至4个碳原子亚烷基桥、2至3个碳原子和一个硫原子的亚烷基桥，3至4个碳原子、有一个双键或一如上的亚烷基桥、被羟基、低级烷氧基、低级烷基或二-低级烷基取代的亚烷基桥，n、o、p、q及n′o′p′和q′的数值为0至10。缩合成通式V化合物，式V 此化合物在其自由的或卤代的羧酸官能团上以N-羟基琥珀酰亚胺转化成活性的通式VI的羧酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯 其中R3和R3′不同于上述含义为 并接着使该化合物同氨、伯胺或仲胺，特别是同低级烷基胺、二低级烷基胺、芳基低级烷基胺、羟基低级烷基胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或氨基酸反应生成通式II所示的化合物。
10.含一个或多个权利要求1至9所述化合物及通常的载体物质和辅料物质的药剂。
全文摘要
本发明涉及新的含-二硫化物基团的硝酸酯及其制备方法。该化合物可用于治疗心脏循环系统的疾病。
文档编号A61P25/28GK1126466SQ9419260
公开日1996年7月10日 申请日期1994年6月24日 优先权日1993年6月26日
发明者K·桑罗克, M·菲利什, H·波肯斯, J·莱曼, C·米斯 申请人:施瓦茨制药有限公司