法和支持疗法(例如止痛剂、利尿剂、抗利尿剂、抗病毒剂、抗生素、营养补充剂、贫血治疗剂、凝血治疗剂、骨治疗剂以及精神病和心理治疗剂)O所述其它抗肿瘤治疗(包括用一种或多种T细胞抑制性受体的一种或多种阻断剂治疗)可与ICOS刺激剂的施用依序(例如之前或之后)或同时提供。
实施例
[0110]实施例1:1COS刺激剂增强抗CTLA-4抗体和抗I3D-Ll抗体的抗肿瘤作用。
[0111]实施例1.1:1COS抗体刺激剂对⑶4+T细胞增殖的影响。
[0112]⑶4+T细胞是利用Dynal鼠类⑶4+T细胞阴性选择试剂盒根据制造商的说明从C57BL/6小鼠脾脏制备。在用或未用抗CD3mAb (0.5 μ g/ml)和2 μ g/ml抗CD28、5 μ g/ml抗ICOS mAb (克隆C398.4A和7E.17G9)预先涂布的96孔板中刺激五万个⑶4+T细胞。细胞在37°C下，5% CO2中孵育72小时并且在培养结束前8小时向各孔中添加I μ ci 3H-胸苷。收集板并分析3H-胸苷并入。
[0113]如图1中所示，抗ICOS抗体在抗⑶3抗体存在下增强⑶4+T细胞的增殖。
[0114]实施例1.2:抗CTLA-4诱导的ICOS表达与肿瘤生长之间的间接相关性
[0115]小鼠用2X104个B16/F10肿瘤细胞激发。不治疗或治疗小鼠。经过治疗的动物在第3天接受200 μ g抗CTLA-4抗体并在肿瘤激发后6、9、12、15、18和21天时接受100 μ g抗CTLA-4抗体。每三天监测肿瘤生长和血液中⑶4+FOXP3-效应T细胞上ICOS的水平。
[0116]如图2中所示，从经过治疗的动物分离的⑶4+F0XP3_细胞的ICOS表达水平增加。另外，ICOS的表达增加与肿瘤负荷间接相关(图2)。
[0117]实施例1.3:IC0S^ ICOSL _小鼠显示由抗CTLA-4抗体介导的抗肿瘤反应减少。
[0118]带有B16/BL6 肿瘤的野生型 C57BL/6、IC0S 缺乏 C57BL/6 和 ICOS 配体(ICOSL)缺乏C57BL/6小鼠不进行治疗或用I X 16个经过辐照的产GM-CSF的B16 (GVAX)皮下治疗(肿瘤植入后3天时)和以抗CTLA-4(9H10)分别在第3、5和7天以0.2,0.1和0.1mg剂量腹膜内治疗。检测肿瘤生长并在第80天计算存活百分比。
[0119]带有肿瘤的野生型、ICOS缺乏或ICOSL缺乏小鼠和未治疗动物在肿瘤植入后的25天至41天死亡(分别为空心圆圈、空心三角和空心方块)。相反，当将野生型表述用GVAX和抗CTLA-4组合疗法治疗时观察到90%存活(实心圆圈)。值得注意的是，ICOS缺乏小鼠(实心三角)和ICOSL缺乏小鼠(实心方块)在用GVAX和抗CTLA-4抗体治疗后显示显著较低的保护，表明此配体/受体对相互作用在GVAX/抗CTLA-4组合疗法期间具有关键作用。
[0120]实施例1.4:使用GVAXJ^ CTLA-4抗体和抗ICOS抗体增强抗肿瘤作用。
[0121]用5\104个816作1^6肿瘤细胞激发的小鼠⑴未治疗，⑵仅用I X 10 6个经过辐照的产GM-CSF的B16治疗(GVAX ;皮下，植入后3、6和9天)，⑵用I X 16个经过辐照的GVAX(皮下，植入后3、6和9天)、200 μ g抗CTLA-4抗体(肿瘤植入后3天)和100 μ g抗CTLA-4抗体(肿瘤植入后6、9、13和17天)治疗，或⑶用I X 16个经过辐照的GVAX (植入后3、6和9天)、200 μ g抗CTLA-4抗体(肿瘤植入后3天)、100 μ g抗CTLA-4抗体(肿瘤植入后6、9、13和17天)和200 μ g抗ICOS抗体(肿瘤植入后3、6、9、13和17天)治疗。检测肿瘤生长并在第80天计算存活率。
