一种抗血小板聚集的短葶山麦冬皂苷组合物的制作方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种短葶山麦冬皂苷组合物及其制备方法，以及 该组合物在抗血栓、抗血小板聚集、延长凝血时间上的应用。
【背景技术】：
[0002] 血栓性疾病（thrombotic disease)是由各种原因导致的血液在血管内或心脏中， 从流动状态变为凝固状态，从而造成血管不同程度的栓塞（embolism)而形成的一系列综 合征。故血栓性疾病又称为血栓栓塞性疾病。大量的研宄资料表明，血栓栓塞性疾病已成为 危害人群健康的重要因素。血栓栓塞可遍及大小动脉、静脉、甚或毛细血管，由此导致的心 肌梗死、脑梗死、肺梗死等，死亡率与致残率极高，为各种病因之首。血栓形成的基本条件： 1、血管壁损伤（主要为血管内皮损伤）2、血流变化（血流瘀滞与涡旋）3、血液成分的改变 (凝血因子改变与血小板数量增多或功能亢进），而血管内皮受损是最重要和最常见的。
[0003] 目前所用的抗血栓药物主要分为三类：一是抗血小板药物，二是抗凝药物，三是溶 栓药物。
[0004] 血小板是一种多功能细胞，是由骨髓中成熟的巨核细胞的细胞质脱落而成，平均 分布在血液中，具有粘附、聚集、释放和分泌颗粒内容物（如5-羟色胺，ADP)的功能。在血 栓形成的过程中，血小板的粘附起着重要的始动作用，随之又激发了内源性与外源性的凝 血过程。血流缓慢、涡流形成、血液凝固性增高及心血管内膜受损等诸多因素出现时，或以 某种因素为主时，靠边的血小板则黏附在裸露的胶原纤维上，并释放ADP和血栓素 A2,促使 更多的血小板黏附，但当凝血过程启动后，血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，后者使血 小板牢固地凝集于受损内膜表面。上述过程反复进行，血小板黏集堆不断增大、增多，构成 多个血小板小丘，阻塞血流，从而引起血栓。因此血小板聚集性是预示血栓形成趋势的重要 参数，血小板活化聚集可导致或促进这些疾病的发生和发展，所以，对于抗血小板药物的研 宄具有很重要的意义。
[0005] 临床上，阿司匹林、氯吡格雷和GPIIb/IIIa拮抗剂是当前抗血小板药物的主体， 前两者可口服，后者只能静脉注射，且仅适用于疾病急性期。但前两者也常引起不良反应， 如阿司匹林常引起紫斑、龈血、消化道出血或术后出血等。氯吡格雷常引起中性粒细胞减 少，血栓性血小板减少性紫癜及消化道症状等。
[0006] 抗凝药物，目前常用的有肝素类、水蛭素及其基因重组制剂与维生素 K拮抗剂等。 前两者均为静脉注射给药，后者为口服抗凝药物。肝素类药物的主要不良反应为出血，也可 导致骨质疏松、过敏等。重组水蛭素的不良反应远远低于其他抗凝剂，但由于其作用的不可 逆性而使医者慎用。常用的维生素 K诘抗剂有华法令（warfarin)和新抗凝（acencoumarol， 商品名sintrom)两种。华法令可导致不同程度的出血，且其在临床使用过程中影响因素较 多。
[0007] 溶栓药物，主要有尿激酶、链激酶等，可使血栓完全溶解，但多需注射应用，具有一 定抗原性，大剂量使用可导致全身出血、出现变态反应等。
[0008] 针对此等现象，研宄与开发安全、有效的抗血栓药物显得尤为重要。麦冬为百合科 植物麦冬的干燥块根，其味甘、微苦，微寒，归心、肺、胃经，具有养阴润肺、益胃生津、清心除 烦之功效，临床用于治疗支气管炎、肺炎等炎症性疾病以及心律失常及心肌缺血等心血管 疾病。麦冬含有留体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等活性类成分，现代药理实验证明麦冬 中所含的单体成分具有明确的药理活性，如麦冬皂苷D具有抗氧化活性，短葶山麦冬皂苷C 具有明确的抗肿瘤细胞转移的作用和麦冬皂苷B可以抑制肺癌细胞的生长等。但单体类成 分制备过程较繁琐，得率很低，且成本较高。所以我们选用含有各个单体的提取物作为出发 点，优化其分离及制备提纯方法，目的是可以得到具有治疗效果明确的麦冬提取物，使其可 以直接用于医疗领域，并被制作成各种制剂，使其原料得到充分的利用。
[0009] 201310710650. 0公开了一种具有抗血小板聚集活性的提取物的制备方法，该方法 包括：以麦冬药材为原料，用有机溶剂提取，提取液离心，大孔树脂分离，以乙醇溶液进行洗 脱，收集洗脱液，干燥即得提取物。
[0010] 201310710650. 0实施例1公开了一种具有抗血小板聚集活性的提取物的制备 方法，该方法包括：取麦冬药材，加麦冬原料重量大约15倍量水回流提取。提取液过滤， 静置放凉后，离心，弃去不溶物，上清液、过DlOl型大孔树脂柱分离，先以水洗脱至洗脱液 molish反应呈阴性，再以30 %的乙醇溶液洗脱，最后用85 %的乙醇溶液洗脱，洗脱液回收 溶剂，干燥即得麦冬不同洗脱部位。实验数据显示，麦冬的抗血小板聚集作用的主要活性部 位为85%乙醇洗脱部位，与阳性药持平。
[0011] 麦冬各洗脱部位对ADP诱导的家兔血小板聚集率的影响
【主权项】
1. 一种抗血小板聚集的短葶山麦冬皂苷组合物，其特征在于： 本发明涉及的短葶山麦冬皂苷组合物的制备方法包括如下：取短葶山麦冬，加水浸泡 6-18h，打碎，再加水煎煮0. 5-6h，两次，提取液过滤，静置放凉后，离心，弃去不溶物，上清 液、过D-101树脂柱吸附，重复上样一次，静置6-18h，先以水洗脱至洗脱液molish反应呈阴 性，再以30 %的乙醇溶液洗脱，最后用85 %的乙醇溶液洗脱，洗脱液分别回收溶剂，将30 % 乙醇部位和85%乙醇部位混合，冻干，得短葶山麦冬皂苷组合物。
2. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物在制备抗血栓药物上的应用。
3. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物在制备缩短凝血时间药物上的应用。
4. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物在制备抗血小板聚集药物上的应用。
5. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物在制备抗肺血栓药物上的应用。
6. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物在制备保护缺氧复氧损伤细胞药物上的 应用。
7. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物的薄层色谱定性鉴别，其特征在于： 取短葶山麦冬皂苷组合物，lml甲醇溶解，LC-C18SPE固相萃取小柱吸附，分别用水、 40 %、75%、85%甲醇溶液各8ml洗脱，收集75 %洗脱部位，挥干溶剂，用少量甲醇溶解，备 用； 展开系统如下： (1) 氯仿-甲醇-水（17 : 6 : 2) (2) 丙酮-乙酸乙酯-水-乙酸（5 : 5 : 1 : 0.2) (3) 水饱和正丁醇系统。
8. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物的HPLC-ELSD色谱，其特征在于： 用HPLC-ELSD进行成分定性测定。 色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18,4.6X250mm，5ym; 色谱条件：甲醇-水梯度洗脱，洗脱条件； 总皂苷HPLC-ELSD色谱备件
9. 根据权利要求1的短葶山麦冬皂苷组合物的短葶山麦冬多糖含量测定方法，其特征 在于： 标准品与供试品的制备 标准品的制备：精密称取80°C烘至恒重的果糖8. 30mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶 解，并定容，得〇. 〇83mg/ml标准溶液，摇勾，备用； 供试品的制备：精密称取短葶山麦冬皂苷组合物样品适量，放至l〇ml容量瓶中，甲醇 溶解并定容，摇匀，备用； 最大吸收波长的选择 精密量取标准品溶液7ml，用甲醇稀释并定容至10ml。取供试品溶液2. 5ml至10ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容。分别精密量取甲醇，标准品稀释后溶液，供试品稀释后溶液 2ml至具塞试管中，各加入5%苯酚溶液lml，再迅速沿管壁加入5ml浓硫酸，40°C水浴反应 15min，冰水浴3min终止反应，放至室温，在波长400~760nm处扫描，选择最大吸收波长为 490nm； 标准曲线的制备 精密量取果糖标准品溶液l、2、3、5、7ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释并定容，制成 0? 0083mg/ml、0. 0166mg/ml、0. 0249mg/ml、0. 0415mg/ml、0. 0581mg/ml的一系列浓度的标 准品溶液，分别从各标准品溶液中精密量取2ml至具塞试管中，按照2. 5. 2项下的方法显 色，以随行空白溶液为参比溶液，在波长490nm下测定吸光度，以浓度mg/ml为横坐标，吸光 度A为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线为：Y= 13. 38x-〇. 002,r= 0. 9998,n= 3,果糖在 8. 3yg/ml~58. 1yg/ml范围内线性良好； 样品测定 精密量取短葶山麦冬皂苷组合物供试品溶液2. 5ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释并定 容。精密量取2ml稀释后供试品溶液至10ml具塞试管中，显色，以随行空白溶液为参比溶 液，在波长490nm下测定吸光度，按照标准曲线计算各个样品的多糖含量。
【专利摘要】本发明涉及的短葶山麦冬皂苷组合物的制备方法包括如下：取短葶山麦冬，加水浸泡6-18h，打碎，再加水煎煮0.5-6h，两次，提取液过滤，静置放凉后，离心，弃去不溶物，上清液、过D-101树脂柱吸附，重复上样一次，静置6-18h，先以水洗脱至洗脱液molish反应呈阴性，再以30％的乙醇溶液洗脱，最后用85％的乙醇溶液洗脱，洗脱液分别回收溶剂，将30％乙醇部位和85％乙醇部位混合，冻干，得短葶山麦冬皂苷组合物。本发明涉及的短葶山麦冬皂苷组合物具备抗血栓、抗凝血、缩短凝血时间、抗血小板聚集、抗肺血栓、保护缺氧复氧损伤细胞的活性。
【IPC分类】G01N21-31, G01N30-90, A61K125-00, A61P7-02, A61K36-8968
【公开号】CN104689058
【申请号】CN201510140415
【发明人】张剑, 董迪, 陈维
【申请人】哈尔滨泰华药业股份有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月25日