一种海星酶解提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种化妆品添加剂及其制备方法与应用，具体涉及一种海星酶解提取 物及其制备方法与在化妆品中的应用。
【背景技术】
[0002] 衰老是器官功能、机体组织随着年龄的增长而发生的退行性变化，是机体各种生 化反应的综合表现，是环境污染、精神紧张、遗传等体内外诸多因素共同作用的结果。皮肤 是人体的最大器官，暴露于体外，担负着感觉、分泌、排泄、体温调节、保护和免疫等诸多方 面的作用。在机体衰老的过程中，皮肤的衰老最为明显。随着年龄的增长，皮肤会发生退行 性变化，随之功能会逐渐减弱或丧失，将导致皮肤出现变薄、含水量减少、弹性消退、起皱、 色斑等现象。
[0003] 皮肤衰老的主要原因是真皮结构的改变。衰老真皮层厚度变薄，密度降低。超声 波或直接测量结果都显示20岁以后皮肤厚度呈线性减少。女性的皮肤比男性的皮肤薄，可 能是女性比男性皮肤较早衰老的原因。20岁以后真皮层中成纤维细胞数量逐渐减少，胶原 蛋白的总含量逐年减少1%，胶原纤维变粗，并出现异常交链；同时，胶原纤维密度增大，胶 原酶分解困难，胶原的稳定性增加。一般婴儿及青年人皮肤I型胶原含量约占70%，而衰老 皮肤中I型胶原不仅基因表达量降低，而且合成也会相应的减少。随着胶原蛋白的不断降 解真皮层会变得越来越薄，从而引起皱纹、松弛、色斑、下垂等一系列皮肤问题。
[0004] 现有技术中，针对皮肤皱纹形成原理和过程，市场上常用的防衰老抗皱活性成分 主要包括：影响组织细胞生长代谢的成分，如细胞生长因子、动植物提取物、果酸类物质、羊 胎素等；促进皮肤保湿与修复皮肤屏障功能的活性成分，如神经酰胺、透明质酸、吡咯烷酮 羧酸钠等；抗氧化损伤的成分，如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶、维生素E和维生素 C、辅酶Q10等。目前尚未见到海星酶解提取物具有防衰老抗皱等功能的报道。
[0005] 海星（Asteroidea)是棘皮动物中结构生理最有代表性的一类。体扁平，多为五辐 射对称，体盘和腕分界不明显。生活时口面向下，反口面向上。腕腹侧具步带沟，沟内伸出 管足。内骨骼的骨板以结缔组织相连，柔韧可曲。若把海星撕成几块抛入海中，每一碎块会 很快重新长出失去的部分，从而长成几个完整的新海星来。例如，沙海星保留一厘米长的腕 就能生长出一个完整的新海星，而有的海星本领更大，只要有一截残臂就可以长出一个完 整的新海星。海星的腕、体盘受损或自切后，都能够自然再生。海星的任何一个部位都可以 重新生成一个新的海星。
[0006] 因此从海星中分离提取具有促进表皮细胞、成纤维细胞生长的物质，研宄其对胶 原蛋白分泌的影响就有可能得到一种具有抗皱作用，延缓皮肤衰老的组分。
【发明内容】
[0007] 针对上述现有技术，本发明提供了一种海星酶解提取物及其制备方法与在制备祛 皱修复化妆品中的应用。
[0008] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0009] -种海星酶解提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0010] (1)取新鲜海星洗净后，剪碎后弃去水分，并称重；向剪碎的海星中加入蒸馏水， 匀浆，得到海星匀浆液。
[0011] ⑵将步骤⑴中得到的海星匀浆液恒温水浴，并加入磷酸缓冲液和复合酶进行 酶解，持续搅拌，并保持pH在6. 8-7. 2之间。
[0012] (3)酶解结束后，加入乙醇溶液，室温静置后，室温离心，取上清液，然后将上清液 通过中空纤维膜组件，收集透过液。
[0013] (4)取步骤（3)中的透过液，浓缩干燥即得海星酶解提取物。
[0014]所述步骤（1)中，蒸馏水的质量为海星质量2-4倍。
[0015] 所述步骤⑴中，采用分散机进行匀浆，转速为10000-22000rpm，时间为5-10min。
[0016] 所述步骤（2)中，恒温水浴的温度为40-60°C，磷酸缓冲液的pH为7.0,摩尔浓度 为0. lmol/L，加入量是海星匀浆液体积的2-4倍。