[0122]如图4中所示，用GVAXJA CTLA-4抗体和抗ICOS抗体的组合治疗动物与仅用GVAX和抗CTLA-4抗体治疗动物相比使得肿瘤生长延缓。此发现结果与用GVAX同抗CTLA-4和抗ICOS抗体治疗的小鼠与仅用GVAX和抗CTLA-4抗体治疗的小鼠相比显示较高存活率的发现结果一致(图5)。
[0123]实施例1.5:使用抗ICOS和抗I3D-Ll抗体增强抗肿瘤作用
[0124]带有B16/BL6的三日龄小鼠未治疗或用I X 16个经过辐照的产GM-CSF的B16 (GVAX)皮下治疗(肿瘤植入后3天时)和用抗ICOS抗体(7E.17G9)、抗TO-Ll抗体(10F.9G2)或组合分别在第3、5和7天时以0.2,0.1和0.1mg的剂量腹膜内治疗。检测肿瘤生长并在第80天计算存活百分比。
[0125]用GVAX与抗ICOS抗体或GVAX与抗TO-Ll抗体的组合治疗的小鼠显示较低存活率(图6)。相反，施用抗ro-Ll抗体、抗ICOS抗体和GVAX的组合疗法得到50%存活率，表明用抗ICOS抗体(7E.17G9)与抗I3D-Ll抗体(10F.9G2)和GVAX的组合获得有效协同效应。
[0126]实施例2:使用表达ICOS配体的肿瘤细胞作为抗肿瘤疫苗
[0127]实施例2.1
[0128]实施例2.1.1:抗体
[0129]抗CTLA4(克隆 9H10)是购自 B1 X Cell。
[0130]实施例2.1.2:细胞系
[0131]使用高致瘤性且低免疫原性的黑素瘤细胞系B16/BL6进行肿瘤激发。使用表达GM-CSF的B16/BL6(此处称为GVAX)治疗带有肿瘤的小鼠。通过用载体MSCV-1RES-Thyl.1对B16/BL6细胞进行逆转录病毒转导产生B16-Thyl.1，所述载体是来自康涅狄格大学(University of Connecticut)的Leo Iefrancois博士的馈赠。通过用表达全长小鼠ICOSL 的载体 MSCV-1C0SL(来自加州大学伯克利(University of California, Berkeley)的William Sha博士的馈赠)对B16/BL6细胞进行逆转录病毒转导产生B16_mIC0SL。GVAX细胞也用MSCV-1C0SL载体转导以产生GVAX-mlCOSL。
[0132]实施例2.1.3:肿瘤激发和治疗实验。
[0133]小鼠在第O天于右侧腹皮内注射50，000个B16/BL6黑素瘤细胞并且在第3、6、9和12天在左侧腹用7.5X 15个经过辐照(150Gy)的GVAX与7.5X10 5个经过辐照(150Gy)的B16/BL6-Thyl.1 (η = 10)或 B16_mIC0SL(η = 10)的混合物与腹膜内 100 μ g 抗 CTLA4 (第3天200 μ g)组合治疗。随时间监测肿瘤生长和排斥反应。
[0134]小鼠在第O天于右侧腹皮内注射20，000个B16/BL6黑素瘤细胞并且在第3、6、9和12天在左侧腹用I X 16个经过辐照(150Gy)的GVAX (η = 10)或GVAX-mlCOSL (η = 10)与腹膜内10yg抗CTLA4(第3天200 yg)组合治疗或不治疗。随时间监测肿瘤生长和排斥反应。
[0135]小鼠在第O天于右侧腹皮内注射20，000个B16/BL6黑素瘤细胞并且在第3、6、9和12 天在左侧腹用 I X 16个经过辐照(150Gy)的 B16/BL6_Thyl.1 (η = 10)或 B16_mIC0SL (η=10)在有或没有腹膜内100 μ g抗CTLA4 (第3天200 μ g)的情况下治疗或不治疗。随时间监测肿瘤生长和排斥反应。
[0136]小鼠在第O天于右侧腹皮内注射20，000个B16/F10黑素瘤细胞并且在第3、6、9和12天在左侧腹用I X 16个经过辐照(150Gy)的B16_mIC0SL (η = 5)在有或没有腹膜内10yg抗CTLA4(第3天200 yg)的情况下治疗或不治疗。随时间监测肿瘤生长和排斥反应。
