专利名称：恢复和促进皮肤屏障功能的组合物及其评价方法
技术领域：
本发明涉及恢复和促进皮肤屏障功能的组合物及其评价方法，尤其关于其有效成分的改进。
近年来，由于芳香治疗(aromatherapy)易于使用以及相对较少的副作用，其作为一种治疗方法已经引起了人们的兴趣。具体地说，已经注意到它作为一种有效的方法，用于治疗未查明的临床综合症、自主神经机能失调和其它由于紧张引起的身心失调病症。已知有许多香料可作为减轻各种综合症的芳香治疗试剂。其中有一些香料被认为能够有效地增进皮肤功能。
然而，在很大程度上，由于评价试验的原因，它们的作用是不清楚的。已知只有很少的香料具有明显的特定药理学作用。特别地，它们还没有作为用于恢复或促进皮肤屏障功能非常有效的试剂或药物。
而且，关于香料生理学作用的研究在较经常进行的同时，对于通过吸入香料的气味增进皮肤功能的研究却几乎没有进行，同时也没有评价其有效性的客观方法。因此，很难发现香料可作为用于恢复或促进皮肤屏障功能的有效试剂。
本发明的目的是解决上面提到的现有技术中存在的问题，提供一种恢复和促进皮肤屏障功能的含香料组合物和一种评价其有效性的简单方法。
本发明提供了一种恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，包括(i)基于组合物总重量至少0.01％重量比的至少一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，该试剂选自醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)一种可用于化妆品或药物的载体。
本发明还提供了一种恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，包括(i)基于组合物总重量至少0.01％重量比的至少一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，选自缬草香料、紫罗兰香料和蔷薇香料；和(ii)一种可用于化妆品或药物的载体。
本发明还提供一种用来评价测试香料恢复皮肤屏障功能效果的方法，包括在没有香料的系统中，在试验动物上施加预定量的紧张，以降低动物皮肤的屏障功能，测定皮肤屏障功能降低后的恢复程度，得到的数据作为评价的指标，在应用香料的系统中，测定皮肤屏障功能恢复程度的数据，根据这两个系统中皮肤屏障功能恢复程度数据的差别评价其效果。
从下面对附图的描述中可以更好的理解本发明，其中
图1表示施加由陌生环境引起的紧张对皮肤屏障功能恢复的作用。
图2表示香料(单个化合物)对降低的皮肤屏障功能的恢复结果和对恢复能力的促进结果。
图3表示香料(组合物)对降低的皮肤屏障功能的恢复结果和对恢复能力的促进结果。
图4表示人工芳香紫罗兰香料的气相色谱图。
图5表示当不施加紧张时，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂的效果。
图6表示不施加紧张时，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂对紧张程度的作用。
图7表示当施加紧张时，本发明的皮肤功能恢复和促进试剂的效果。
图8表示当施加紧张时，本发明的皮肤功能恢复和促进试剂对紧张程度的作用。
为了达到上面目的，本发明的发明人进行了认真的研究，结果发现当对试验动物施加一定的紧张时，导致皮肤屏障功能的降低，不吸入香料的对照组动物和吸入香料的实验组动物相比，皮肤屏障功能恢复的能力有显著性差异。同时发现作为恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，有一些特别的香料是非常好的。在此所用的术语“动物”是指除人之外的动物，典型地包括例如，小鼠、大鼠、荷兰猪等。