[0017] 所述步骤（2)中，复合酶的加入质量为海星体重质量的0. 5-2%，每克复合酶的酶 活力为30万U。所述复合酶是由碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶组成的混合物，其中， 所述碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的活力单位比为3:3:4。
[0018] 所述步骤（2)中，酶解时间为10~12h。
[0019] 所述步骤（3)中，乙醇溶液中乙醇的质量分数为95%，加入量为步骤（3)中酶解液 体积的3倍。
[0020] 所述步骤（3)中，室温静置的时间为6-12h。
[0021] 所述步骤（3)中，室温离心的转速为5000rpm，时间为lOmin。
[0022] 所述步骤（3)中，中空纤维膜组件的截留分子量为6000道尔顿。
[0023] 所述步骤（4)中，干燥采用冷冻干燥或者喷雾干燥。
[0024] 通过所述海星酶解提取物的制备方法制备得到海星酶解提取物。
[0025] 所述海星酶解提取物在促进成纤维细胞增殖和分泌胶原蛋白的应用，具体应用形 式是，所述海星酶解提取物在制备祛皱修复化妆品中的应用。
[0026] 海星酶解提取物具有使皮肤明显细嫩、弹性明显增加、皱纹明显变浅等作用，可添 加到护肤水、精华、乳液或者面霜中，制成祛皱修复化妆品，实际应用时，化妆品添加剂（海 星酶解提取物）的质量占祛皱修复化妆品总质量的〇. 1~2%。
[0027] 本发明的有益效果是：
[0028](1)本发明中海星酶解提取物的制备方法简单、易操作，制备过程中安全、环保。
[0029] (2)通过本发明制备方法得到的海星酶解提取物具有活性高、生物相容性好、安全 无副作用等优点。
[0030] (3)本发明提出海星酶解提取物在祛皱修复化妆品中的应用，具有促进成纤维细 胞增殖、促进分泌胶原蛋白、使皮肤明显细嫩、弹性明显增加、皱纹明显变浅等作用，使用后 具有明显的祛皱修复效果，可添加到护肤水、精华、乳液或者面霜中，制成祛皱修复化妆品。
【附图说明】
[0031] 图1 :海星酶解提取物对NIH/3T3细胞增值率的影响。
[0032] 图2:海星酶解提取物对NIH/3T3细胞胶原蛋白分泌的影响。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明。
[0034] 实施例1:海星酶解提取物的提取
[0035] 取新鲜海星lkg用清水洗净后，剪碎后尽量弃去水分，并称重。向剪碎的海星中加 入海星质量2倍的蒸馏水，使用分散机匀浆（22000rpm) lOmin，得到海星匀浆液。
[0036] 将上述匀浆液放置于50°C恒温水浴中，并加入匀浆液2倍体积的pH为7. 0的 0. lmol/L的磷酸缓冲液以及海星体壁质量1 %的复合酶，每克复合酶的酶活力为30万 U (该复合酶是碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3:3:4的混合物），酶解 l〇h，持续搅拌，并保持pH在6. 8-7. 2之间。
[0037] 酶解结束后，加入酶解液三倍体积的乙醇溶液（乙醇的质量分数为95 % )，室温静 置6h，室温离心（5000rpm，10min)，取上清。然后在恒流泵的作用下将上清液通过截留分子 量为6000道尔顿的中空纤维膜组件，收集透过液。
[0038] 取上述透过液用真空旋转蒸发仪浓缩后，喷雾干燥即得海星酶解提取物50g。
[0039] 实施例2 :海星酶解提取物的提取
[0040] 取新鲜海星5kg用清水洗净后，剪碎后尽量弃去水分，并称重。向剪碎的海星中加 入海星质量3倍的蒸馏水，使用分散机匀浆（lOOOOrpm) 15min，得到海星匀浆液。
[0041] 将上述匀浆液放置于50°C恒温水浴中，并加入匀浆液3倍体积的pH为7. 0的 0. lmol/L的磷酸缓冲液以及海星体壁质量1 %的复合酶，每克复合酶的酶活力为30万 U (该复合酶是碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3:3:4的混合物），酶解 12h，持续搅拌，并保持pH在6. 8-7. 2之间。
[0042] 酶解结束后，加入酶解液三倍体积的乙醇溶液（乙醇的质量分数为95 % )，室温静 置8h，室温离心（5000rpm，10min)，取上清。然后在恒流泵的作用下将上清液通过截留分子 量为6000道尔顿的中空纤维膜组件，收集透过液。
[0043] 取上述透过液用真空旋转蒸发仪浓缩后，喷雾干燥即得海星酶解提取