[0137]实施例2.2:结果
[0138]表达ICOSL的B16细胞疫苗在不存在或存在GVAX的情况下并未使肿瘤保护率增加超过GVAX与CTLA-4阻断的先前组合疗法(图7和8)。
[0139]在没有GM-CSF的环境中，表达ICOSL的B16细胞疫苗连同CTLA-4阻断一起具有使肿瘤生长延缓和/或总体有利于肿瘤排斥的协同效应(图9-12)。
[0140]本文提及的所有专利和专利公布据此以引用的方式并入。
[0141]本领域的技术人员在阅读前述描述后将进行某些修改和改良。应了解，所有所述修改和改良在本文中出于简洁和可读性的原因均被删除，但完全落在上述权利要求书的范围内。
[0142]本发明的优选实施方案如下:
[0143]1.一种治疗患者的癌症的方法，其包括向所述患者同时或依序施用包含T细胞抑制性受体阻断剂和ICOS激动剂的组合物。
[0144]2.根据实施方案I所述的方法，其中所述T细胞抑制性受体阻断剂是选自由阻断性抗CTLA-4抗体、阻断性抗ro-1抗体和其组合组成的组。
[0145]3.根据实施方案I或实施方案2所述的方法，其中所述ICOS激动剂是抗ICOS抗体。
[0146]4.根据实施方案I或实施方案2所述的方法，其中所述ICOS激动剂是ICOS配体。
[0147]5.根据实施方案4所述的方法，其中所述ICOS配体是可溶性的。
[0148]6.根据实施方案4所述的方法，其中所述ICOS配体表达于细胞的表面上。
[0149]7.根据实施方案6所述的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞。
[0150]8.根据实施方案7所述的方法，其中所述肿瘤细胞是经过辐照的。
[0151]9.根据实施方案7所述的方法，其中所述肿瘤细胞是从所述患者手术移除的。
【主权项】
1.包含(a)阻断性抗ro-1抗体或阻断性抗ro-Ll抗体和(b)ICOS激动剂的组合物在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述ICOS激动剂是抗ICOS抗体。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述ICOS激动剂是ICOS配体。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述ICOS配体是可溶性的。
5.根据权利要求3所述的用途，其中所述ICOS配体表达于细胞的表面上。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述细胞是肿瘤细胞。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述肿瘤细胞是经过辐照的。
8.根据权利要求6所述的用途，其中所述肿瘤细胞是从所述患者手术移除的。
【专利摘要】本文证明ICOS激动剂与T细胞抑制性受体(例如CTLA-4、PD-I等)阻断剂的组合适用于治疗肿瘤。
【IPC分类】A61K38-17, A61P35-00, A61K39-395
【公开号】CN104826106
【申请号】CN201510169089
【发明人】J·埃里森, P·沙尔马, S·A·盖扎达, T·傅
【申请人】斯隆凯特林防癌纪念中心, 得克萨斯大学体系董事会
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2010年9月30日
【公告号】CA2775761A1, CN102740887A, CN102740887B, EP2482849A2, EP2482849A4, US8709417, US20120251556, US20140308299, WO2011041613A2, WO2011041613A3