与抗血栓形成和血纤维蛋白溶解的治疗剂组合使用的含vWF浓缩物的治疗剂的制作方法

专利名称：与抗血栓形成和血纤维蛋白溶解的治疗剂组合使用的含vWF浓缩物的治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含Von Willebrand氏因子(vWF)的药物作为血抗凝剂的应用，它可单独使用或与血纤维蛋白溶解剂一起使用，用于进行治疗。为了减小病人出血的危险可同时进行给药或继抗凝剂和溶素治疗后给药。治疗的原理可被描述为将所需的抗凝和/或纤维蛋白溶解作用与不需要的出血趋向的副作用分开。
凝血和纤维蛋白解成分失去平衡时，在临床上一方面表现为形成血栓，另一方面表现为出血。两种病理现象都会威胁生命。例如在血栓形成的情况下，如涉及急性心肌梗塞形成，在许多例子中，需要调节溶解和凝血的占优势的一方。例如，通过给予链激酶(SK)或纤维蛋白溶酶原激活剂(t—PA或uPA，适当重组的)来支持纤维蛋白溶解系统，以便溶解已经存在的任何血凝块。凝血系统或者被完全抑制或者被衰减，例如通过肝素或低分子量肝素(LWMH)的方式，或通过凝血酶抑制剂的方式，例如，如合成的抑制剂MCI—9038(Tamaoy等，Thromb.Hoemost.56，1，28—34，1987)或重组的水蛭素(r—Hir)，或者通过Xa因子抑制剂的方式如重组的tick抗凝蛋白(tick anticoagulant Protein)(r—TAP)，或通过血小板拮抗剂如阿斯匹林或直接对抗血小板的7E3抗体。结果使因血栓形成而闭塞的血管打开，而且也预防血栓的形成。不过，在血管损伤时，需要一定的形成血栓的能力，以便防止在这些部位出血。
按照现有技术的描述，试图通过中断治疗或通过给予凝血促进剂(解毒剂)来阻止可能发生在抗凝血剂治疗或与溶解治疗合并的抗凝治疗中的任何威胁生命的出血。此凝血促进剂含有VIII因子(FVIII)或者增加血液中FVIII的内源性浓度的物质如去氨加压素(DDAVP)(Mannucci PM，Ruggeri ZM，Pareti F1，CapitanoA，1977，Lancet，1，869—872，EP036771381，1992；美国专利5204323,1993)，或抗纤维蛋白溶解剂如与去氨加压素混合的抑肽酶，凝血酸、∈—氨基己酸和4—氨基甲基苯甲酸(WO9220361，1992)。其它凝血促进剂特别是由凝血因子组成，某些已经是激活的，商业产品为FEIBA(Immuno AG)，或由凝血酶原浓缩物组成，商业产品为Beriplex(Behring Werke AG)或Autopeex(Baxter INC.)。所有这些解毒剂主要使活性化合物的治疗作用降低，并因此也降低这些化合物产生的副作用。然而，预计上述解毒剂作用包含使先前治疗结果(抗凝血)失去价值的危险，并具有随后形成血栓的严重后果。
在临床实践中，激活部分促凝血酶原激酶的时间(aPTT)用作定量度量抗凝血和纤维蛋白溶解作用，出血时间(BT)用于度量出血趋向性。一种确定出血时间的方法(也是在人类临床实践中非常普遍的)是通过Simplate法来测量皮肤的出血时间(Lethagen S.和Klings，1993，Thrombosis Haemosteasis 70,595—597)。总之，在该意义上，aPTT和BT之间的相关性非常好，作用的增加(测量的aPTT值的增加)也引起随后的副作用的增加，即出血时间延长。
