miR-127抑制剂在制抗炎和肺损伤保护药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属生物医学类技术领域，涉及miR-127抑制剂在制备抗炎和肺损伤保护药 物的应用。
【背景技术】
[0002] 急性肺损伤以肺间质中大量炎症因子的释放，炎症细胞的聚集，纤维素沉积和肺 水肿为病理生理特征。失调的炎症反应引起组织的严重损伤和肺功能的持续恶化。现在科 学界对于急性肺损伤及其并发症的起因还未有深入研宄，也没有开发出有效的治疗方法。 因此，急性肺损伤的死亡率至今高达40%。
[0003] microRNAs (miRNAs,小RNA)是一类长度在18-25个核甘酸的单链小RNA分 子，它主要通过与相关蛋白质形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC)，抑制其靶基因的翻译或者促进靶基因 mRNA的降解，以实现对目标基因的 转录后调控。这类小RNA分子的表达具有空间和时间上的特异性，对于细胞的增殖，凋亡， 分化以及器官的形成具有重要的调控意义。目前，miRNA的研宄发展十分迅速，随着研宄手 段和方法的不断进步，已有成百上千种miRNA被发现（Murray PJ, Wynn TA. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nat Rev Immunol 2011;11:723-737; Wynn TA, Chawla A，Pollard JW. Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature 2013 ；496:445-455 ；Sindrilaru A，Peters T，Wieschalka S et al. An unrestrained proinflammatory Ml macrophage population induced by iron impairs wound healing in humans and mice. J Clin Invest 2011 ;121:985-997)〇 miR-127 是 一具有重叠基因结构的非编码小RNA。研究显示，miR-127在肺部发育、胚胎形成等方 面具有一定的调控作用（Martinez F0, Helming L，Gordon S. Alternative activation of macrophages:an immunologic functional perspective.Annu Rev Immunol 2009 ； 27:451-483)，抑制 miR-127 的表达能促进肝癌发生（Gautier EL，Shay T，Miller J et al.Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages. Nat Immunol 2012 ; 13:1118-1128)，并与弥漫性大B细胞淋巴瘤发生密切相关（Foster SL，Hargreaves DC, Medzhitov R. Gene-specific control of inflammation by TLR-induced chromatin modifications. Nature 2007 ；447:972-978)〇
[0004] 固有免疫是物种进化和个体发育过程中形成的一系列防御体系，它作用无针对 性，与生倶来，因此又被称为非特异性免疫应答。天然免疫应答是由能够识别病原相关分 子模式（Pathogen-associated molecular Patterns，PAMPs)的受体所介导的，这些受体 统称为模式识别受体（Pattern recognition receptors，PRRsh主要表达于树突状细胞 (dendritic cells，DC)和巨细胞表面的 Toll 样受体（toll-like receptors，TLRs)正 是这一类重要的PRRs。此类受体最早是从果蝇体内分离得到的，主要是与果蝇胚胎背、腹侧 的发育和非特异性免疫反应有关（Ivashkiv LB. Epigenetic regulation of macrophage polarization and function. Trends Immunol 2013 ;34:216-223)。所有的 TLRs 均属于 I型跨膜蛋白，胞外区由18-31个氨基酸组成的富含亮氨酸的重复序列LRR(leucine rich repeats)组成，胞内区约有200个氨基酸，与白介素 -I (interleukin-1, IL-1)受体胞内区 相似，称为TIR(Toll/IL-l rec印tor)区。它们可直接识别某些病原体或其产物所共有的 PAMPs，包括细菌细胞壁脂质组分如脂多糖、脂肽，病原微生物蛋白组分如鞭毛蛋白，核酸如 单链或双链RNA (核糖核苷酸）以及非甲基化CpG (胞嘧啶磷酸鸟苷）DNA (脱氧核糖核苷 酸）基序等。然后，激活下游髓样分化因子（myeloid differentiation factor88，MyD88) 和 Toll 样受体相关的干扰素活化子（Toll/IL-IR homology domain-containing adaptor inducing interferon_|3，TRIF)依赖信号通路，进而激活丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase，MAPK)和核转录因子 κ B抑制蛋白（I κ B, inhibitor of NF-κ B)等信号，最终激活免疫细胞并产生炎症因子和I型干扰素，成为机体免疫 系统中抵御病原体入侵的首道屏障（Bartel DP.MicroRNAs:target recognition and regulatory functions. Cell2009 ； 136:215-233) 〇
