一种防治鸡球虫病的益生菌发酵中药制剂的制备及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种防治鸡球虫病的益生菌发酵中药制剂的制备及其应用。
【背景技术】
[0002] 鸡球虫病是当前养鸡业频发、高发、较难防治的主要疾病之一，本病分布广，感染 率高，常发生在15~50日龄的鸡，尤其以15日龄左右鸡最易感，几乎有养鸡的地方都有球虫 存在。据统计，其发病率达50%~70%，一旦发病死亡率可高达80%，且发病过的鸡生长发育迟 缓，产蛋性能下降，全世界每年因鸡球虫病造成的损失可达80亿美元，我国每年用于抗球 虫药的费用高达6亿~18亿美元。目前，防控鸡球虫病主要有药物防治和疫苗接种两种手 段。用于防治鸡球虫病的药物已达50余种，其中以化学药物为主，使用球虫疫苗可以防治 耐药性产生，但是强毒苗和弱毒苗可能造成球虫病原的扩散和毒力的返强，加上价格昂贵， 在我国较难推广，球虫基因工程疫苗目前还处于实验室阶段，由于球虫的抗原很复杂，对基 因工程疫苗研宄仍有很多难题。自中国加入WTO后，在讲宄绿色食品的今天，药物的毒性、 "三致"及残留日益受到人们的重视，一些毒性大、安全性低的化学合成抗球虫药物逐渐被 淘汰，国内外因此铭文禁止部分化学合成抗球虫药物的使用，而且要研宄生产一种新型的 高效、低毒、安全的化学合成抗球虫药物十分困难，且费用昂贵。
[0003] 药物残留、耐药性产生、疫苗防治的局限性等问题的出现，加之人们对绿色、安全 生活理念的追求重视，迫切需要我们研制一种安全、绿色无害防治鸡球虫病的方法。
[0004] 一直以来，中药因疗效好、无副作用、无残留及增强机体免疫力等特点被用于防治 各种疾病。多年来，研宄者们也验证了部分中药对鸡球虫具有杀虫、抑虫的作用，但效果不 尽人意。
【发明内容】
[0005] 本研宄根据中药抗鸡球虫病的防御机制，公开了一种防治鸡球虫病的益生菌发酵 中药制剂的制备及应用。该制剂以含有青蒿、常山、马鞭草、黄柏、苦参、郁金、栀子等中药为 原料作为培养液，并通过一种乳酸菌(戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，PP)发酵的发 酵液作为该制剂的有效成分。本发明用益生菌发酵中药水提物作目标组合物，即可促进中 药中多糖、淀粉、纤维素及药物活性成分进一步转化和分解，产生更有效地活性成分，又可 提高益生菌活性，有利于益生菌及其代谢产物的生长和释放，其抗球虫疗效显著高于纯中 药制剂，且每克产品的乳酸菌PP活菌数达2. OX 109cfu/g以上。
[0006] 本研宄是通过以下技术方案实现的： 一种防治鸡球虫病的益生菌发酵中药配方，由以下质量份的组分组成：青蒿12-18质 量份、常山12-18质量份、马鞭草8-12质量份、黄柏8-12质量份、苦参6-10质量份、郁金 6-10质量份、栀子6-10质量份、当归6-10质量份、陈皮4-8质量份、金银花4-8质量份、仙 鹤草4-8质量份。
[0007] 优选的，所述组份如下：青蒿15份、常山15份、马鞭草10份、黄柏10份、苦参8份、 郁金8份、栀子8份、当归8份、陈皮6份、金银花6份、仙鹤草6份。
[0008] 防治鸡球虫病的益生菌发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤， A、 提取上述中药有效成分，提取方法如下： 第一遍：加8倍中药体积水浸泡l_2h后，先用武火加热，待沸腾后再用文火加热lh，纱 布过滤得到初滤液； 药渣复煎2次： 第二遍：加5倍于第一遍药澄的体积水，煎煮50min，过滤，得二级滤液； 第三遍：加5倍于第二遍药渣的体积水，煎煮50min，过滤，得三级滤液； 合并二、三级滤液，先旋转蒸发低温浓缩后再与初滤液水浴浓缩后烘干得有效成分； 加水定容，得中药有效成分提取液，浓度为I g·!!!!/1，即每I mL相当于生药I g，冷藏 备用； B、 制备中药培养基底物： 向上述的中药有效成分提取液，加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏制成中药培养基底物； C、 高压灭菌冷却后，向中药培养基底物接种乳酸菌PP，培养制得益生菌发酵中药制剂。
[0009] 优选的，步骤B中制备中药培养基底物，按体积百分比向中药有效成分提取液中 加入以下成分：葡萄糖1%、蛋白胨〇. 5%、酵母膏0. 25%。
[0010] 优选的，乳酸菌PP接种量如下：按体积比3%接种2. OX 108cfu/mL的乳酸菌PP于 含有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏的中药底物培养基中。
[0011] 优选的，接种乳酸菌PP后在pH为6、37°C的温度下培养12h制得益生菌发酵中药 制剂。
[0012] 优选的，步骤C中121°C高压灭菌20min。
[0013] 本发明创造性的采用以下中药组合：青蒿、常山、马鞭草、黄柏、苦参、郁金、栀子、 当归、陈皮、金银花、仙鹤草。
[0014] 青蒿：清透虚热，凉血除蒸，除蒸，截疟。用于暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，骨蒸 劳热，疟疾寒热，湿热黄疸。
