一种蚯蚓提取物的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种蚯蚓提取物.。
【背景技术】
[0002]虫丘蝴(Earthworm)属环节动物门(Annelida)寡毛刚(Oligochaeta)无脊椎动物，药名地龙，在中药领域已经有四千多年的利用史，具有清热息风、活血通络、消肿止痛的功效。长期使用证明蚯蚓提取物对人体皮肤烧烫伤的部位能够起到散热、止痛、消肿、解毒、生肌的作用，治疗烫伤迅速而不留疤痕。随着科学技术的发展，国内外研究人员对蚯蚓的药理作用和临床效果不断有新的进展。
[0003]在专利CN102675468 A中公开一种蚯蚓提取物及其提取方法和应用，将冰冻蚯蚓lkg，切成小段，用预先冷却的蒸馏水冲洗，至完全无血色为止；绞成肉泥，加入预冷的匀浆液，用胶体磨反复匀浆；所得匀浆液离心，取上清，加入95%乙醇使其终浓度达到60%，4°C放置并搅拌，4h后离心，取上清；所得上清真空旋转蒸发回收乙醇至浓缩液体积为500ml ；浓缩液冷冻干燥，得到蚯蚓多肽粗提物，_20°C保存为冻干品待用。但是该发明所提取的为蚯蚓所含的多肽，蛋白含量并不多，且操作复杂，成本较高。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种蚯蚓提取物的提取方法，该方法能够低成本地提取出蚯蚓所含有的蛋白。
[0005]为达到以上目的，本发明采用以下技术方案:
本发明首先挑选蚯蚓，将其体表污物洗净，冷冻后，将其剪碎，放于离心管中，加入约PBS0往离心管中倒入小铁珠，置于多样品组织研磨机中，采用60HZ的频率研磨60s。在12000rpm的离心机4°C条件下离心,离心15min,取上清液，即为艇蝴总蛋白提取液。运用BCA蛋白浓度测定试剂盒对蚯蚓总蛋白提取液进行定量，并将提取液稀释成不同蛋白浓度备用，将蚯蚓总蛋白提取液保存于-80°C冰箱备用。
[0006]本发明的有益效果在于:
本发明提取方法简单易操作，提取的蚯蚓提取物中蛋白含量高，本发明为阐明蚯蚓体腔蛋白部分理化特性和生物活性提供思路，也为蚯蚓治疗烫伤及伤口愈合等应用提供依据，为利用现代技术对中医药民间验方进一步研究开发提供新的思路。
【具体实施方式】
[0007]以下结合具体实施例对本发明进一步说明:
具体实施例1:
取蚯蚓一条，将其体表污物洗净，置于冰上，剪取约500 μ g，将其剪碎，放于1.5ml离心管中，加入约Iml PBS0往离心管中倒入2-3粒小铁珠，置于多样品组织研磨机中，60HZ的频率60s。12000rpm，4°C，离心15min，取上清，即为蚯蚓总蛋白提取液。运用BCA蛋白浓度测定试剂盒对蚯蚓总蛋白提取液进行定量，并将提取液稀释成不同蛋白浓度备用，将蚯蚓总蛋白提取液保存于_80°C冰箱备用。
【主权项】
1.一种蚯蚓提取物，其特征在于:本发明经过冷冻，剪碎，研磨，震动，离心后取得上清液，即为蚯蚓蛋白提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:本发明首先挑选蚯蚓，将其体表污物洗净，冷冻后，将其剪碎，放于离心管中，加入约PBS。
3.往离心管中倒入小铁珠，置于多样品组织研磨机中。
4.根据权利要求1所述的研磨，其特征在于:置于多样品组织研磨机中，60HZ的频率研磨 60s。
5.根据权利要求1所述的离心，其特征在于:在12000rpm的离心机4°C条件下离心，离心15min，取上清液，即为蚯蚓总蛋白提取液。
【专利摘要】本发明提供一种蚯蚓提取物，本发明首先挑选蚯蚓，将其体表污物洗净，冷冻后，将其剪碎，放于离心管中，加入约PBS。往离心管中倒入小铁珠，置于多样品组织研磨机中，60HZ的频率60s。在12000rpm的离心机4℃条件下离心，离心15min，取上清液，即为蚯蚓总蛋白提取液。运用BCA蛋白浓度测定试剂盒对蚯蚓总蛋白提取液进行定量，并将提取液稀释成不同蛋白浓度备用，将蚯蚓总蛋白提取液保存于-80℃冰箱备用。本发明提取方法简单易操作，提取的蚯蚓提取物中蛋白含量高，本发明为阐明蚯蚓体腔蛋白部分理化特性和生物活性提供思路，也为蚯蚓治疗烫伤及伤口愈合等应用提供依据，为利用现代技术对中医药民间验方进一步研究开发提供新的思路。
【IPC分类】A61P17-02, A61K35-62
【公开号】CN104688778
【申请号】CN201310640251
【发明人】肖峰
【申请人】肖峰
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2013年12月4日