也就是说，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物重量至少0.01％重量比、优选0.5-100％重量比的醋酸萜品酯。
或者，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物总重量至少0.01％重量比、优选0.5-100％重量比的苯乙醇。
或者，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物总重量至少0.01％重量比、优选0.5-100％重量比的二甲氧基甲基苯。
或者，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物总重量至少0.01％重量比、优选0.5-100％重量比的缬草香料。
或者，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物总重量至少0.01％重量比、优选0.5-100％重量比的芳香紫罗兰香料。
或者，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的组合物含有基于组合物总重量至少0.01％重量比、优选2.5-100％重量比的蔷薇香料。
而且，根据本发明，用于评价香料恢复和促进皮肤屏障功能效果的方法所含的步骤有在没有测试香料的系统中，对试验动物施加预定量的紧张，然后引起皮肤屏障功能的降低，再应用该皮肤屏障功能恢复程度的数据作为指标，然后评价其与应用测试香料的系统中皮肤屏障功能恢复程度的数据的差别。
并且，根据本发明，用于评价香料恢复和促进皮肤屏障功能效果的方法优选地包括步骤(A)对小鼠、大鼠或荷兰猪施加紧张，施加紧张的大小应该能是皮肤屏障功能恢复的延迟程度能显著识别，因此对于受到紧张的动物，引起定量的皮肤屏障功能的降低；步骤(B)在皮肤屏障功能降低的部位，以固定的时间测定透过表皮的水损失(TEWL)；步骤(C)比较不用测试香料的动物(对照)和应用测试香料的动物在步骤(B)中得到的数据，评价其差别作为测试香料恢复皮肤屏障功能的效果。
另外，根据本发明，在香料恢复皮肤屏障功能效果的评价方法中，优选的方法是通过吸入法应用测试香料。
另外，根据本发明，恢复和促进皮肤屏障功能的试剂含有经上述方法评价认为有效的香料作为活性成分。
本发明的实施方案现在将进行详细说明。本发明提供一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂及其评价方法。因此，说明将分为恢复和促进皮肤屏障功能的试剂和它的评价方法两部分。
恢复和促进皮肤屏障功能的试剂本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂含有一种对皮肤屏障功能恢复和促进有效的特别香料，因此通过吸入能刺激味觉感受器的有效量或通过呼吸道吸入体内时，该试剂可以减轻由于皮肤屏障功能引起的不良皮肤状况。作为特定香料，醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯的单个化合物可作为例子。它们可以单独应用或者一起应用，还可以与其它香料联合应用作为多成分香料组合物。
另外，作为多成分香料组合物，缬草、芳香紫罗兰和蔷薇香料可作为例子。在本发明中，以天然组合物的形式或者基于分析结果模拟的人工组合物形式，这些物质具有恢复或促进皮肤屏障功能的作用。
对于本发明的缬草香料，有可能应用通过已知方法如水蒸气蒸馏或溶剂提取从植物根或茎中得到的精油，其中的植物为缬草或与它密切相关的植物宽叶缬草(Valeriana officinalis L.Var latifolia Miq.)(V.Japonilca Makino)，蜘蛛七(valeriana fauriei foram yezoensis)和蜘蛛香(Valeriana wallichii D.C.)等。而且，从缬草和与它密切相关的植物中提取的精油可从市场上买到，供应形式为缬草油和kesso root oil(日本缬草油)。这些物质均可以应用无论它们是产自日本、中国、欧洲或其它地方。
