专利名称：：一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂及其制备方法
技术领域：
：本发明属于微生物制剂
技术领域：
，涉及一种用于牲畜的益生活菌微胶嚢制剂及其制备方法，同时也涉及活菌微胶嚢制剂的制备方法。
背景技术：
：1965年Lilley和Stillwell首先使用益生素(Probiotics)，将其定义为、、由一种微生物分泌，刺激另一种微生物生长的物质"。1974年，Parker认为、、益生素是维持肠道内微生物平衡的微生物物质〃.益生菌克服了非营养性添加剂特别是抗生素带来的负面效应，它是无污染、无残留、抗疾病、促进动物生长的天然添加剂，在饲料工业中得到了广泛的应用。一般认为益生菌就是指能够在生物体(主要是人和动物)内存活，对宿主的生命健康有益的一类微生物，一般把益生菌活菌制剂或含有微生物培养物的微生物制剂称作益生素。从上个世纪初人们就开始认识到微生物及其产物能够对机体产生影响，并且从细菌、真菌、酵母等微生物中筛选得到了许多被认为是益生菌的微生物。益生菌主要用于维持动物体内微生态系统的平衡，即在幼龄家畜尚未建立起良好的肠道微生物区系的情况下，使用益生菌减少动物生产损失；益生菌还能够部分替代抗菌药物,通过帮助恢复动物体内微生态系统的平衡，达到治疗动物疾病的目的。目前常用的益生菌有乳酸菌、凝结芽孢杆菌等，其有益效果在于1、对动物的营养作用乳酸菌能合成动物体所需的多种维生素，如硫胺素、核黄素、尼克酸、吡哆醇、泛酸、叶酸、维生素B12等。估计，盲肠上的微生物可提供动物维生素需要量的25%~30°/a，可基本满足机体对维生素的需要。乳酸菌产生的挥发性脂肪酸为大肠粘膜代谢提供了能源，也使肠道pH值和氧化还原电势降低，有利于矿物质钙、铁、镁、锌等的吸收。2、抑制病原菌的繁殖乳酸菌产生的乳酸、乙酸等酸性产物可抑制病原菌生长繁殖。乳酸菌能产生类细菌素物质，对病原菌有抑制作用。嗜酸乳杆菌产生的分子量为3500的肽，可以抑制大肠杆菌DM的合成，可抑制一系列革兰氏阳性和阴性病原体的生长。嗜酸乳杆菌可以产生11202，抑制葡萄球菌等致病菌的生长繁殖，还能产生双乙酰，这种化合物对许多病原菌有抑制作用。芽孢杆菌在其生长过程中能够产生乙酸、丙酸、丁酸等挥发性脂肪酸，这些酸类能够降低动物肠道pH值，可有效抑制病原菌生长。产生少量抗菌物质一杆菌肽，对有害微生物起抑制和杀灭作用。芽孢杆菌可以消耗大量的氧，维持肠道厌氧环境，抑制致病菌生长，平衡稳定乳酸菌的作用，维持肠道正常生态平衡。3、提高动物免疫力用乳酸杆菌发酵产物饲喂断奶仔猪，仔猪血清中IgG水平明显升高。4、凝结芽孢杆菌的特点和作用表现在稳定性好。耐酸、耐盐、耐高温(10(TC)及耐挤压，在制粒过程中及通过酸性胃环境均能保持高度稳定性，能产生维生素。芽孢杆菌在生长繁殖过程中能够产生Bl、B2、B6等B族维生素和维生素C、维生素K,为动物提供维生素。产生多种消化酶凝结芽孢杆菌具有分泌很强的蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶活性，从而可补充肠道内源酶的不足。还能产生植酸酶，促进动物对植酸磷的利用和对脂肪的消化吸收。产生的氨基氧化酶及分解硫化氢的酶类，可将巧l哚类氧化成无毒、无害的物质，从而降低畜禽舍内氨气、硫化氢的浓度和臭味，减少环境污染。关于菌体微胶嚢的研究，是近年来迅速发展的先进技术，它以自己独特的优点广泛地应用于许多领域。20世纪80年代就有研究者进行了乳酸菌的微胶嚢化探索，Pranee用海藻酸钠作为壁材对乳酸菌进行微胶嚢化，所得的微胶嚢用于乳酸的生产，生产性能良好，且这种乳酸菌微胶嚢可以重复使用。目前国外有关实验室报道可以利用乳酸菌微胶嚢化细胞进行混合益生菌发酵剂，酸奶，胞外多糖，乳酸，细菌素的生产。
