用于伤口治疗的药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于再生性治疗特别是伤口愈合的药物领域。
【背景技术】
[0002] 伤口愈合构成复杂、动态和精心策划的过程，当皮肤组织破裂出现时，所述过程被 激活。贯穿伤口愈合过程，发生一系列事件，包括血小板聚集、凝血级联活化、细胞迀移、细 胞增殖、炎性浸润、细胞分化和组织重塑。尽管这些事件的级联看起来良好区分且分成三个 时期，即炎症、增殖以及伤口收缩和重塑，但它们实际上彼此重叠，并且继续或更新的组织 损伤可以在现有伤口内的受影响部位处再起始所述序列。
[0003] 皮肤组织损伤和血管破坏之后是纤维蛋白凝块形成，其提供了细胞迀移到伤口内 的基底。受一系列分子吸引的嗜中性粒细胞，吞噬异物和细菌，逐步替换为分化为巨噬细胞 的单核细胞。巨噬细胞吞噬微生物、细胞外基质的碎片、纤维蛋白、嗜中性粒细胞、红细胞及 其他碎片，并且分泌对于有效伤口修复视为关键的多种分子。在慢性伤口中，该时期的一种 或多种组分看起来是失调的，导致延迟的伤口愈合。来自角质化细胞、成纤维细胞和平滑肌 细胞的生长因子表达在糖尿病伤口中减少，负面影响初始止血栓子的形成。另外，已观察到 对细胞因子释放、趋化性、粘连和吞活性的尚血糖症以及尚脂血症相关的损害。
[0004] 受损的伤口愈合与增加的发病率和死亡率相关。不愈合的伤口通常导致截肢术。 然而，尽管深入研宄，但确切潜在发病机制仍未完全阐明。它看起来是微血管和大血管疾病 的净结果。
[0005] 伤口愈合通常在糖尿病中是延迟的，并且血管病看起来显著参与。另外，神经病以 及支持间充质细胞迀移和活化的生长因子的缺乏已公认为延迟的糖尿病伤口愈合的原因 之一。看起来是糖尿病状态自身固有的其他因素，例如细胞形态和功能中的变化已牵涉其 发病机理。
[0006]MistrySucharitaJ等人（2007)描述了在用抗stathmin核酶处理后减少的 HUVEC细胞增殖。据说核酶干扰微管代谢且使微管聚合和解聚之间的平衡朝向聚合微管转 变，这干扰细胞生长且具有抗血管生成效应。
[0007]WO2008/039390A2描述了在癌症治疗中的肿瘤相关抗原和壳聚糖的疫苗缀合 物。一种可能的抗原是stathmin。
[0008]WO2007/089151Al(EP1815863Al)将stathmin鉴定为TLR3 活化物质且提议在 神经变性病症例如阿尔茨海默氏病中的变性炎症过程的治疗。还提及了伤口的治疗。
[0009] 另一方面，US6, 429, 304Bl教导具有抗有丝分裂活性的化合物，其可以用于治疗 多种增殖性疾病例如癌症或"异常伤口愈合"。作用模式是阻止细胞生长。化合物的抗有丝 分裂活性基于所谓的微管解聚能力。一种此类化合物是stathmin，也称为0P18。
[0010] WO2004/113561A2是陈述stathmin或癌蛋白18阻止由于微管蛋白减少而不受 控制的细胞生长的另外的文件。
[0011] 这些文件无一研宄了Stathmin在实际中的伤口愈合中的作用。这些专利文件的 作者进一步提及关于在伤口愈合中的可能作用的相反陈述。因此仍有待阐明stathmin是 否在伤口愈合中具有任何有益作用。
[0012]目前的伤口愈合治疗旨在给伤口清洁且清创，治疗可能的感染以减少伤口的炎症 期，并且任选施加迀移或生长因子例如roGF。另外，目前的伤口治疗制剂并非令人满意，并 且存在改良的伤口愈合组合物的当前需要。
[0013] 发明简沐
[0014] 本发明提供了stathmin、编码stathmin的核酸或表达stathmin的细胞在伤口 治疗中或减少伤口结瘢的用途。在相关方面，本发明还涉及用于伤口治疗的stathmin、 编码stathmin的核酸或表达stathmin的细胞。进一步地，本发明涉及stathmin、编码 stathmin的核酸或表达stathmin的细胞在制备伤口治疗中的药物中的用途。还提供了包 含stathmin的药物组合物。本发明进一步提供了增加或诱导间充质细胞、表皮细胞和/或 干细胞，特别是基质干细胞和/或造血干细胞的增殖和/或迀移，用于刺激免疫细胞优选天 然杀伤细胞，用于刺激成纤维细胞，用于刺激上皮细胞优选表皮的上皮细胞，或用于刺激血 管生成，特别是用于刺激所述细胞尤其是间充质细胞和/或成纤维细胞中的IL-8产生，用 于刺激单核细胞和/或巨噬细胞的体外或体内方法。可以诱导单核细胞和/或巨噬细胞以 产生细胞因子，例如IL-6、IL-8、MIP-l、MIP-2。所有这些方面是等价的，并且所有优选实施 方案同样涉及这些方面中的每一个。
[0015] 本发明人已将stathmin鉴定为非常有力的伤口愈合加速剂，其甚至超过常见药 物例如roGF制剂。特别令人惊讶的是在减少的或受损的伤口愈合的情况下的效果，其中 stathmin可以以出乎意料快的速率实现伤口闭合。本发明的主题在权利要求中进一步限 定。
[0016] 发明详沐
[0017]Stathmin是具有已知序列（NCBI数据库NP_005554 和CAD19057 或SEQID N0:l(stathmina)或SEQIDN0:2(stathminb))的蛋白质。Stathmin及其同工型由上文 提及的【背景技术】进一步已知。它是在哺乳动物中的大多数组织中发现的遍在表达的蛋白 质。取决于可以磷酸化的位点的特异性组合，观察到许多不同的磷酸化形式。在Ser-16处 的磷酸化看起来是神经元极化所需的。在Ser-63处的磷酸化使微管蛋白结合减少10倍， 且抑制MT聚合抑制活性。
