冬青素a在制备抗肿瘤药物中的新应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，尤其涉及冬青素 A在制备多种抗恶性肿瘤药物中的新 用途。
【背景技术】
[0002] 山绿茶（llexhainanensis Merr)是提取自冬青科冬青属植物海南冬青的叶 (Johji Yamahara 等· Photochemistry, 1987, 26 (7) : 2023-2027)。已有报道作为山绿茶 的主要有效成分冬青素 A具有很强的调血脂作用（Liu Chang等.Organic&biomolecular chemistry, 2013, 11:4993-9)。在先的中国专利申请（申请号201410146662X)公开了冬青 素 A在制备抗肿瘤药物中的用途；但仅证明了在制备抗皮肤癌、肺癌及胃癌药物中的应用， 但是否有抑制其他肿瘤的活性，却有待研宄。本发明人系统地研宄了冬青素 A对多种实体 瘤以及离体培养的人源肿瘤细胞的抑制作用，并首次发现冬青素 A特别对肝癌Hepge2荷瘤 小鼠实体瘤具有很强的抑制作用。
【发明内容】
[0003] 本发明目的是提供冬青素 A的新用途。
[0004] 本发明提供了化合物冬青素 A在制备肝癌、乳腺癌、肠癌、前列腺癌、食道癌、子宫 癌等恶性肿瘤药物中的新应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
[0006] 本发明公开了冬青素 A在制备体内外抑制肝癌生长药物中的应用。所述体内外抑 制肝癌生长是指体内抑制肝癌实体瘤增长或体外抑制肝癌细胞增殖。
[0007] 本发明公开了冬青素 A在制备体外抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。所述体外抑 制多种肿瘤细胞增殖是指对食管癌，结肠癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，鼻咽癌、淋巴癌、肾 癌、胰腺癌、膀胱癌或卵巢癌的癌细胞的增殖有抑制作用。
[0008] 通过肿瘤细胞的离体培养实验，检测冬青素 A抗多种肿瘤活性，再通过整体动物 实验验证其抗实体瘤活性。体外细胞实验筛选了冬青素 A对肝癌细胞SMMC-7721，HepG2， Hep3B,乳腺癌MDAHVIB-231，结肠癌HT-29、HCT-116,前列腺癌PC-3,宫颈癌Hela，食管癌 TE-1，鼻咽癌CNE-1、淋巴癌A20、肾癌A498、膜腺癌SW1990、膀脫癌BIU-87、卵巢癌SK0V-3 等多种肿瘤细胞的抑制作用。整体荷瘤实验表明冬青素 A对肝癌H印G2荷瘤小鼠实体瘤生 长具有明显抑制作用。
【附图说明】
[0009] 图1是冬青素 A对肝癌、乳腺癌、肠癌、前列腺癌、宫颈癌等肿瘤细胞的半数致死量 IC50作用。
[0010] 图2是冬青素 A对肝癌Hepge2荷瘤小鼠体重影响。
[0011] 图3是冬青素 A对肝癌H印ge2荷瘤小鼠实体瘤的抑制作用。图中：Iex A代表冬 青素 A，与空白对照组比较，#p < (λ 05, ##p < (λ 01，·ρ < (λ 001。
【具体实施方式】
[0012] 具体实施例如下：
[0013] 实施例1冬青素 A对体外培养的多种肿瘤细胞的抑制作用
[0014] 实验方法（ΜΤΤ法）：肿瘤细胞株（包括肝癌细胞SMMC-7721，H印G2, H印3Β，乳腺 癌MDAHVIB-231，结肠癌HT-29、HCT-116,前列腺癌PC-3,宫颈癌Hela，食管癌ΤΕ -1，鼻咽癌 CNE-1、淋巴癌Α20、肾癌Α498、胰腺癌SW1990、膀胱癌BIU-87、卵巢癌SKOV-3)按照常规方 法培养传代，收集生长在对数生长期的细胞，经〇. 01 %胰酶消化液消化，计数，每孔细胞液 体积为100 μ 1接种在96孔板中，5% 0)2培养箱内37°C培养12h。提取自山绿茶（购自广 西，经王强教授鉴定为冬青科植物Ilex hainanensisMerr的干燥叶，标本存放于中国药科 大学中药分析教研室，标本号为2008-1，2008-2)的活性成分化合物冬青素 A设五个浓度梯 度，每一浓度设六个复孔，于5% 0)2培养箱内37°C分别培养24,48, 72h，加入10 μ 1的5mg/ ml MTT。37°C孵育4h后，弃上清，加入100ml DMSO溶解，酶标仪测吸光度值，公式拟合得 IC50值。如图1，实验结果表明，冬青素 A对肝癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、宫颈癌、食管 癌、鼻咽癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌等均有一定的抑制作用，并且72h作用更 为明显。
[0015] 实施例2冬青素 A对肝癌H印ge2荷瘤小鼠实体瘤生长的抑制作用。
[0016] 药物溶解：适量0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na)将冬青素 A溶解，稀释至所 需浓度供实验用。
[0017] 采用雄性SPF级C57BL/6J小鼠，体重20±2g，适应性喂养后，随机分组。
[0018] 肿瘤细胞接种：取对数生长期H印ge2肝癌细胞，制备细胞悬液（6 X IO7个/ml)，植 入C57BL/6J小鼠左前肢腋部皮下（0. 2ml/只），接种后每天观察小鼠精神状态、摄食及排便 情况。
[0019] 分组及给药：皮下移植瘤达到5mm3左右，挑选肿瘤大小一致的小鼠，称重并随机 分组，设：空白对照组，顺钼阳性对照组、冬青素 A 80mg/kg、40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg4个 剂量组，每组10只。
[0020] 化合物冬青素 A各剂量组每天分别按80mg/kg，40mg/kg，20mg/kg、10mg/kg灌胃 (ig)给药，空白对照组ig 0. 5% CMC-Na(0. lml/10g)，阳性对照药组腹腔注射顺铂4mg/kg， 正常摄食、饮水，连续10天。停药次日处死小鼠，分离瘤块称重，计算抑瘤率。
[0021] 结果采用SPSS软件进行统计，实验数据以（平均数土标准差）表示，P <0.05具 有统计学意义。
[0022]
【主权项】
1. 冬青素 A在制备体内外抑制肝癌生长药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的的应用，其特征在于所述体内外抑制肝癌生长是指体内抑制 肝癌实体瘤增长或体外抑制肝癌细胞增殖。
3. 冬青素 A在制备体外抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。
4. 根据权利要求3所述的的应用，其特征在于所述体外抑制多种肿瘤细胞增殖是指对 食管癌，结肠癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，鼻咽癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌或卵巢癌 的癌细胞的增殖有抑制作用。
【专利摘要】本发明公开了一种五环三萜化合物冬青素A抗肝癌等实体瘤新应用。本发明可有效抑制体内、外肝癌活性。本发明还对乳腺癌、肠癌、前列腺癌、宫颈癌、食道癌、鼻咽癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫癌等具有很强的杀伤作用。
【IPC分类】A61P35-00, A61K31-56
【公开号】CN104606201
【申请号】CN201510074138
【发明人】孙云, 王娟, 刘畅
【申请人】扬州大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月11日