发明内容本发明的一个目的在于提供由凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳杆菌、粪链球菌和载体按不同配比组合的益生活菌微胶嚢制剂。本发明另一个目的在于，公开了益生活菌微胶嚢制剂的制备方法，采用生物发酵的方法，经微胶囊制备，然后冷冻干燥制成活菌微胶嚢，然后再按照不同动物及不同生长阶段配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂成活菌微胶嚢制剂。本发明再一个目的在于公开了益生活菌微胶嚢制剂在治疗动物消化道疾病药物方面的应用。包括治疗幼畜腹泻、痢疾药物方面的应用。其中所述的幼畜主要指仔猪、仔鸡、幼年奶牛等等，同时也可以是成年猪、成鸡、成年奶牛。本发明还一个目的在于公开了益生活菌微胶嚢制剂在作为伺料添加剂预防幼畜腹泻和增加抵抗力方面的应用。为达到上述目的，本发明所采用的技术方案一种用于牲畜的益生活菌微胶嚢制剂，其特征在于它是由芯材、按各单菌的菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为1:2;芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为1:3;各单菌的菌悬液为凝结芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸乳杆菌和粪链球菌；活菌含量分别为嗜酸乳杆菌微胶嚢》1.0xl0'cfu/g;植物乳杆菌微胶嚢>1.0x10'cfu/g;凝结芽孢杆菌微胶嚢》1.0x109cfu/g;乳酸乳杆菌微胶嚢>1.0x10'cfu/g;粪链球菌微胶嚢>1.0x10'cfu/g。本发明所述的活菌微胶嚢制剂，其中所述的芯材为1:1的微孔淀粉与乳糖(重量份数比)混合物；包埋材料为3-4%的海藻酸钠溶液；氯化钙的浓度为3-4%水溶液；载体为1-1.5份玉米蛋白。本发明所述的活菌微胶嚢制剂，其特征在于所述活菌制剂的活菌总含量为1.0x109cfu/g以上，微胶嚢直径为1~2mm。本发明所述活菌微胶囊制剂的制备方法，按如下步骤进行(1)斜面菌种培养各菌种使用相应培养基并加入1.5-2.5%琼脂，在30-40t:条件下静止培养20-48小时，放入4'C冰箱保存；(2)液体一级种子培养为摇瓶培养，取250ml三角瓶加入种子培养基50-100ml,取斜面种子菌种1环，接入培养基中30-40X:,100-220r/minpm,培养30h;(3)液体二级培养1QL自动种子发酵罐，装种子培养基5-8L,接重量5-10°/。，30-4(TC，搅拌速度50-100转/分钟，培养30h;(4)各发酵罐单菌林纯培养条件温度25-4(TC，通风量9-13m7h，罐压0.02-0.09MPa，接种量1.5-7.5%,时间19-72小时，发酵液活菌数达到10s-109cfu/ml;各菌种的发酵培养基(g/L):嗜酸乳杆菌胰蛋白胨2.5-7.5g,蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉4-10gpH7.0;粪链球菌蛋白胨10-30g，牛肉膏10-30g，乳糖10-30g,pH6.8±0.2;凝结芽孢杆菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgS0r7H200.5-1.5g，K2HP041—3g，M跳50ug，pH7.0;植物乳杆菌蛋白胨5-15g,牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g,葡萄糖15-25g，柠檬酸二钠1.5-3.5g，K2HP0J-3g，醋酸钠2.5-7.5g，MgS04.7H20l-3g，MnS04.4H200.Olg吐温10ml,pH6.0-6.5;乳酸乳杆菌胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g,葡萄糖7.5-12.5g，，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g，pH7.0;(5)活菌微胶嚢的制备采用连续高速离心机离心收集上述各菌体，加入无菌水配制成1.0x10"cfu/mL菌悬液，然后加入微孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物，比例为1:2V/W，均匀搅拌100-200r/min30-60min;最后加入3-4%海藻酸钠无菌溶液比例为1:3V/V，通过胶嚢自动发生器将微粒滴入3-4%无菌氯化钙溶液中，固化1-2h，制成活菌微胶嚢；(6)过滤收集活菌微胶嚢，-5(TC预冻2-3h，真空冷冻干燥，制得干燥的活菌微胶嚢；(7)活菌计数测定干燥的活菌微胶嚢活菌含量为1.0xio9cfu/g以上，含水量低于8%;微胶嚢直径为l-2mm。