【主权项】
1. Stathmin、编码所述stathmin的核酸或表达stathmin的细胞，其用于治疗患者中的 慢性伤口或者疾病依赖性或药物疗法依赖性受损的伤口愈合和/或减少伤口结瘢。
2. 用生物相容性基质配制或与生物相容性基质偶联的stathmin，其用于治疗患者中 的伤口，优选慢性伤口或者疾病依赖性或药物疗法依赖性受损的伤口愈合，所述生物相容 性基质优选包含胶原、明胶、壳聚糖和/或透明质酸。
3. 根据权利要求1或2使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述stathmin是人 stathmin。
4. 根据权利要求1、2或3使用的stathmin或细胞，其中所述stathmin是重组 stathmin。
5. 根据权利要求1-4中任一项使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述stathmin包含 SEQ ID NO: 1的氨基酸1至126,或与SEQ ID NO: 1的氨基酸1至126的序列具有至少70% 序列同一性的氨基酸序列。
6. 根据权利要求1-5中任一项使用的stathmin，所述stathmin在水凝胶中配制。
7. 根据权利要求1-6中任一项使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述患者需要诱导 血管生成、需要刺激先天性免疫应答和/或需要诱导细胞因子/生长因子和TMP用于免疫 调节或瘢痕减少。
8. 根据权利要求1-7中任一项使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述疾病依赖性受 损的伤口愈合是由于选自下述的疾病：糖尿病或代谢综合征，慢性静脉功能不全（CVI)，外 周动脉闭塞性疾病（PAOD)，癌症，自身免疫尤其是选自类风湿性关节炎、狼疮和青斑样血管 病变的自身免疫，造口术，长期炎症过程，褥疮，优选地其中所述患者患有糖尿病或代谢综 合征。
9. 根据权利要求1-8中任一项使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述药物疗法依赖 性受损的伤口愈合是由于选自使用以下进行治疗的药物疗法：皮质类固醇、尼古丁、抗生 素、免疫抑制剂、抗凝血剂、细胞毒性药剂、抗风湿病药剂、血管收缩剂。
10. 根据权利要求1-9中任一项使用的stathmin、核酸或细胞，其中所述伤口选自慢性 或不愈合的糖尿病足伤口，溃疡特别是静脉溃疡、褥疮或压力性溃疡，烧伤优选三度烧伤， 外科伤口，意外伤口，坏死伤口，感染伤口。
11. 药物组合物，其包含用生物相容性基质配制或与生物相容性基质偶联的 stathmin，所述stathmin任选如权利要求3-6中任一项进一步定义，所述生物相容性基质 优选包含胶原、明胶、壳聚糖和/或透明质酸，特别是水凝胶基质，优选海藻酸盐。
12. 根据权利要求11的药物组合物，其用作药物。
13. 根据权利要求11的药物组合物，其用于治疗伤口或瘢痕，优选如权利要求1、7-10 中任一项中进一步定义的。
14. 一种体外方法，其用于增加或诱导间充质细胞、表皮细胞和/或干细胞，特别是基 质干细胞的增殖和/或迀移，刺激免疫细胞优选天然杀伤细胞，刺激成纤维细胞，刺激上皮 细胞优选表皮的上皮细胞，或刺激血管生成，特别是刺激所述细胞尤其是间充质细胞和/ 或成纤维细胞中的IL-8产生，刺激单核细胞和/或巨噬细胞， 所述体外方法包括给所述细胞施用stathmin、编码所述stathmin的核酸或表达 stathmin的细胞的步骤。
15. -种方法，其用于在患者中增加或诱导间充质细胞和/或干细胞，特别是基质干细 胞的增殖和/或迀移，刺激免疫细胞优选天然杀伤细胞，刺激成纤维细胞，刺激上皮细胞优 选表皮的上皮细胞，或刺激血管生成，特别是刺激所述细胞尤其是间充质细胞和/或成纤 维细胞中的IL-8产生，刺激单核细胞和/或巨噬细胞， 所述方法包括给所述患者施用stathmin、编码所述stathmin的核酸或表达stathmin 的细胞的步骤，优选通过在伤口上的局部施用。
【专利摘要】本发明涉及stathmin、编码所述stathmin的核酸或表达stathmin的细胞，其用于治疗患者中的慢性伤口或者疾病或药物疗法依赖性受损的伤口愈合，或者用于增加或诱导间充质细胞、干细胞的增殖和/或迁移，用于刺激免疫细胞优选天然杀伤细胞，用于刺激成纤维细胞，用于刺激上皮细胞优选表皮的上皮细胞，或用于刺激血管生成。
【IPC分类】A61P17-02, A61K47-36, A61K38-17
【公开号】CN104755095
【申请号】CN201380048505
【发明人】R·贝格尔
【申请人】西姆贸易咨询有限责任公司租赁两合公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2013年7月18日
【公告号】CA2879472A1, EP2687224A1, EP2874644A1, US20150202258, WO2014013027A1