一种microRNA在制备治疗前列腺癌的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种microRNA在制备治疗前列腺癌的药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 前列腺癌是男性生殖中最常见的恶性肿瘤，发病随年龄而增加，仅次于肺癌，是男 性因癌症死亡的第二大原因。2009年，美国估计有192280例前列腺癌新发患者和27360例 死亡患者。由于我国人口老龄化，前列腺癌发病率有所增加。临床上，手术或放疗针对局限 前列腺癌是有效的，但是对于转移者是不可治愈的，针对转移性前列腺癌治疗仍然缺乏有 效的药物。miRNA是调苄基因表达的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平对基因表达进 行调控，参与细胞周期、凋亡、发育、分化和新陈代谢等生理过程。miRNA在细胞中表达失调 会导致癌症在内的多种疾病的发生，最新研究表明，一些miRNA在前列腺中异常表达，但何 种miRNA与前列腺癌的发生、发展有关仍未达成共识。
[0003] 因此有必要寻找与前列腺癌发生、发展有关的miRNA，从而为临床上治疗转移性前 列腺癌提供一种有效手段。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种抑制前列腺癌发展的含有miRNA的药物组合物，为临 床上治疗转移性前列腺癌提供可能。
[0005] 本发明的发明人在对前列腺癌的转移机制进行研究的过程中发现miR-487在前 列腺癌上皮细胞系PC-3、DU145细胞中表达显著性降低，同时发现miR-487能够抑制癌细胞 增殖和迀移、促进细胞凋亡，miR-487能够抑制裸鼠体内前列腺肿瘤细胞的转移。前列腺癌 细胞中miR-487的表达量高低可作为癌细胞转移的一个分子标记物。
[0006] 本发明的一个方面提供了miR-487在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，所述 miR-487的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0007] 可选的，所述应用包括制备抑制前列腺癌细胞迀移、侵袭和增殖的药物。
[0008] 可选的，所述应用包括将miR-487与载体结合后与抗肿瘤药物和/或药物可接受 的辅料复配制成药物组合物。
[0009] 本发明的一个方面提供了miR-487在制备抑制前列腺癌细胞高转移性细胞系 PC-3和/或DU145的迀移能力的药物中的应用。
[0010] 本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物以miR-487为活性成分，其中， 所述miR-487的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
[0011] 可选的，所述药物组合物含有与载体结合的miR-487和/或药物可接受的辅料。
[0012] 在本发明所提供的药物组合物中，载体可以为本领域常用的适合于miRNA在宿主 细胞中表达的载体种类，例如，所述载体可以为脂质体、壳聚糖或慢病毒表达载体。
[0013] 在本发明的一种实施方式中，所述表达载体为慢病毒表达载体，优选的，所述慢病 毒表达载体可以为pWPXL、pMD2. G或psPAX2慢病毒表达载体。
[0014] 在本发明的一个优选的实施方案中，所述药物组合物还任选地包含一种或多种其 他对前列腺癌有效的肿瘤药物，可选的，所述药物组合物中含有铂类抗肿瘤药物，还可以包 含以铂类抗肿瘤药为基础的联合化疗方案中常规使用的其他肿瘤药物，这些其他肿瘤药物 是本领域技术人员所熟知的。
[0015] 可选的，所述抗肿瘤药物为顺铂或卡铂。
[0016] 当将miR-487与铂类抗肿瘤药物联合使用时，铂类抗肿瘤药物的用量可以减少至 常规化疗方案中用量的20-80%。
[0017] 本发明中，所述药物组合物的给药途径为静脉内、动脉内灌注或局部注射等，也可 以采用本领域技术人员所熟知的靶向给药技术进行睾丸或肿瘤靶向给药。
[0018] 本发明所提供的药物组合物能够通过miR-487对前列腺癌细胞转移能力的抑制 作用来抑制前列腺癌的发展过程，抑制效率高达80%。见图5.
【附图说明】
[0019] 图1为miR-487抑制细胞增殖及克隆成球。
[0020] 其中，（A)为 miR-487 转染 PC-3, Q-PCR 检测 miR-487 的表达量；（B)为 miR-487 转 染PC-3后检测细胞增殖；(C)为克隆成球能力检测。
[0021] 图2为miR-487能够促进前列腺癌细胞凋亡结果图。
[0022] 其中，（A)为miR-487转染PC-3后，Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡；(B) 为凋亡细胞数目量化图。
[0023] 图3为miR-487抑制前列腺癌细胞迀移和侵袭结果图。
[0024] 其中，（A-D)为miR-487转染PC-3细胞，细胞刮痕实验检测细胞迀移；(E)为 miR-487转染PC-3细胞，transwell实验检测细胞迀移；(F)为miR-487转染PC-3后， transwell实验检测细胞侵袭。
[0025] 图4为Western blot检测细胞迀移侵袭相关蛋白分子变化。
[0026] 其中，㈧为PC-3转染miR-487后细胞形态发生变化。⑶为western blot检测 miR-487转染PC-3后E-cad和N-cad的表达变化。
[0027] 图5为经过转化miR-487后的PC-3细胞接种到裸鼠皮下的成瘤情况
【具体实施方式】
[0028] 下面将通过【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0029] 在本发明中，术语"miR-487"是指包含SEQIDNo.1所示序列或其同源序列的微 小RNA。本领域中已知各种来源的miR-487,例如，人、鼠、兔等，这些同源序列均包含在本发 明的术语miR-487中。本发明的术语中还包含上述天然存在的miR-487序列经取代、缺失 或添加一个或几个核苷酸，或经过生物学化学修饰后仍具有miR-487生物活性的衍生RNA。 本发明中，人工合成的以及可以通过购买市售商品方式获得的具有miR-487生物学活性的 miR-487模拟物也属于本发明的保护范围。
[0030] 此外，本发明所述的miR-487也可以为前体形式，miR-487前体是指在被施用对象 的细胞内或体内可以被加工成为miR-487的前体。获得天然存在的miR-487前体的方法为 本领域技术人员所公知。
[0031] 本领域技术人员公知，miR-487的初始转录产物经过一系列的加工后，形成成熟的 miR-487。miR-487前体只有在加工成成熟的miR-487后才具有相应的生物学功能。
[0032] 本发明所提供的组合物可以用于治疗前列腺癌。所述组合物中含有有效量的本发 明的 miR-487。
[0033] 在本发明中，所述药物可接受的辅料包括各种赋形剂、稀释剂和佐剂。辅料其本身 并不是必要的活性成分，且使用后没有过分的毒性。这类辅料包括但不限于：生理盐水、缓 冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇等。
[0034] 在本发明的一种实施方式中，所述组合物的形式适合于：直接裸microRNA注射 法、脂质体包裹RNA直接注射法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法或复制缺陷腺病毒携带目的 DNA法等。
[0035] 本发明的miR-487的有效剂量可以随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等 进行相应的调整。优选的有效