(8)将制得的活菌微胶嚢加入l-l.5份载体玉米蛋白，然后按不同牲畜需求量配伍配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂，作为饲料添加剂，或作为治疗腹泻的兽药。其中的活菌微胶囊由下述重量份数的益生活菌微胶嚢组成凝结芽孢杆菌微胶嚢0.5-1份；嗜酸乳杆菌微胶嚢1~1.8份；植物乳杆菌微胶囊1-1.5份；乳酸乳杆菌微胶囊0.5-1.5份；粪链球菌微胶嚢Q.5-1份；其中各组分的活菌含量分别为嗜酸乳杆菌微胶嚢》1.0xio'cfu/g;植物乳杆菌微胶嚢>1.Ox10'cfu/g;凝结芽孢杆菌微胶嚢>1.Ox109cfu/g;乳酸乳杆菌微胶嚢>1.Ox10'cfu/g;粪链球菌微胶嚢>1.Oxl0'cfu/g。现有的益生菌活菌制剂，一般来说菌体都没有经过微胶嚢包埋，只是加入保护剂，冻干成粉，直接包装为饲料添加剂，或用一般的硬壳胶嚢包装，没有经过微胶嚢化的菌粉直接包装，制作成大胶嚢。这里所用的一般的胶嚢壁材，使得益生菌在肠道内不能迅速释放，定殖，不利于抑制有害菌的生长，从而不能有效地调节机体肠道菌群的平衡；或者，在胃里释放，因为菌体未经微胶嚢化，所以很快被胃液中的酸，消化酶，抗生素灭活，不能顺利地到达肠道，而微胶嚢化的益生菌可以有效解决胃酸，消化酶和抗生素等对活性菌引起的灭活的问题，使益生菌顺利地到达肠道并且立即释放和定殖。本发明进一步公开了益生活菌微胶囊制剂在作为飼料添加剂预防幼畜腹泻和增加抵抗力方面的应用。下面是针对不同动物的益生活菌微胶嚢制剂配比(表1)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>成年奶牛1.50.50.实验结果作为饲料添加剂预防和增加抵抗力用法益生活菌微胶嚢制剂以日粮重量的0.1-0.2%加入到仔鸡日粮中，仔鸡出壳后第二-三天开始祠喂至第15天停止。益生活菌微胶嚢制剂以日粮重量的0.02-0.04%加入到仔猪日粮中，仔猪出生后第五天开始飼喂，连续饲喂服用20至30天。将益生活菌微胶嚢制剂以日粮中粉状精饲料重量的0.03-0.06%加入到牛犊曰粮中，从牛犊出生后第七天开始，连续服用30至40天。显著提高幼畜体质，腹泻症状和白痢等患病率明显低于对照组。(表2)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本发明进一步公开了益生活菌微胶嚢制剂在治疗动物消化道疾病药物方面的应用。包括治疗幼畜腹泻、痢疾药物方面的应用。腹泻治疗用量发现黄、白痢疾及腹泻症状后，仔鸡按每公斤体重IOOO毫克益生活菌微胶嚢制剂加水溶解灌服，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。成鸡采用按每公斤体重400-500毫克益生活菌微胶嚢制剂加水溶解灌服，第1-2天日服用两次，以后每日服用一次直到病症消除后在持续服用两到三天。仔猪按每公斤体重100-200毫克益生活菌微胶嚢制剂加水溶解灌服，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。成猪按每公斤体重40-50毫克益生活菌微胶囊制剂拌入少量饲料内，直接采食，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。牛犊按每公斤体重500毫克益生活菌微胶嚢制剂拌入少量饲料内，直接采食，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。加水溶解灌服，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。成牛按每公斤体重200毫克益生活菌微胶嚢制剂拌入少量饲料内，直接采食，一日两次，直到病症消除，然后一日一次再持续服用两到三天。