另外，日本未审查专利出版物(公开)号1-254628公开了从天然组合物中真空蒸馏得到的缬草油组份，该组份也可用作本发明的缬草香料另外，通过除去带来不良气味的脂肪酸和其它酸性组份得到改性的缬草油(下面将要说明)，它们也可用作本发明的缬草香料。
可以通过碱处理从缬草油中除去酸性组份包括脂肪酸得到改性的缬草油。通常地，天然缬草油含有至少一种类型往往为多种类型的脂肪酸。具体地说，它包括乙酸和异戊酸。
改性缬草油的生产方法首先是把含有脂肪酸的缬草油溶于有机溶剂优选乙醚中，然后加入碱的水溶液，再进行提取操作以提取和回收含有脂肪酸的酸性成分。对于碱的水溶液，有可能应用平常提取操作中通常所用的碱水溶液，可以是有机碱或无机碱的水溶液，但优选碳酸氢钠水溶液或氢氧化钠水溶液。具体地说，优选用碳酸氢钠水溶液进行提取，然后用氢氧化钠水溶液进行再提取。这样得到的有机溶剂层用无水硫酸镁等物质干燥，然后真空蒸馏除去有机溶剂得到不含脂肪酸的改性缬草油。
根据本发明，改性缬草油对皮肤屏障功能的恢复和促进作用并不因碱处理而受到损害，而且其作用比碱处理前的缬草油还强。因此，根据本方法，有可能更进一步地增强缬草油对皮肤屏障功能的恢复和促进作用。另外，根据该生产方法，可能容易地并且廉价地生产这样一种改性缬草油，还可能提供一种非常有用能恢复和促进皮肤屏障功能的试剂。
另外，对于本发明中的芳香紫罗兰香料，可能应用通过已知方法例如水蒸气蒸馏或溶剂提取得到的精油，原料来源为香堇菜(Viola odorata L.)的花或叶或者该植物花或叶的顶端收集物。并且，可以应用芳香紫罗兰，不管其产自法国、日本或其它地方。另外，本发明中，可能应用人工模拟的芳香紫罗兰香料，该香料基于的成分是对天然来源的芳香紫罗兰精油或其新鲜花或叶顶端收集物进行分析得到的成分。
另外，对于本发明的蔷薇香料，可能应用已知的精油，也就是说，本发明标准的商品级。另外，可能应用通过蒸馏、提取或其它方法从天然蔷薇科植物得到的精油。另外，有可能应用人工模拟的蔷薇香料，该组合物基于的成分是对天然蔷薇植物花中得到的精油进行分析得到的成分。
包括上面特别香料的恢复和促进皮肤屏障功能的试剂可以通过加入载体、稀释剂或其它常用于香料产品的活性成分制成一种产品。它可以制成香料产品例如香水、科隆香水、房间清新剂和化妆品如水剂、膏霜、肥皂、牙膏、气雾剂产品或任意一种其它通用形式和其它通常药物如香料。另外，它还可用于吸入剂。在恢复和促进皮肤屏障功能的试剂中，特别香料的含量应该是通过吸入能对恢复和促进皮肤屏障功能起足够作用的量。该含量可以变化，依据应用形式和药物(香料)而定。通常地，必须含有至少0.01％重量比。如果低于该含量，有时则达不到对皮肤屏障功能的恢复和促进作用。
根据本发明，基于同样的理由，含有这样香料的组合物适合治疗皮肤屏障功能的降低和治疗皮肤病等。另外，应用本发明中促进和恢复皮肤屏障功能的试剂不存在副作用问题。
根据本发明，该恢复和促进皮肤屏障功能的组合物可以含有任意能用于化妆品或药物的载体(例如，醇类如苯甲醇、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF))和任选的常规添加剂如湿润剂、表面活性剂、紫外吸光剂、抗氧化剂、防腐剂、抗真菌剂、着色颜料和体质颜料等。
通过下列方法可以评价本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂的效果。
评价方法本发明中能应用的试验动物是那些除人之外在各种试验中通常所用的试验动物。符合本发明目的的所有动物均可应用，但通常应用的动物有大鼠、荷兰猪和兔等。