血管损伤后止血过程的机制研究表明在最初的止血阶段，血小板主要通过von Willebrand氏因子(vWF)方式与内皮下的胶原纤维结合。vWF是仅有的能有效地与暴露的胶原蛋白以低的(如在静脉区域)和高的(如在动脉、冠状区或与空斑确定相关的血管狭窄)剪切速率相结合(Ruggeri ZM，Seminars inhematalogy，1994，31，229—239)。随后血小板凝聚，预计包含凝血酶的凝聚的血小板凝缩并收缩，结果在第二个止血阶段产生止血结果(Hemker Hc和Poliwoda H，1993，1—18，Barthels M和Poldowa H，editors Thieme Verlag，stuttgart，，Germany)。
到目前为止，vWF是已知的最大溶解性血浆蛋白。它是一种多体的糖蛋白，具有两个生物特性。介导血小板与局部损伤血管粘合，继而形成血栓，并起运载促凝血因子VIII的作用(Ruggeri ZM.1993 Current Opinion in cell Bialogy，5,898—906)。在内皮下膜存在一定量的vWF，也以游离因子VIH的形式在血小板的a颗粒中贮存。血小板具有两个vWF受体1.在GPIb一Ix—V复合物中的GPIb和2.GP IIb—IIIa(Ruggeri ZM，1994 Seminars inHematology 31，229—239)。通过前一受体的方式，vWF介导血小板在损伤的血管部位上粘合，然后通过GP IIb—IIIa受体的方式进行随后的血小板凝集，尽管这种凝集主要是持续的纤维蛋白与GP IIb—IIIa受体的结合。面对这样的背景，在文献中有关于将结合vWF的抑制剂用作抗凝剂的原理的讨论(Alevriadou BR，Moake JL，Turner NA，Ruggeri ZM，Folie BJ，Phillips MD，Schreiber AB，Hrinda ME，McIntire IV，1993，Blood，81，1263—1276；Gralnick HR，Williams S，Mckeown L，Kramer W，Krutzsch H，Gorecki M，Pinet A，Garfinkel LI，1992，Proc.Natl，Acad.Sci.USA,89,7880—7884)。
现已惊奇地发现，当另外将血浆vWF给予用水蛭素进行抗凝血治疗试验的猪时，不会防碍系统的抗凝血作用(aPTT)，出血副作用(BT)减低到低于出血时间两倍的水平，然后保持恒定。在未输入vWF的对照实验中，BT升高到约为正常出血时间的3倍(图1)。


图1vWF对γ—水蛭素诱导的猪皮肤出血时间的影响，0.3mg/kg×hr—水蛭素(安慰剂组，·)；0.3mg/kg×hr—水蛭素加(3小时后)，66vWF单位/kg，静注浓缩药团，和187vWF单位/kg×h，静脉输入vWF(vWF组，△)因而，通过与抗凝血治疗剂和(合适时)与纤维蛋白溶解治疗剂合并使用的方法，达到了本发明的目的，该方法是通过适当补充含vWF的溶液，使上述的所需作用(由aPTT表示的)和不需要的出血副作用(BT表示的)之间的相关性分开在保留了治疗作用、即排除血栓形成危险的同时，最大限度地减小了由抗凝剂或纤维蛋白溶解剂的作用所引起的副作用。
所以，本发明涉及vWF的应用，用于制备一种在因给予抗血栓形成和/或纤维蛋白溶解剂而产生出血时作为假解毒剂的药剂。另外，本发明涉及药物组合物，它含有抗血栓形成剂和/或纤维蛋白溶解剂作为组分A，并含有vWF或具有vWF活性的片断作为组分B。
所使用的vWF浓缩物例如可为商业产品HaemateHS(Behringwerke AG)，除含vWF外，它可含有FVIII。实施例1在输注水蛭素后和合并输注vWF溶液(HaemateHS等于Haemate P)后的出血时间过程和aPTT过程。