本发明与目前现有的各种益生活菌制剂相比，所具有的显著特点和积极效果在于(1)本发明所制备的益生活菌微胶嚢制剂，其组方合理，制作方法科学，使用范围广泛，操作简单，容易掌握，成本低，可用于各种畜禽作为饲料添加剂以提高饲料添加剂的利用率，同时也可以作为兽药使用，主要用于治疗幼畜腹泻、痢疾等肠道疾病并具有增强畜禽抗病的作用。(2)微胶嚢化有利于益生菌体菌体生长和代谢产物生产，微胶嚢化的菌体，质粒保持稳定性增强了，而且菌体抵抗抗生素，耐酸，耐胆盐的能力都有所提高，使益生活菌通过胃屏障，定殖于肠道。(3)经过微胶嚢化的益生菌可以避免由饲料中微量元素，金属离子，维生素等引起的一系列氧化还原、酸碱反应对益生菌活力的抑制作用。说明书附图图1为益生活菌微胶嚢制剂制作工艺流程图。具体实施例方式为了更充分的解释本发明，提供下述益生活菌制剂及其制备方法的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。实施例1本发明所用菌种来源和菌种相应使用的斜面培养基见下表(表3)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>一、凝结芽孢杆菌的制备(1)取凝结芽孢杆菌种于已加入1.5%琼脂，接种量5%的上述斜面培养基中，在25。C条件下静止培养20小时，放入4'C水箱保存。(2)转入摇瓶中，温度25。C，转速80转/分钟，接种量1%，培养19h。(3)液体二级培养的条件转入种子发酵罐中，装种子培养基5L，接重量5%，30°C，搅拌速度10转/分钟，培养3Qh。(4)发酵罐单菌抹纯培养条件凝结芽孢杆菌发酵培养基(g/L):蛋白胨5g，酵母膏5g，葡萄糖3g,MgS04.7Il200.5g,K2HP04lg,MnSOJOug,pH7.0。温度25"C，通风量9m7h,罐压0.02MPa，接种量1.5%，时间72小时，发酵液活菌数达到10s-10'cfu/ml;发酵液离心收集菌体。二、嗜酸乳杆菌的制备(1)取嗜酸乳杆菌于已加入1.5%琼脂，接种量5%的上述斜面培养基中，在25。C条件下静止培养20小时，放入4'C冰箱保存。(2)转入摇瓶中，温度25。C，转速180转/分钟，接种量l，培养19h。(3)液体二级培养的条件转入种子发酵罐中，装种子培养基5L,接重量5%,30°C，搅拌速度10转/分钟，培养30h。(4)发酵罐单菌林纯培养条件嗜酸乳杆菌发酵培养基(g/L):胰蛋白胨2.5g,蛋白胨5g，葡萄糖5g，，乳糖2.5g，酵母浸出粉4g，pH7.0。温度25X:,通风量9ffl7h，罐压0.02MPa,接种量1.5%,时间72小时，发酵液活菌数达到108-109cfii/ml;发酵液离心收集菌体。三、植物乳杆菌的制备(1)取植物乳杆菌于已加入1.5%琼脂，接种量5%的上述斜面培养基中，在35。C条件下静止培养48小时，放入4"C水箱保存。(2)转入摇瓶中，温度25。C，转速180转/分钟，接种量3%，培养19h。(3)液体二级培养的条件转入种子发酵罐中，装种子培养基5L，接重量5%，30X:,搅拌速度10转/分钟，培养3Qh。(4)发酵罐单菌抹纯培养条件植物乳杆菌发酵培养基(g/L):蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏3g，葡萄糖15g，柠檬酸二钠1.5g,K2HP04lg，醋酸钠2.5g，MgS04'7H20lg，MnSO,4H2O0.Olg吐温10ml,pH6.0。温度25°C,通风量9m3/h，罐压0.02MPa，接种量1.5%，时间72小时，发酵液活菌数达到10s-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。四、乳酸乳杆菌的制备(1)取乳酸乳杆菌于已加入1.5%琼脂，接种量5%的上述斜面培养基中，在35X:条件下静止培养48小时，放入4i:冰箱保存。(2)转入摇瓶中，温度25。C，转速180转/分钟，接种量3%，培养19h。(3)液体二级培养的条件转入种子发酵罐中，装种子培养基5L,接重量5%，3(TC，搅拌速度10转/分钟，培养30h。