施加至这些动物的紧张是指本领域有效方式的紧张，包括约束引起的紧张、拥挤引起的紧张和新环境引起的紧张。施加约束紧张的方法可基于例如Pare，W.P.，Glavin，G.B.，(1986)，Neurosci.Biobehav-Rev.10，p339-370记载的方法。总结该用于大鼠的方法，可以通过把各个动物完全包裹在柔线网中和使它们在定量的一段时间维持固定不动来施加紧张，同时注意不能对皮肤造成损害。
另一方面，对于拥挤引起的紧张，如果所用动物为小鼠，一个笼(17×28cm2)中通常饲养5只小鼠。可以通过增加同一个笼中饲养动物的数目使动物紧张，具体地说，每个笼中饲养10只动物。
另外，对于新环境引起的紧张，可以通过把动物从其平常的环境转移至陌生的环境使动物紧张，例如对小鼠来说，把一个笼(17×28cm2)中与其它四只小鼠一起饲养的小鼠转移到每笼一只小鼠的环境中。
施加紧张的持续时间应该足以导致动物的紧张状态。然而，如果施加的紧张不足，应该注意在有些时候是不能与对照组动物的皮肤屏障的恢复功能明显区别开。
以这种方式承受紧张的动物是在达到紧张状态(即能看出紧张作用的状态)后皮肤屏障功能降低的手段。这种手段可以是任何能有效降低皮肤屏障功能的方法。这些手段的形式并不重要。为了引起这种皮肤屏障功能的降低，方便的做法是通过胶带条除去表皮的角膜层或者用表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS))或有机溶剂如丙酮除去角膜层。至于处理时间，如果所用动物为大鼠，当应用紧张结束后约12小时的时间是优选的，这样能确保试验动物达到足够的紧张状态。
由上面引起皮肤屏障功能降低所在部位的皮肤屏障功能恢复程度经持续检测或经确定量的时间间隔后检测。降低的部位可以是试验动物的任何部位，只要能够进行皮肤屏障功能程度的检测即可，但通常优选耳廓即耳朵突出的外部。
检测方法可以是测定经表皮的水分损失，或经表皮的不显汗(此后称“TEWL”)——通常认为是皮肤屏障功能的一个指标，但还可以应用能作为指标的其它因素。可以通过市场上可买到的设备以通常的应用来检测TEWL。可以提到的典型设备有蒸发计(Evaporimeter)、Tevameter和Micomoisture检测器等。
根据本发明，在没有受到紧张的试验动物中重复上述操作，这样类似地得到的TEWL值和上面受到紧张的试验动物中得到的TEWL值进行比较。注意，例如当用大鼠作试验动物时，受到紧张的试验动物和没有受到紧张的试验动物相比，在皮肤屏障功能降低以前，TEWL和表皮温度没有观测到显著差异。另外，试验动物的TEWL值不能观测到性别差异。
也就是说，试验动物的TEWL值与紧张没有相关。特别地，根据本发明，受到紧张的试验动物与对照组动物相比，TEWL值的恢复程度明显延迟。因此，根据本发明，基于恢复程度延迟的现象，有可能评价皮肤屏障功能的恢复能力。
另外，根据本发明，有可能应用香料并结合上述评价方法，通过评价香料对皮肤屏障功能的恢复程度可以评价香料是如何有助于增强和恢复皮肤屏障功能。把试验香料用于小鼠的方法可以吸入足够的量从而能够在足够时间内起作用，但特别地，如对于由陌生环境引起的紧张来说，香料滴加到佩特里盘上的滤纸上，然后用线网覆盖该佩特里盘，将其置于鼠笼中。在转移至陌生环境前或转移后，使该鼠吸入香料24小时。注意，如果必要，优选加入更多的香料。根据本评价方法，有可能评价某种特定的香料是否对紧张引起的皮肤屏障功能有恢复作用或者是否能增强皮肤屏障功能，还可能评价可有用地改善皮肤状况的香料。
实施例通过下列实施例将进一步阐明本发明，但本发明决不限于下列实施例。下面先说明本发明恢复和促进皮肤屏障功能的试剂的评价方法。
实施例1施加由新环境引起的紧张5只裸鼠在一只笼(17×28cm2)中饲养10天。在第9天早晨，把浸渗有香料的滤纸置于该笼中，并用不锈钢网覆盖。次日早晨，每只小鼠被分开转移至同样大小的新笼子中。以同样方式在新笼子中预先放入相同的香料。
