短发夹核糖核酸（shRNA，small hairpin RNA) "意味着以单 链的方式由50~70个组成的核苷酸，在体内（in vivo)形成莖环（stem-loop)结构。艮口， 短发夹核糖核酸为形成用于通过核糖核酸干扰抑制基因表达的紧密的发夹结构的核糖核 酸序列。在5~10个核苷酸的环部位的两侧，以互补的方式由15~30个核苷酸的长核糖 核酸形成碱基对，并形成双链茎。短发夹核糖核酸通过包含U6启动子的载体向细胞内转 导，并大致转移至子细胞，从而遗传基因表达抑制，以始终进行表达。短发夹核糖核酸的发 夹结构借助细胞内机制被裂解，从而成为小干扰核糖核酸之后，与核糖核酸诱导沉默复合 体（RISC，RNA-induced silencing complex)相结合。这些RISC与信使核糖核酸相结合来 裂解信使核糖核酸。短发夹核糖核酸被核糖核酸聚合酶III转录。根据本发明，本发明的 核苷酸序列可构成形成在环部位两侧存在的双链茎序列的短发夹核糖核酸结构。
[0024] 在本说明书中，术语"微小核糖核酸（miRNA，microRNA) "意味着用于调苄基因表 达，且全长由10~50个核苷酸，优选为15~40个核苷酸，更优选为17~25个核苷酸构 成的单链核糖核酸分子。微小核糖核酸为在细胞内不被表达的寡核苷酸，具有短茎-环结 构。微小核糖核酸与1或2以上的信使核糖核酸（messenger RNA)的全部或部分具有同源 性，并通过与上述信使核糖核酸的互补性的结合，抑制靶基因表达。
[0025] 在本说明书中，术语"反义寡核苷酸"意味着包含对特定信使核糖核酸的序列互补 的核苷酸序列的核糖核酸或它们的衍生物，与信使核糖核酸内的互补性的序列相结合，来 抑制信使核糖核酸翻译成蛋白质。本发明的反义核苷酸序列意味着对靶基因的信使核糖核 酸互补，且可与靶基因的信使核糖核酸相结合的核糖核酸序列，可抑制靶基因的信使核糖 核酸的翻译、向细胞质内的转运（translocation)、成熟（maturation)或其他所有生物学 功能所需的必要活性。
[0026] 上述反义寡核苷酸可在一种以上的碱基、糖或骨架（backbone)的位置变形，以增 进功效（De Mesmaeker et al·，Curr Opin Struct Biol. ,5(3) :343-55, 1995)。寡核苷 酸骨架可变形为硫代磷酸醋（phosphorothioate)、磷酸三醋（phosphotriester)、甲基磷 酸醋（methyl phosphonate)、单链烷基、环烷基、单链杂原子、杂环糖磺酸盐等。并且，反义 核酸可包含一种以上的被取代的糖部分（sugar moiety)。反义寡核苷酸可包含变形的碱 基。上述变形的碱基有次黄嗓呤（hypoxanthine)、6-甲基腺嗓呤（6-methyl adenine)、 5-甲基喃啶（5-methyl pyrimidine)(尤其，5-甲基胞喃啶（5-methyl cytosine))、5_ 轻 甲基胞喃啶（HMC，5-hydroxymethyl cytosine)、糖基轻甲基胞喃啶（glycosyl HMC)、龙胆 二糖基轻甲基胞喃啶（gentiobiosyl HMC)、2_氨基腺嗓呤（2-aminoadenine)、2_硫脲喃 啶（2_thiouracil)、2-硫代胸腺喃啶（2_thiothymine)、5-溴尿喃啶（5-bromouracil)、 5_ 轻甲基尿喃啶（5-hydroxymethyl uracil)、8_ 氮鸟嗓呤（8-azaguanine)、7_ 脱氮鸟嗓 吟（7_(163238皿11；[116)、呢（6-氛基己基）腺嗓吟（呢（6-3111；[110]16171)3(1611；[116)、2,6-二氛 基嗓呤（2,6-diaminopurine)、2-0-甲基尿喃啶（2-0-methyl uracil)、2_0_ 甲基鸟嗓呤 (2-0_methylguanine)及 2-氟胞喃啶（2-fluorocytosine)等。
[0027] 根据本发明的更优选的实例，本发明的核苷酸序列为小干扰核糖核酸序列。