(4)发酵罐单菌抹纯培养条件乳酸乳杆菌发酵培养基(g/L):胰蛋白胨3.5g，蛋白胨7.5g，葡萄糖7.5g，乳糖2.5g，酵母浸出粉5g，pH7.0。温度25。C,通风量9mVh，罐压0.02MPa，接种量1.5%,时间72小时，发酵液活菌数达到108-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。五、粪链球菌的制备(1)取粪链球菌菌种于已加入2.5%琼脂，接种量10%的上述斜面培养基中，在35。C条件下静止培养20小时，放入4'C水箱保存。(2)转入摇瓶中，温度25。C,转速80转/分钟，接种量3%,培养19h。(3)液体二级培养的条件转入种子发酵罐中，装种子培养基5L，接重量5%,30°C,搅拌速度10转/分钟，培养30h。(4)发酵罐单菌抹纯培养条件粪链球菌发酵培养基蛋白胨10g，牛肉膏10g，乳糖10g，pH6.8土0.2。温度25C，通风量9m7h，罐压0.02MPa，接种量1.5%，时间72小时，发酵液活菌数达到108-10'cfu/ml;发酵液离心收集菌体。实施例2实施例中的斜面菌种培养—液体一级种子(摇瓶)培养-液体二级培养与实施例1相同不再重复。(1)凝结芽孢杆菌的制备发酵罐单菌林纯培养条件凝结芽孢杆菌发酵培养基(g/L):蛋白胨15g，酵母膏15g，葡萄糖9g，MgS047H201.5g,K2HP043g，MnSO450yg，pH7.0。温度40°C，通风量13m3/h，罐压0.09MPa，接种量7.5%,时间19小时，发酵液活菌数达到108-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。(2)嗜酸乳杆菌的制备发酵罐单菌抹纯培养条件嗜酸乳杆菌发酵培养基(g/L):胰蛋白胨7.5g，蛋白胨15g，葡萄糖15g，乳糖7.5g，酵母浸出粉10g，pH7.0。温度40。C，通风量13mVh，罐压O.09MPa，接种量7.5%，时间19小时，发酵液活菌数达到108-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。(3)植物乳杆菌的制备发酵罐单菌抹纯培养条件植物乳杆菌发酵培养基(g/L):蛋白胨15g,牛肉膏15g,酵母膏7g，葡萄糖25g,柠檬酸二钠3.5g，K2HP043g，醋酸钠7.5g，MgSO,7H203g，MnSO,4H200.Olg吐温10ml，pH6.5。温度40°C，通风量13m7h，罐压0.09MPa，接种量7.5%，时间19小时，发酵液活菌数达到108-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。(4)乳酸乳杆菌的制备发酵罐单菌抹纯培养条件乳酸乳杆菌发酵培养基(g/L):胰蛋白胨6.5g，蛋白胨12.5g，葡萄糖12.5g，，乳糖7.5g,酵母浸出粉9g，pH7.0。温度40。C，通风量13m7h，罐压O.09MPa，接种量7.5%,时间19小时，发酵液活菌数达到108-10'cfu/ml;发酵液离心收集菌体。(5)粪链球菌的制备粪链球菌发酵培养基蛋白胨30g，牛肉膏30g，乳糖30g，pH6.8±0.2。温度40。C，通风量13mVh，罐压0.09MPa,接种量7.5%，时间19小时，发酵液活菌数达到108-109cfu/ml;发酵液离心收集菌体。实施例3活菌微胶嚢的制备(1)将上述实施例l所得到的各个发酵液，采用连续高速离心机离心收集上述各菌体，加入无菌水配制成1.Ox1011cfu/mL菌悬液，然后加入微孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物，比例为1:2V/W，均匀搅拌100r/min，30min;最后加入3%海藻酸钠无菌溶液，比例为1:2V/V，通过胶嚢自动发生器将微粒滴入3%无菌氯化钙溶液中，静置lh,制成活菌微胶囊；(2)真空冷冻干燥过滤收集活菌微胶囊，-5(TC预冻2h,真空冷冻干燥，制得干燥的活菌微胶嚢；(3)活菌计数活菌计数测定干燥的活菌微胶嚢活菌含量为1.0x109cfu/g以上，加入1.5份玉米蛋白载体混合；(4)将制得的活菌微胶囊按不同牲畜需求量配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂，微胶嚢直径为lmm。