实施例2皮肤屏障的降低和恢复速率转移至新笼子一天后，应用蒸发计EP-1(ServoMed Co.)测定麻醉后小鼠侧腹(或耳廓)的TEWL值(即此时测定的值定义为“A”)。然后，通过胶条剥脱降低皮肤屏障功能。即把粘性胶带条粘附于动物的侧腹(或耳廓)(当粘附于耳朵时面积为1×1cm2，粘至侧腹(或躯干)时面积为2×3cm2)。在不损害表皮的情况下小心地剥脱胶带条(即胶带剥脱)引起皮肤屏障功能的降低。此时再次测量TEWL值(此时测出的值定义为“B”)。3天后，测量TEWL值，将该值定义为“C”。然后，用下式计算屏障恢复的速率屏障恢复速率(％)＝[(B-C)/(B-A)]×100A刚刚在皮肤屏障功能降低的处理(胶带剥脱)以前的TEWL值B刚刚在皮肤屏障功能降低的处理(胶带剥脱)后的TEWL值C皮肤屏障功能降低的处理(胶带剥脱)一段时间后的TEWL值然后，根据上面实施例1和2的方法，检测陌生环境引起的紧张对皮肤屏障功能恢复程度的作用。对每笼继续饲养1只的动物(即对照组动物)、每笼继续饲养5只的动物(对照组)和从每笼饲养5只转移到每笼饲养1只(受到紧张组)的动物进行处理以降低它们的皮肤屏障功能。图1表示处理3小时后的转换的屏障恢复速率。注意，该试验是在没有香料的系统中进行的。
从图1可以看出，受到紧张动物组的皮肤屏障功能恢复程度明显比对照组动物的恢复程度明显慢。
实施例3香料对皮肤屏障功能恢复程度的作用在有测试香料的存在下，把实施例1中的紧张施加至裸鼠后，通过实施例2中皮肤屏障恢复速率来评价香料对皮肤屏障功能恢复和促进所起的作用。
然后，按照上面所述方法测定胶带剥脱3小时后屏障恢复的速率以检查其效果。
注意，在对照组试验中，应用不含香料的系统，没有受到紧张继续每笼饲养5只的正常小鼠和虽然受到紧张但没有吸入香料的未处理小鼠以相同的方式测定屏障恢复速率。
然后，下面再说明经上述评价方法确定有效的的香料作为活性成分的恢复和促进皮肤屏障功能的试剂。
单一化合物(单一化学成分)通过实施例3的评价方法得到的单一化合物的皮肤屏障恢复速率如图2所示。其结果如表1所示。注意，在对照试验中，对茉莉香料的主要成分叶绿醇进行相同的步骤。通过在佩特里盘中的滤纸上包覆200μl的各单一化合物使小鼠吸入的香料量基本一致。
表1香料(单一化合物) 皮肤屏障功能的恢复和促进作用乙酸萜品酯 有苯乙醇 有二甲氧基甲基苯 有叶绿醇 无图2明显表明，与未处理的小鼠相比，用乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯进行处理对皮肤屏障功能的恢复和促进有作用。另外，用茉莉香料主要成分即叶绿醇进行处理对皮肤屏障功能的恢复没有作用。
因此，现在认识到，乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯作为恢复和促进皮肤屏障功能的试剂是有效的。
香料组合物(多种香料化合物)然后，图3表示通过实施例3的评价方法得到基于多成分的组合物的皮肤屏障恢复速率。结果如表2所示。注意，通过在佩特里盘中的滤纸上包覆200μl的各个单种物质使小鼠吸入的香料组合物基本一致。在对照试验中，应用以叶绿醇作为主要成分(14-15％)的茉莉，进行相同的操作。