[0028] 根据本发明的再一实施方式，本发明提供人乳头瘤病毒（HPV，human papilloma virus)感染相关疾病的预防或治疗用组合物，上述人乳头瘤病毒感染相关疾病的预防或治 疗用组合物包含含有变形的骨架（backbone)或一种以上的变形的碱基的选自由序列表中 序列1、序列7、序列12、序列16、序列22、序列28、序列34、序列40、序列46、序列51、序列 56、序列62、序列66、序列72、序列78、序列84、序列90、序列96、序列102、序列108及它们 的反义核苷酸序列组成的组中的一种以上的核苷酸序列作为有效成分。即，在所罗列的上 述核苷酸序列中，骨架变形的核苷酸或碱基变形的核苷酸可成为本发明的人乳头瘤病毒感 染相关疾病的预防或治疗用组合物。
[0029] 适用于本发明的核苷酸的骨架或碱基的变形可包括为了提高稳定性或所需的活 性而在本领域中通常所施加的任何变形。
[0030] 优选地，本发明的变形的骨架包括选自由烷基膦酸醋（alkylphosphonate)、 硫代磷酸醋、二硫代磷酸醋（phosphorodithioate)、烷基硫代膦酸醋 (alkylphosphonothioate)、氨基磷酸醋（phosphoamidate)、磷酸盐醋（phosphate ester)、 氨基甲酸醋（carbamate)、乙酰亚胺醋（acetamidate)、羧甲基醋（carboxymethyl ester)、 碳酸醋（carbonate)及磷酸三醋（phosphate triester)组成的组中的一种以上的变形。 [0031 ] 优选地，本发明的变形的碱基包括选自由甲基化（methylation)、糖基化 (glycosylation)及卤化（halogenation)组成的组中的一种以上的变形。更优选地，本发 明的变形的碱基为被2' -0甲基化（methylation)的碱基或被2' -氟化（fIuorination) 的喊基。
[0032] 根据本发明，本发明人确认如下：在对将人乳头瘤病毒16型或人乳头瘤病毒18型 病毒的E6/E7基因作为靶的表达抑制用核糖核酸的特定位置施加2' -0甲基化或2' -氟化 的变形的情况下，与变形前的核酸分子相比，大大提高了对靶基因的表达的抑制效率，在人 的血浆等中，增加了稳定性，在动物的药物动态学实验中，半衰期也显著增加了两倍以上。
[0033] 2'-0甲基化意味着与核糖核酸分子的核糖（ribose)的2号碳相结合的羟基被甲 基化来变形为2' -甲氧基，2' -氟化意味着与核糖核酸分子的核糖的2号碳相结合的羟基 被氟基取代来变形为2' -氟基。
[0034] 根据本发明的优选实例，在本发明的核苷酸中，被2' -0甲基化（methylation)的 碱基为U或G。
[0035] 根据本发明的优选实例，在本发明的核苷酸中，被2' -氟化（fluorination)的碱 基为c。
[0036] 根据本发明的优选实例，在本发明中，一种以上的碱基被2' -0甲基化 (methylation)或被2' -氟化（fluorination)的核苷酸序列选自由序列表中序列2、序列 3、序列5、序列6、序列8、序列10、序列11、序列13、序列15、序列17、序列18、序列20、序列 21、序列23、序列24、序列26、序列27、序列29、序列30、序列32、序列33、序列35、序列36、 序列38、序列39、序列41、序列42、序列44、序列45、序列47、序列49、序列50、序列52、序 列54、序列55、序列57、序列58、序列60、序列61、序列63、序列65、序列67、序列68、序列 70、序列71、序列73、序列74、序列76、序列77、序列79、序列80、序列82、序列83、序列85、 序列86、序列88、序列89、序列91、序列92、序列94、序列95、序列97、序列98、序列100、序 列101、序列103、序列104、序列106、序列107、序列109、序列110、序列112及序列113的 核苷酸序列组成的组中。
[0037] 根据本发明的另一实施方式，本发明提供人乳头瘤病毒（HPV，human papilloma virus)感染相关疾病的预防或治疗用组合物，上述人乳头瘤病毒感染相关疾病的预防或治 疗用组合物包含选自由以下混合组组成的组中的核苷酸混合组作为有效成分，上述混合组 分别为由序列表中序列2、序列4、序列8、序列9、序列12及序列15的核苷酸序列组成的混 合组、由序列表中序列18、序列21、序列29及序列32的核苷酸序列组成的混合组、由序列 表中序列42、序列45、序列52及序列55的核苷酸序列组成的混合组、由序列表中序列58、 序列59、序列63及序列65的核苷酸序列组成的混合组、由序列表中序列68、序列71、序列 91及序列94的核苷酸序列组成的混合组以及由序列表中序列98、序列100、序列109及序 列112的核苷酸序列组成的混合组。