[0015] 常山：解热抗疟、功效分类、解毒药。
[0016] 马鞭草：活血散瘀，截疟，解毒，利水消肿。用于症瘕积聚，疟疾，喉痹，痈肿，水肿， 热淋。
[0017] 黄柏：性味苦寒，有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮之功效。
[0018] 苦参：用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿瘆，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣 麻风。
[0019] 郁金：活血止痛，行气解郁，清心凉血，利胆退黄。用于经闭痛经，胸腹胀痛、刺痛， 热病神昏，癫痫发狂，黄疸尿赤。
[0020] 栀子：热病心烦、肝火目赤、头痛、湿热黄疳、淋证、血痢尿血、口舌生疮、疮疡肿毒、 扭伤肿痛。
[0021] 当归：补血药；调经药；止痛药。
[0022] 陈皮：理气健脾，调中，燥湿，化痰。主治脾胃气滞之脘腹胀满或疼痛、消化不良。 湿浊阻中之胸闷腹胀、纳呆便溏。痰湿壅肺之咳嗽气喘。用于胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽痰 多。
[0023] 金银花：既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发瘆、发斑、热毒 疮痈、咽喉肿痛等证。
[0024] 仙鹤草：全草为强壮性收敛止血药，有强心、升血压、凝血、止血、凉血、抗菌等作 用。
[0025] 本发明的药理组合如下： 常山含有常山酮、青蒿中的青蒿素都能抑制或杀灭病原体活性，激发机体免疫力，增强 白细胞吞噬作用，促进抗体形成的作用；仙鹤草等具有涩肠止泻、凉血止血的功能，能缓解 由球虫病导致的出血、下痢，减缓感染鸡的临床症状。 中药因"绿色、安全、无毒无残留"等优点在防治动物性疾病的研宄中应用较为广泛，益 生菌作为一种新型绿色饲料添加剂，也以其独特的方式作用于动物机体，维持机体肠道微 生态平衡，增强机体免疫力等方面达到防病治病和促生长的目的。
[0026]目前，益生菌发酵中药的研宄较少，但疗效显著；中药作为益生菌的促生长因子， 为益生菌的生长提供营养，促进其繁殖，提高生长性能；且益生菌生长中产酸、产气及代谢 产物的释放有助于中药药效成分的转化、分解，产生更有效地活性成分，两者可相互协调， 达到优势互补的作用。
[0027] 综上，本发明创造性表现在以下几个方面： 1、采用新的中药组合，将中药的成分进行创造性的重组以及优化，提高其用于治疗球 虫病的功效，从实施例能看出，其抗球虫指数(ACI)与西药组相当，且明显优于纯中药制剂， 抗球虫效果相比纯中药制剂高一个等级；同时作为中药，中药的特点决定了药份的组成以 及含量不同，其治疗效果差别很大，因此本实施例也很难通过有限次的试验获得。
[0028] 2、创造性的将乳酸菌PP应用于治疗鸡球虫病，PP是新分离出的保藏菌种，有研宄 表明，乳酸菌PP有提高动物的生长性能的作用，但并没有其用于配合中药进行治疗鸡球虫 病的报道，通过实施例可以看出，相对于纯中药，其能够大幅提高治疗效果，且加上中药的 配合对鸡的其他身体健康特征不会造成影响，尤其相对于西药效果更为显著。
[0029] 3、利用中药提取成分加上葡萄糖、蛋白胨等制备中药培养基底物，一方面弥补中 药中营养成分的不均，为益生菌的生长提供充分的营养需求，最大程度保证益生菌的有效 生长和繁殖；另一方面为益生菌发酵中药中中药有效成分的重组、转化提供营养支持，保证 益生菌有效生长的同时中药活性成分的转化更为持久。
【附图说明】
[0030] 图1 :为给药一个疗程后益生菌发酵中药组肉鸡盲肠病理切片； 图2 :为给药一个疗程后纯中药制剂组肉鸡盲肠病理切片； 图3 :为给药一个疗程后感染不给药组肉鸡盲肠病理切片； 图4 :为给药一个疗程后对照组肉鸡盲肠病理切片； 图5 :为给药一个疗程后西药组肉鸡盲肠病理切片； 图6 :18-36日龄各试验组鸡血清中白/球比（A/G)含量变化趋势； 图7 :18-36日龄各试验组鸡总蛋白（TP)含量变化趋势； 图8 :18-36日龄各试验组鸡尿素氮（BUN)含量变化趋势。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0032] 实施例一益生菌发酵中药制剂的制备 1试验材料 1.1试验药物抗球虫中草药青蒿、常山、马鞭草、黄柏、苦参、郁金、栀子、当归、陈皮、金 银花、仙鹤草均购于山东省泰安市金泰联大药房。
[0033] 1. 2试验菌株乳酸菌：鼠李糖乳杆菌6133、植物乳杆菌7340、鼠李糖乳杆菌6-3、植 物乳杆菌LP、戊糖片球菌PP ;芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌Cl- 0155、枯草芽孢杆菌C1-0090、 纳豆芽孢杆菌C1-0048、枯草芽孢杆菌C1-0050、地衣芽孢杆菌C1-0309 ;上述菌株均由山东 宝来利来生物工