表2香料(组合物) 皮肤屏障恢复和促进作用天然缬草 有改性缬草 有天然芳香紫罗兰 有人工芳香紫罗兰 有天然蔷薇 有人工蔷薇 有天然茉莉 无上表中，对于缬草香料，应用天然精油和上面说明的改性缬草另外，所用的天然芳香紫罗兰香料是来源于天然芳香紫罗兰花中的精油。所用的人工芳香紫罗兰香料是在对天然芳香紫罗兰精油进行气质联用(GC-MS)分析的基础上，模拟天然芳香紫罗兰精油，组合其所含有的单种化合物得到的组合物。图4是该模拟香料组合物的气相色谱图。表3显示得到的组合物结果。注意，GC-MS的测定条件如下GC-MS分析条件型号G1800A GCD(Hewlett-Packard有限公司制造)柱HP-INNOWAX(60m×0.25mm)(Hewlett-Packard有限公司制造)柱温70→245℃(4℃/分钟的升温速率)载气氦(1.0毫升/分钟)表3化合物名称 GC含量(％)柠檬烯 0.16反-2-己烯醛 0.18乙酸1-己烷基酯 0.23乙酸顺-3-己烯基酯 3.09乙酸反-2-己烯基酯 0.111-己醇 0.28对异丙基苯甲烷 0.16顺-3-己烯醇 0.781-辛烯-3-醇 4.362-乙基己醇0.34里那醇 0.21顺，反-2，6-nonadyl 0.211，4-二甲氧基苯23.01橙花基丙酮0.12二氢-β-紫罗兰酮 0.87α-紫罗兰酮 13.292-苯乙醇 0.67β-紫罗兰酮 22.23顺-茉莉酮 3.73茉莉酮酸甲酯2.09苯甲酸苄酯4.56总量 80.70
另外，所用的天然蔷薇香料是天然的、一般可从市场上买到的蔷薇精油。所用的人工蔷薇香料是含有二甲氧基甲基苯和苯乙醇的香料组合物，其中的二甲基甲苯和苯乙醇被认为对皮肤屏障功能有恢复和促进作用。人工蔷薇香料包括下列组合物。注意，其中的含量是指重量份数。
表4人工蔷薇香料 重量份数二甲氧基甲苯 5苯乙醇200顺-3-己烯醇 1乙酸顺-3-己烯基酯 2苯甲醇 15香茅醇100橙花醇 25香叶醇600醋酸香叶酯 20醋酸香茅酯 4柠檬醛 3丁子香酚5法呢醇 40总量1020从图3中明显看出，与没有吸入香料的未处理小鼠相比，缬草、芳香紫罗兰和蔷薇的香料组合物对皮肤屏障功能的恢复速率较高。另外，对于芳香紫罗兰和蔷薇香料的结果，不管对皮肤屏障功能恢复起作用的香料组合物是天然的或人工的，均对皮肤屏障功能有恢复作用。另外，对于缬草，改性缬草的皮肤屏障功能恢复速率可以达到与正常小鼠同样高，并发现其为非常好的香料。注意，茉莉虽然在芳香治疗中对皮肤疾病的治疗有效，但没有显示皮肤屏障功能的恢复作用。
因此，已经知道，缬草、芳香紫罗兰和蔷薇的香料组合物作为皮肤屏障功能的恢复和促进试剂是非常好的。另外，已经知道，不管香料是天然的还是人工的，正如芳香紫罗兰和蔷薇香料所示，都是有效的。另一方面，对于茉莉，已经知道，虽然其在芳香治疗中显示对皮肤病的治疗有效，但并没有显示对皮肤屏障功能的恢复有作用。
其后，本发明的发明人还研究了这些恢复和促进度肤屏障功能的试剂对人的作用。分三种情况进行了该研究不加入其它香料的正常状态下、加入另外一种香料的正常状态下和加入另外一种香料并且在皮肤屏障恢复速率降低的情况下。
没有加入其它香料的正常状态(不施加紧张)的情况测试对象为6例男性(非吸烟者)。测定时，将测试对象分成“香料组”和“无香料组”，每组3人。当第一次测定所有样品后，将“香料组”和“无香料组”测试对象进行交换，再进行同样的测定。香料的应用方法是把含有80μl下列样品1的溶液的棉条粘在鼻下方。对于“无皮肤屏障功能恢复和促进试剂”的情况，仅仅粘上棉条即可。
样品1二甲氧基甲基苯(DMMB)2.0重量份乙醇(二甲氧基马钱子碱改性的95％乙醇)98.0重量份总量100.0测定步骤“香料”组的测定步骤从香料的应用开始，在22℃温度和50％湿度的环境下1小时后，通过胶带剥脱破坏皮肤屏障，根据实施例2在1.5小时后和3小时后测定皮肤屏障恢复速率。持续应用香料并保持上述环境直至最后。
“无香料组”的测定步骤是按照测定“香料组”的测定步骤在不应用香料的情况下测定皮肤屏障恢复速率。
结果如下表所示。
表5组名 0小时后1.5小时后 3小时后平均值 标准偏差平均值 标准偏差(n＝6)无香料组 0％ 50.8％ 8.00％ 61.3％ 11.09％香料组 0％ 63.1％ 8.63％ 74.5％ 8.78％
从上表结果可以看出，皮肤屏障破坏1.5小时和3小时后，DMMB香料组的皮肤屏障恢复速率均较高。因此，很明显DMMB对皮肤屏障功能有恢复和促进作用。