[0038] 根据本发明，本发明人发现了在本发明的核苷酸序列使用为形成特定组合的混合 组的情况下，与使用单一序列的核糖核酸的情况相比，大大提高了靶基因的抑制效率，从而 对人乳头瘤病毒感染相关疾病具有更优秀的治疗活性。
[0039] 根据本发明的优选实例，使用本发明的组合物来进行治疗的人乳头瘤病毒感染相 关疾病选自由尖锐湿琉（genital warts)、阴道炎（vagina inflammation)、盆腔炎（pelvic inf la_ation)及癌症组成的组中，更优选地，使用本发明的组合物来进行治疗的癌症选 自由宫颈癌（cervical cancer)、阴道癌（vagina cancer)、外阴癌（vulva cancer)、肛门 癌（anal cancer)、阴莖癌（penis cancer)、扁桃体癌（tonsil cancer)、咽癌（pharynx cancer)、喉癌（larynx cancer)、头颈癌（head&neck)及肺腺癌（lung adenocarcinoma)组 成的组中。最优选地，使用本发明的组合物来进行治疗的癌症为宫颈癌。
[0040] 本发明的组合物可制备为包含本发明的核酸分子的药剂学有效量的药剂学组合 物。
[0041] 在本说明书中，术语"药剂学有效量"意味着实现上述的本发明的关节炎预防、减 轻或治疗功效或活性所需的充分的量。
[0042] 包含于本发明的药剂学组合物的药剂学上接受的载体通常用于制剂，包含乳 糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微 晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯（methyl hydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙醋（propyl hydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁、环糊精 及其共聚物以及矿物油等，但并不限定于此。本发明的药剂学组合物除了上述成分之外，还 可包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。适当的药剂学上接受的 载体及制剂详细记载于 Remington' s Pharmaceutical Sciences (19th ed·，1995)中。
[0043] 本发明的药剂学组合物能够以口服或非口服方式进行给药，优选地，以非口服方 式进行给药，若以非口服方式进行给药，则能够以静脉内注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注 射、局部给药、经皮给药、关节腔给药等方式进行给药。
[0044] 本发明的药剂学组合物的适当的给药量可根据制剂化方法、给药方式、患者的年 龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性等因素来多样地开 处方。另一方面，本发明的药剂学组合物的给药量优选为每日0.0001~l〇〇mg/kg。
[0045] 在本发明的药剂学组合物使用为抗癌剂的情况下，可与本领域中通常所使用的抗 癌组合物并用，更具体地，可与顺铂或紫杉醇等的抗癌剂并用来进行给药。
[0046] 本发明的药剂学组合物可根据本发明所属技术领域的普通技术人员能够容易实 施的方法，利用药剂学上接受的载体和/或赋形剂来制剂化，从而可制备成单位容量形态 或以放入大容量容器内的方式制备。此时，剂型可以为油或水性介质中的溶液、悬浮液或 乳化液形态，或者也可以为浸膏剂、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊形态，还可包含分散剂或稳定 剂。
[0047] 根据本发明更优选的实例，本发明的核酸分子包含于基因传递系统（gene delive