[0005] 目前大量的研宄已经显示，miRNA在免疫反应中发挥极其重要的作用。miRNA不 仅参与了免疫细胞的发育和分化，而且还对免疫反应的起着调控作用。例如miR-181a 在造血干细胞的异位表达可增加 B淋巴细胞的生成，减少T淋巴细胞的生成，miR-181a 调节着 T、B 淋巴细胞的分化（O'Connell RM, Rao DS, Chaudhuri AA, Baltimore D. Physiological and pathological roles for microRNAs in the immune system. Nat Rev Immunol 2010 ;10:111-122)。脂多糖（lipopolysaccharide, LPS)可诱导上 调人类单核细胞中miR-146的表达，而表达升高的miR-146可通过其靶基因白介素 -I 受体相关激酶 l(interleukin_l receptor-associated kinase, IRAK-1)和肿瘤坏死 因子受体相关因子 6(TNF receptor-associated factor 6, TRAF6)负调节 TLR4 诱导 的炎症反应(Lodish HF, Zhou B, Liu G, Chen CZ. Micromanagement of the immune system by microRNAs. Nat Rev Immunol 2008 ;8:120-130)。miR-147 与 miR-146 相似， 可诱导表达于小鼠的巨噬细胞中，对TLRs诱导的炎症反应起着负调节作用（Chaudhuri AA, So AY, Sinha N et al. MicroRNA-125b potentiates macrophage activation. J Immunol2011 ;187:5062-5068)。miR-155作为一个重要的诱导性miRNA，能够作用于其靶 基因 SHIPl (SH2-containing phosphatidylinositol 3, 4, 5-triphosphate5-phosphatase 1，SH2结构域的I型肌醇5磷酸酶），从而抑制LPS诱导的MPK信号通路的活化（0' Connell RM, Taganov KD, Boldin MP, Cheng G, Baltimore D. MicroRNA-155 is induced during the macrophage inflammatory response.Proc Natl Acad Sci USA 2007;104:1604-1609)。 虽然目前已经发现不少miRNA与免疫反应相关，但是miRNA对免疫反应的调节机制的研宄 很多并不明确，也不够完善，有关miR-127在炎症反应中的调控作用更是未见报道。在本专 利中我们首次发现了 miR-127参与调控LPS诱导的炎症应答，揭示了 miR-127对TLR介导 的天然免疫应答的调控功能及其作用机制，证明了抑制miR-127在抗炎和抑制肺损伤中的 作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供miR-127抑制剂在制备抗炎和肺损伤 保护药物的应用。
[0007] 所述的miR-127的核苷酸序列如下：
[0008] CCAGCCTGCTGAAGCTCAGAGGGCTCTGATTCAGAAAGATCATCGGATCCGTCTGAGCTTGGCTGGTC GG，如 SEQ ID NO. 1 所示。
[0009] 作为优选，所述的miR-127抑制剂为anti-miR-127,可通过购买取得。
[0010] 抑制miR-127的anti-miR-127的有效用量为2 mg/kg，药物配成溶剂，以气道灌注 方式给药。
[0011] miR-127在不同TLR配体的刺激下呈现出不同的时间依赖性，但都在16个小 时表达最高；miR-127随LPS刺激表达上调主要是受到NF-κ B(核因子κ B，Nuclear Factor- κ B)的调控，同时，miR-127能够增强由LPS诱导的NF- κ B和JNK (c-Jun氨基末 端激酶，c-Jun N-terminal kinase)信号通路的活化。在巨细胞中过表达miR-127后， IL_6(白介素 6, interleukin-6)、TNF-α (肿瘤坏死因子 a，tumor necrosis factora)、 IL-I β (白介素 I β，interleukin-l β )等Ml型炎症因子表达显著上调，IL_10(白介素 10, interleukin-10)等M2型炎症因子表达显著下调。通过小鼠气道灌注LPS建立小鼠急 性肺损伤模型，通过对炎症因子表达、组织病理学切片等多项指标检测，证明符合小鼠急 性肺损伤表现，造模成功。我们发现通过气道灌注anti-miR-127来抑制miR-127可以显 著减少促炎因子的产生，减弱气道的炎症反应，减少炎症细胞的浸润。除此之外，我们发现 miR-127对Bcl6(B细胞淋巴瘤6，B-cell lymphoma 6 protein)具有革巴向作用，通过调节 Bcl6/Duspl (双特异性磷酸酶 l，Dual s