木瓜蛋白酶1000U/g，酶解温度 50°C，酶解时间4h，加热至100°C，灭酶活IOmin;重复以上酶解步骤3次，合并酶解液，冷 却，离心，3500r/min、IOmin;
[0047] 3)牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，活性炭 添加量为2. 0%，温度50°C，反应时间30min;再用酵母进行第二次脱腥，酵母添加量1. 5%， 温度30°C，发酵时间20min;
[0048] 4)牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加3 % 0 -环糊精进行包 埋脱苦，室温下搅拌15min，充分混合；
[0049] 5)脱色：加入3 %硅藻土脱色，控制温度70 °C，脱色处理2h，过滤；
[0050] 6)浓缩：将步骤5)得到的过滤液采用真空旋转蒸发进行浓缩，浓缩至至水分约为 20%，产品呈淡黄色膏状；
[0051] 7)调配：中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿10份、黄芪3份、 党参5份、山茱萸3份、熟地黄3份、枸杞子3份、远志8份、泽泻3份、甘草8份、茯苓1份， 混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时，提取两次，合并 提取液，微波辐射提取液l〇min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度0-4°C，过滤，离 心，3500r/min、10min，得上清液；
[0052] 将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按20:80混合，搅拌均匀，添加竹叶黄酮 0. 08%、中性植酸钠0. 05%、黄原胶0. 2%、果胶0. 2%组成的混合褐变抑制剂，再添加5% 由葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到复合调味剂，混合调配、过滤、分 装、灭菌得成品。
[0053] 实验例：药效学实验
[0054] 药效实验1 :对Wistar大鼠生精强肾的影响
[0055] 1、试验药品
[0056] 实施例1制成的牡蛎活性提取组合物。
[0057] 2、动物
[0058]Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重 200-250g。
[0059] 3、实验方法：
[0060] 选体重在200-220g的Wistar雄性大鼠40只，随机分为5组，每组8只，即正常 组、肾阳虚模型组、海洋生物营养液高、中、低剂量组，除了正常组外，其它4组造去势模型， 5%的水合氯醛（0.5mL/100g)麻醉下行双侧睾丸切除术，术后肌肉注射青霉素4万U，连续 注射3d以抗感染。高、中、低剂量分别按照牡蛎活性提取组合物（10. 0、5. 0、1.Og灌 胃，正常组、肾阳虚模型组仅灌服同体积的蒸馏水（0.lmL/Kg)。
[0061] 3. 1血清睾酮水平的测定
[0062] 大鼠称质量后，腹腔注射5%水合氯醛（0.51111710(^)，麻醉大鼠，断尾取血1.51^ 左右，待血液凝固后2000rap?mirT1，离心15min，分离血清，-20°C低温保存备用。使用倍克 曼公司生产的全自动化学发光免疫分析仪（DXI-800)及其配套试剂，在试剂定标周期和质 控范围内用全自动免疫分析仪，按照仪器操作程序检测大鼠血清睾酮水平。
[0063] 3. 2勃起潜伏期的测定
[0064] 于最后1次给药后lh，将电刺激仪的刺激电极置于大鼠阴茎部位（一电极放于尿 道外口，另一电极置于阴茎根部），用棉签蘸生理盐水湿润大鼠阴茎根部，以增强其导电性。 给予局部电刺激，电压6V，频率20Hz，波宽5ms，以秒表记录从刺激开始至阴茎勃起时间（勃 起潜伏期）。
[0065] 4、数据处理
[0066] 实验数据以（X土s)表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用oneway anova?^T〇
[0067]
[0068] 注与正常组相比P〈0. 01，*与模型组相比P〈0. 05
[0069] 5、结果与讨论
[0070] 去势大鼠模型动物实验结果表明，与正常对照组比，模型组大鼠阴茎勃起潜伏期 显著延长说明造模成功，而牡蛎活性提取组合物各剂量组均能不同程度地提高去势大鼠血 清睾酮水平，与去势模型组比较能显著缩短去势大鼠阴茎勃起潜伏期，提高去势大鼠阴茎 对外部刺激的兴奋性，表明本发明牡蛎活性提取组合物具有生精强肾功效。
[0071] 药效实验2:对雄性大鼠性功能的影响
[0072] 1、试验样品
[0073] 实施例1制成的牡蛎活性提取组合物。
[0074] 2、动物
[0075]Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，体重180-250g
[0076] 3、方法
[0077] 准备雌性Wistar大鼠（180±20g):实验前48小时皮下注射苯甲酸雌二醇注射液 20yg/只，4小时前再次经皮下注射黄体酮注射液500yg/只，以催情。
[0078]另准备雄性Wistar大鼠48只，按编号随机分为5组，设为空白对照组（蒸馏水）， 阳性对照组，本发明实施例1、2制成的牡蛎活性提取组合物高、中、低剂量组（10. 0、5.0、 I.Og^kg4)，灌胃给药，每日给药1次，连续给药10天。各组末次给药后24小时将雄性大鼠 单独放入笼中5分钟，使其适应新环境，然后每笼放入一只雌鼠，开始记录下列指标：（1)、 自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠的时间为扑捉潜伏期；（2)自雌鼠投入至雄鼠发生第一 次射精的时间为交配潜伏期；（3)记录20分钟内雄鼠扑捉雌鼠次数及射精次数；(4)计算 20分钟内各组发生扑捉及射精的动物数，扑捉率及射精率。
[0079] 4、结果与讨论
[0080] 牡蛎活性提取组合物各剂量组均有一定程度的提高雄性大鼠性功能的作用，扑捉 潜伏期和交配潜伏期明显缩短，扑捉次数和射精次数增多。表明本发明牡蛎活性提取组合 物可改善和提高性能高的作用。