7头阉割后的雄性猪，静脉输注0.3mg重组的水蛭素(r—水蛭素)/kg×h共7小时。输注开始后3小时，3头猪另外静注含vWF的浓缩物药团(66vWF单位/kg)，随后输注187vWF单位/kg×h共2小时(vWF组)。其它4头猪给予相应容积的氯化钠溶液来代替vWF(安慰剂组)。试验期间，用Simplate法测定皮肤的出血时间(Organon—Teknika)，根据Neothromtin法测定血浆的aPTT(Beliringwerke AG)。如图1所示，开始两组的出血时间都升高，而7小时后，安慰剂组升高到正常值的约3倍。在vWF组中，用vWF治疗后出血时间减小，并几乎在7小时后再次达到正常值(在6和7小时时两组的区别是统计学上显著的)。因此，vWF能使因给予凝血酶抑制剂r—水蛭素而增加的出血危险重新正常化。
在相同的试验中，测定r—水蛭素的抗凝血活性指征aPTT。如表1所示，可发现在安慰剂组和vWF组之间无显著性差异；可看到两组的aPTT增加约2倍。
表1

下列抗凝剂可与vWF并用肝素；LMW肝素；合成(重组)凝血酶抑制剂如r—水蛭素，及其衍生物如聚乙二醇水蛭素或Hirulog；合成的低分子量的凝血酶抑制剂如阿加曲班(Argartroban)(MCI 9098，见Tamao y et al.loc.cit)；合成或重组FXa抑制剂如TAP；合成或重组FVII抑制剂如组织因子途径抑制剂(TFPI)；血小板对抗剂如乙酰水杨酸或合成纤维蛋白原受体抑制剂和血小板抗体(例如7E3)；维生素K对抗剂如体法林，苯丙香豆素和醋硝香豆素。
下列纤维蛋白溶解剂非常适合于与上述抗凝剂和vWF并用链激酶；纤维蛋白溶酶原激活剂(rt—PA和uPA)及其衍生物如APSAC。
实施例2
当与水蛭素和阿斯匹林并用时，vWF溶液(Haemata对出血时间的作用。
在本试验中，凝血酶抑制剂水蛭素与血小板抑制剂斯匹林并用，共使用4头猪。首先以20mg/kg的浓度输注阿斯匹林半小时，然后以0.3mg/kg×h的浓度输注(t＝0)水蛭素7小时。
3小时后，2头猪给予vWF溶液(HaemateHS)，具体地静注66vWF单位/kg药团，然后静脉输入187vWF单位/kg×h2小时。其余的猪给予相应量的氯化钠溶液。表2显示，3小时后，出血时间升高到原始值(0值)的约2.5倍。然而，给予vWF溶液6小时后导致出血时间明显减小(降至原始值的1.8倍)，用Nacl处理的猪表2 水蛭素和阿斯匹林的抗凝作用由vWF浓缩物减小的出血时间

*HaemateHS
实施例3因为所用的vWF溶液(HaemateHS)除vWF外，也含有凝血因子VIII(FVIII)，所以可以进行试验来测定是否可以给予含低量FVIII的vWF浓缩物，以用于减小由r—水蛭素引起的出血时间延长。7头猪输注0.3mg r—水蛭素/kg×h7小时。3小时后，3头猪用含低量FVIII的vWF浓缩物处理(静注66vWF单位/kg药团，并静脉输注187vWF单位/kg×h)。4头猪给予相应量氯化钠溶液。表3显示，含低量FVIII的vWF也减小r—水蛭素增加的出血时间。
权利要求
1.vWF或具有vWF活性的片断的应用，用来制备一种试剂，该试剂可矫正因给予抗血栓形成和/或纤维蛋白溶解剂引起的出血。
2.一种药用组合物，它含有组分A抗血栓形成剂和/或纤维蛋白溶解剂和，组分BvWF或有vWF活性的片断。
3.权利要求2的药用组合物，其中各组分以分离的单剂量形式存在。
全文摘要
本发明涉及用作血抗凝剂的含Von Willebrand氏因子(vWF)的药物，它可单独使用或与血纤维蛋白溶解剂一起使用，用于进行治疗。为了减小病人出血的危险，可同时给药或继抗凝剂和溶素治疗后给药。治疗的原则为，在治疗期间，将所需的抗凝和/或纤维蛋白溶解作用与不需要的出血趋向的副作用分开。
文档编号A61K38/55GK1128168SQ9511871
公开日1996年8月7日 申请日期1995年10月18日 优先权日1994年10月20日
发明者M·里尔斯, G·迪克耐特 申请人:柏林魏克股份公司