加入其它香料的正常状况(不施加紧张)测试对象为10例健康女性，年龄20-22岁(非吸烟者，月经周期正常)，测试时，把她们分成“香料组”和“非香料组”两组，每组5人。在第一次测定整个样品后，“香料组”和“非香料组”测试对象相互交换，然后进行相同的测定。香料的使用方法是把含有80μl下列样品2的溶液的棉条粘在鼻下方。对于不用香料的情况，仅仅粘上棉条即可。
样品2香茅醇 5.0重量份里那醇 4.0乙酸里那酯 4.0二甲氧苯甲苯2.0乙酸香叶酯 1.0茉莉酮酸二羟基甲基酯35.0花香剂香料 49.0总计100.0测定步骤“香料”组的测定步骤从香料的应用开始，在22℃温度和50％湿度的环境下1小时后，通过胶带剥脱破坏皮肤屏障，根据实施例2在1.5小时后和3小时后测定皮肤屏障恢复速率。持续应用香料并保持上述环境直至最后。
“无香料组”的测定步骤是按照测定“香料组”的测定步骤在不应用香料的情况下测定皮肤屏障恢复速率。
结果如表6和图5所示。
表6组名 0小时后1.5小时后 3小时后平均值 标准偏差平均值 标准偏差(n＝10)无香料组0％ 58.1％ 14.6％ 67.4％ 14.7％香料组 0％ 63.1％ 10.9％ 78.3％ 11.2％从表6和图5可以看出，与“非香料组”相比，提供含有DMMB的香料组合物的“香料组”显示增加的皮肤屏障功能恢复速率。
然后，通过自我感觉的紧张程度(一般活动对照表(General activitycheck list))研究含有DMMB的香料组合物对紧张程度的作用。
结果如图6所示。从图6可以看出，与“非香料组”相比，按照分数，“香料组”的紧张一点也不减少。因此，恢复和促进皮肤屏障功能的试剂对自我感觉的紧张没有影响。
皮肤屏障功能降低的情况(施加紧张)测试对象为8例20-22岁的健康女性(非吸烟者，月经周期正常)。测试时分成(A)对照组、(B)紧张组和(C)香料+紧张组，如表7所示。当整个样品测定一次后，各组测试对象相互交换，最后测试对象进行所有(A)、(B)和(C)的测定。
表7组名 紧张 香料(A)对照组 无无(B)紧张组 有无(C)香料+紧张组 有有(样品22％的DMMB)与上面“加入其它香料的正常状况”相同的方式应用香料。注意所有测试在22℃温度和50％湿度下进行。
测定步骤(A)组的测定步骤是基于上述“加入其它香料的正常状况”的“无香料组”。
(B)组的测定步骤是基于上述“加入其它香料的正常状况”的“无香料组”，但从胶带剥脱引起皮肤屏障破坏1.5小时后的皮肤屏障功能恢复速率的测定之前1小时开始，进行1小时Stroop试验以施加紧张，然后测定皮肤屏障的恢复速率。
(C)组的测定步骤是基于上述“加入其它香料的正常状况”的“无香料组”，但从胶带剥脱引起皮肤屏障破坏1.5小时后的皮肤屏障功能恢复速率的测定之前1小时开始，进行1小时Stroop试验以施加紧张，然后测定皮肤屏障的恢复速率。
结果如表8和图7所示。
表8组名 0小时后 1.5小时后 3小时后平均值 标准偏差 平均值 标准偏差(n＝8)(n＝8)(A)对照组 0％ 73.6％ 8.89％ 81.6％8.80％(B)紧张组 0％ 60.2％ 17.05％ 70.9％11.55％(C)香料+紧张组 0％ 678.2％ 15.95％ 88.5％14.28％从表8和图7可以看出，与“(B)紧张组”相比，受到紧张并提供含有DMMB的香料组合物“(C)香料+紧张组”显示增加的皮肤屏障恢复速率。另外，即使与不受到紧张的“(A)对照组”相比，“(C)香料+紧张组”也显示较高的皮肤屏障恢复速率。因此，可以理解，本发明中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂是非常好的。
然后，通过自我感觉紧张(subjective stress)(一般活动对照表)的程度研究含有DMMB的香料组合物对紧张程度的作用。