[0081] 药效试验3 :毒性试验
[0082] 1、试验样品
[0083] 实施例1、2制成的牡蛎活性提取组合物。
[0084] 2、动物
[0085] 昆明种小鼠，雌雄各半，体重为18_22g。
[0086] 3、实验方法
[0087] 取本发明实施例1、2制备的牡蛎活性提取组合物对小鼠按I. 0mL/100g体重，每天 2次，观察连续给药15周，停药3周后小鼠毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功 能、血糖、血脂等指标。
[0088] 4、结果与讨论
[0089] 结果表明：本发明牡蛎活性提取组合物对小鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重 量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学 检查结果表明，连续给药15周，停药3周后，小鼠各脏器均无明显改变。表明本发明牡蛎活 性提取组合物对小鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，安全。
【主权项】
1. 一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于，包括如下步 骤： 1) 牡蛎脱苦处理：向新鲜牡蛎软体加入1倍重量0. 5%Na2CO3溶液，浸泡，过滤，用2-3 倍重量纯净水，反复冲洗过滤后的牡蛎软体部分； 2) 匀浆、酶解：向步骤1)得到的牡蛎软体中加入2倍重量的纯净水，制成匀浆，调节 pH6-7,加入木瓜蛋白酶酶解，酶解结束，灭酶；重复以上酶解步骤2-3次，合并酶解液，冷 却，离心； 3) 牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，再用酵母进 行第二次脱腥； 4) 牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加e-环糊精进行包埋脱苦； 5) 脱色：加入硅藻土脱色，过滤； 6) 浓缩：将步骤5)得到的过滤液浓缩； 7) 调配：将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按比例混合，搅拌均匀，添加混合褐变 抑制剂、复合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得成品； 所述的中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿5-10份、黄芪3-8份、党 参3-5份、山茱萸3-8份、熟地黄1-3份、枸杞子3-8份、远志5-8份、泽泻3-5份、甘草3-8 份、茯苓1-5份，混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时， 提取两次，合并提取液，微波辐射提取液l〇min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度 〇_4°C，过滤，离心，得上清液； 所述的混合褐变抑制剂为竹叶黄酮0. 08%、中性植酸钠0. 05%、黄原胶0. 2%、果胶0. 2% ； 所述的复合调味剂是将葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到，添加 量为2-5%。2. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法， 其特征在于：步骤2)所述的酶解，按重量加入木瓜蛋白酶的量为800-1000U/g，酶解温度 50°C，酶解时间4h。3. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其 特征在于：步骤3)所述的脱腥，活性炭添加量为2. 0%，温度50°C，反应时间30min;酵母脱 腥，酵母粉添加量1. 5%，温度30°C，发酵时间20min。4. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其 特征在于：步骤4)所述的二次脱苦，添加0 -环糊精3%，室温下搅拌15min，充分混合。5. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其 特征在于：步骤5)所述的硅藻土脱色，硅藻土添加量3%，控制温度70°C，处理l_2h。6. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其 特征在于：步骤6)所述的浓缩，浓缩至至水分为20%，产品呈淡黄色膏状。7. 根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其 特征在于：步骤7)所述的浓缩液与中药提取液按比例混合，按照15-20:80-85的重量比混 合。8. 权利要求1-7中任一项所述方法得到的牡蛎活性提取组合物。
【专利摘要】本发明公开了一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，具有生精强肾、改善和提高性功能。该组合物以牡蛎提取物为主要活性成分，配以淫羊藿、黄芪、党参、枸杞子、山茱萸、熟地黄、远志、泽泻、甘草、茯苓而成。采用特殊脱苦技术，木瓜蛋白酶解、活性炭联合酵母菌发酵脱腥，β-环糊精包埋联合海藻糖进行二次脱苦、硅藻土脱色、竹叶黄酮联合中性植酸钠再进行色泽优化，复合调味剂(葡萄糖+低聚果糖+木糖醇)优化口感，工艺先进，配方科学合理，营养成分完善，腥味较小，风味天然，具有生精强肾、抗疲劳、改善性功能、增强机体免疫力，可用于辅助性治疗肾阳虚或肾阴虚引起的阳萎、遗精、早泄等症。
【IPC分类】A61P15/10, A61K36/815, A61K35/618, A61P15/00
【公开号】CN104887713
【申请号】CN201510348593
【发明人】谭高琼, 黎冠宇
【申请人】广西北部湾海皇生物科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月23日