实施例4将上述实施例1所得到的各个发酵液，采用连续高速离心机离心收集上述各菌体，加入无菌水配制成1.0x10"cfu/mL菌悬液，然后加入微孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物,比例为1:2V/W，均匀搅拌200r/min，60min;最后加入4%海藻酸钠无菌溶液，比例为1:2V/V,通过胶嚢自动发生器将微粒滴入4%无菌氯化钧溶液中，静置2h，制成活菌微胶嚢；真空冷冻干燥过滤收集活菌微胶嚢，-5(TC预冻3h,真空冷冻干燥，制得干燥的活菌微胶嚢；测定干燥的活菌微胶囊活菌含量为1.Oxio9cfu/g以上，加入l份玉米蛋白载体混合；将制得的活菌微胶嚢按不同牲畜需求量，装入硬壳胶嚢制成活菌微胶嚢制剂，微胶嚢直径为lmm。实施例5将上述实施例2所得到的各个超滤浓缩液，采用连续高速离心机离心收集上述各菌体，加入无菌水配制成1.Ox10"c/.丄菌悬液，然后加入微孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物，比例为1:2V/W，均匀搅拌200r/min，60min;最后加入4%海藻酸钠无菌溶液，比例为1:2V/V，通过胶嚢自动发生器将微粒滴入4%无菌氯化钙溶液中，静置2h，制成活菌微胶嚢；真空冷冻干燥过滤收集活菌微胶囊，-50°(:预冻3h，真空冷冻干燥，制得干燥的活菌微胶嚢；测定干燥的活菌微胶嚢活菌含量为1.Ox1(Tcfu/g以上，加入1.5份玉米蛋白栽体混合；将制得的活菌微胶嚢按不同牲畜需求量，配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂，微胶嚢直径为2mm。实施例6按重量份数取嗜酸乳杆菌微胶嚢1.5份，粪链球菌微胶嚢1份，植物乳杆菌微胶嚢1份，凝结芽孢杆菌微胶嚢1份，乳酸乳杆菌微胶嚢1.5份，上述各组份与1.5份玉米蛋白载体混合均匀，制成益生活菌微胶嚢制剂，用于仔猪腹泻的预防和治疗。实施例7按重量份数取嗜酸乳杆菌微胶嚢1份，粪链球菌微胶嚢1份。植物乳杆菌微胶嚢1.5份，凝结芽孢杆菌微胶嚢0.5份，乳酸乳杆菌微胶嚢0.5份，上述各组份与1份玉米蛋白载体混合均匀，制成益生活菌微胶嚢制剂，用于牛犊腹泻的预防和治疗。实施例8对比实验情况将活菌微胶嚢制剂仔鸡日粮重量的0.2%加入到日粮中搅拌均匀，仔鸡为2-3日龄，让仔鸡自由采食观察生长情况。动物实验将200只肉鸡分A，B两组，A组为对照组，B组为实验组，每组各100只，进行肉鸡生长速度的对比实验。B组按重量比0.2%的比例向饲料中拌入活菌微胶嚢制剂，其中活菌微胶嚢和伺料的重量比为2:1000，使每克日粮中的活菌数》2x106个。试验期为2-17日龄。试验结果是B组的平均日增重高于A组15.32。/。，P〈0.01。实施例9活菌微胶嚢中活菌的存活情况:将实施例4一7得到的活菌微胶嚢制剂在常温下贮存60天，测定微胶囊的益生活菌存活情况，结果如下(表4)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>从结果可知，本发明提供的活菌微胶嚢制剂在常温下非常的稳定，|&存300天后仍可保持益生活菌活性大于80%。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。权利要求1、一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂，其特征在于它是由芯材、各单菌的菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为1∶2；芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为1∶3；各单菌的菌悬液为凝结芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸乳杆菌和粪链球菌；活菌含量分别为嗜酸乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；植物乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；凝结芽孢杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；乳酸乳杆菌微胶囊≥1.0×109cfu/g；粪链球菌微胶囊≥1.0×109cfu/g。