结果如图8所示，从图8可以看出，与“(B)紧张组”相比，按照分数，“(C)香料+紧张组”没有显示紧张程度的降低。因此，可以看出，恢复和促进皮肤屏障功能的试剂对自我感觉的紧张基本上不起作用。
如上所述，本发明的恢复和促进皮肤屏障功能的试剂对皮肤屏障功能的恢复和促进有非常好的作用，这是因为它含有特别香料的结果。
另外，根据本发明的评价方法，提供一种客观的和简单的评价方法用于评价香料对皮肤屏障的作用。该评价方法可以用于改善增进皮肤状况的香料。
另外，对于经本评价方法验证有效的香料，可以作为有效的恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，并能治疗由皮肤屏障功能降低引起的皮肤疾病。
权利要求
1.一种恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，包括(i)基于组合物总重量至少0.01％重量的、至少一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，它选自乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)可用于化妆品上或药品的载体。
2.如权利要求1所述的恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，其中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂的含量为0.5-100％重量比。
3.一种恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，包括(i)基于组合物总重量至少0.01％重量的、至少一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，它选自缬草香料、紫罗兰香料和蔷薇香料；和(ii)可用于化妆品或药品的载体。
4.如权利要求3所述的恢复和促进皮肤屏障功能的组合物，其中恢复和促进皮肤屏障功能的试剂的含量为0.5-100％重量比。
5.一种评价测试香料恢复皮肤屏障功能的效果的方法，包括在一个不应用香料的系统中，对试验动物施加预定量的紧张，以降低该动物的皮肤屏障功能，测定皮肤屏障功能降低后的恢复程度，得到的数据作为评价的指标，和在一个应用香料的系统中，测定皮肤屏障功能的恢复程度的数据，根据这两个系统中皮肤屏障功能恢复程度数据的差别评价效果。
6.如权利要求5所述的方法，其中进行评价效果的步骤是(A)对小鼠、大鼠或荷兰猪施加紧张，紧张的程度应该可以明显识别皮肤屏障功能恢复的延迟，从而使受到紧张的动物产生预定量的皮肤屏障功能降低；(B)以恒定的时间在屏障功能降低的部位测定经表皮的水分损失(TEWL)；(C)比较不用测试香料的对照动物组和应用测试香料的动物组在步骤(B)中得到的数据；和(D)评价其差别，作为测试香料对皮扶屏障功能恢复能力的效果。
7.如权利要求6所述的方法，其中香料的应用方法是吸入法。
8.一种恢复和促进皮肤屏障功能的试剂，含有权利要求5所述方法评价的香料作为活性成分。
全文摘要
皮肤屏障恢复和促进的组合物,含有有效的香料作为活性成分,其中香料的效果评价方法是:在一个不应用香料的系统中,对试验动物施加预定量的紧张,从而使该动物的皮肤屏障功能降低,应用皮肤屏障功能恢复程度的数据作为指标;再在一个应用香料的系统中,测定皮肤屏障功能恢复的数据,通过上述两个数据的差别评价该香料的效果。
文档编号A61K8/33GK1255367SQ9912241
公开日2000年6月7日 申请日期1999年9月24日 优先权日1998年9月25日
发明者傅田光洋, 土屋徹, 谷田正弘, 庄司健 申请人:株式会社资生堂