2、如权利要求l所述的活菌微胶嚢制剂，其中所述的芯材为重量份数比为l:l的微孔淀粉与乳糖混合物；包埋材料为3-4%的海藻酸钠溶液；载体为1-1.5份玉米蛋白。3、如权利要求l所述的活菌微胶嚢制剂，其特征在于所述活菌制剂中活菌总含量为l.OxlO'cfu/g以上；微胶囊直径为l-2mm。4、权利要求1所述活菌微胶嚢制剂在作为饲料添加剂预防幼畜腹泻和增加^氏抗力方面的应用。5、权利要求l所述活菌微胶嚢制剂在制备治疗幼畜腹泻方面的应用。6、一种制备权利要求1-5任一项所述活菌微胶嚢制剂的方法，其特征在于按如下步骤进行(1)益生活菌的培养将各菌体使用相应斜面菌种培养，经液体一级种子培养，液体二级培养，发酵罐单菌抹纯增殖培养；(2)活菌微胶嚢的制备采用连续高速离心机离心收集上述各菌体，加入无菌水配制成l.OxlO"cfu/mL菌悬液，然后加入^t孔淀粉与乳糖(1:1W/W)混合物，比例为l:2V/W，均匀搅拌100-200r/min30-60min;最后加入3-4%海藻酸钠无菌溶液比例为1:3V/V，通过胶囊自动发生器将微粒滴入3-4%无菌氯化钾水溶液中，固化l-2h，制成活菌微胶嚢；(3)过滤收集活菌微胶嚢，-S0。C预冻23h，真空冷冻干燥，制得干燥的活菌微胶嚢；(4)活菌计数测定干燥的活菌微胶嚢活菌含量为l.Oxl(fcfu/g以上，加入l-1.5份玉米蛋白载体混合；(5)将制得的活菌微胶嚢按不同牲畜需求量，配比混合均匀，制成活菌微胶嚢制剂。7、如权利要求6所述的制备方法，其中的活菌微胶嚢由下述重量份数的益生活菌微胶嚢组成凝结芽孢杆菌微胶嚢O.5-l份；嗜酸乳杆菌微胶嚢l~1.8份；植物乳杆菌微胶嚢l~1.5份；乳酸乳杆菌微胶嚢O.5-1.5份；粪链球菌微胶嚢O.5-l份；其中各组分的活菌含量分别为嗜酸乳杆菌微胶嚢M.0xl09cfu/g;植物乳杆菌微胶嚢>1.Oxl09cfu/g;凝结芽孢杆菌微胶嚢>1.Oxl09cfu/g;乳酸乳杆菌微胶嚢>1.0xl09cfu/g;粪链球菌微胶嚢>1.OxlO'cfu/g。8、如权利要求6所述的制备方法，其中各发酵罐单菌抹纯培养条件温度25-4(TC，通风量9-13m7h，罐压O.02-0.09MPa,接种量l.5-7.5%,时间19-72小时，发酵液活菌数达到10S-10'cfu/ml;其中益生活菌的发酵培养基(g/L):凝结芽孢杆菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g,MgS(V7H200.5-1.5g，K2HP04l-3g,MnSO450|jg,pH7.0;植物乳杆菌蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，柠檬酸二钠l.5-3.5g,UlP04l-3g，醋酸钠2.5-7.5g,MgS04.7H20l-3g，MnSO,4H200.Olg吐温10ml，pH6.0-6.5。全文摘要本发明涉及一种用于牲畜的益生活菌微胶囊制剂及其制备方法。它是由芯材、菌悬液、包埋材料和载体组成；其中菌悬液与芯材的重量份数比为1∶2；芯材与菌悬液所形成的混合液与包埋材料的体积比为1∶3。所述的菌悬液是采用微生物发酵法经离心制备，再由芯材吸附和包埋制成微胶囊，然后冷冻干燥制成活菌微胶囊，再按照不同动物及不同生长阶段配制成活菌微胶囊制剂。其主要技术特点是具有使用安全、无残留、不产生抗药性，在动物小肠内存活率高，存活时间长的特点，可作为饲料添加剂或治疗动物腹泻的兽药使用。文档编号A61P37/04GK101112397SQ20071005862公开日2008年1月30日申请日期2007年8月9日优先权日2007年8月9日发明者丁友昉,周念闽,王德培申请人:天津科技大学;唐山赛纳生物技术服务有限公司