制备
[0060] 精密称定lg25 %的甘草炮制雪胆样品置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40mL，密 塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，用〇. 45 μ m微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液，备用。
[0061] 2. 2. 4精密度实验
[0062] 精密度实验，以同一浓度标准品连续6次，记录雪胆素甲峰面积。
[0063] 表2雪胆素甲精密度实验结果
[0065] 结果：雪胆素甲峰面积RSD为1. 66%，说明仪器精密度良好。
[0066] 2. 2. 5稳定性实验
[0067] 样品稳定性实验，以样品提取后的溶液在不同时间点进样测定，记录雪胆素甲的 峰面积，以评估样品的稳定性。
[0068] 表3稳定性实验结果
[0070] 结果：雪胆素甲峰面积RSD为1. 10%，说明样品在提取后的12h以内稳定性良好。
[0071] 2. 2. 6重复性实验
[0072] 取同一样品平行提取6份，注入仪器分析，记录雪胆素甲峰面积。
[0073] 表4雪胆素甲精密度实验结果
[0075] 结果：雪胆素甲RSD为2. 09%，说明样品提取方法的重现线性良好。
[0076] 2. 2. 7加样回收率
[0077] 加样回收试验是考察样品测定结果的准确性，减半称量已知含量的样品6份，加 入一定量的对照品，参与提取过程，提取液注入液相色谱仪记录实验数据，计算实际测得的 量减去已知样品中的量再与对照品加入的量的比值。
[0079] 表5雪胆素甲加样回收实验结果
[0080]
[0081] 结果：根据公式得雪胆素甲加样回收率为96. 51%~101. 70%所得数据准确度较 商。
[0082] 2. 2. 8炮制前后样品雪胆素甲含量测定（见图1-图3)
[0083] 表6生品雪胆素甲含量结果
[0085] 表7制品雪胆素甲含量结果
[0087] 生品雪胆素甲的含量为0. 1639 %~0. 1727%，制品雪胆素含量为0. 1526 %~ 0. 1649 %，结果表明雪胆经甘草汁制后雪胆素甲的含量有所降低。
[0088] 以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
[0089] 试验例1本发明药物抗炎实验 [0090] 1实验动物
[0091] 清洁级昆明小鼠，体质量18~22g，由四川达硕动物实验中心提供。实验动物生产 许可证号：SCXK (川）2013-24。
[0092] 2实验试药
[0093] 生品：取雪胆样品，加10倍量水，提取2次，每次30min，过滤，滤液浓缩至含雪胆 0. 2g/ml和0. lg/ml，分别为高剂量组和低剂量组，待用。
[0094] 炮制品：取甘草片或碎块，加适量水，煎汤去渣，加入净雪胆，用文火炒至微干，取 出，瞭干。
[0095] 每IOOkg净雪胆，用甘草25kg。
[0096] 取上述炮制品，加10倍量水，提取2次，每次30min，过滤，滤液浓缩至含至含雪胆 0. 2g/ml和0. lg/ml，分别为高剂量组和低剂量组，待用。
[0097] 阿司匹林混悬液：阿司匹林（石家庄康力药业有限公司，批号120923)打粉，过 100目筛，用蒸馈水配制成浓度为0. 025g/mL的混悬液，备用。
[0098] 3实验方法与结果
[0099] 3. 1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
[0100] 昆明小鼠取雄性60只，随机分为：生理盐水组、阿司匹林组（0. 5g/kg)、雪胆生品 高剂量组（4g/kg)、雪胆生品低剂量组（(2g/kg)、雪胆炙品高剂量组（4g/kg)、雪胆炙品低 剂量组（(2g/kg)剂量组,每组10只,各组动物以相应药物0. 2ml/10g灌胃，每日一次,连续 3d，末次灌胃2h后，于右耳耳廓正反两面均匀涂抹0. 15ml二甲苯致炎，45min后处死，剪下 左右两耳，用直径9_的打孔器在小鼠左右两耳廓同一位置打孔取样，及时称重，按照下面 的算式计算：
[0101] 肿胀度和抑制率:抑制率=(生理盐水组肿胀度一给药组肿胀度）/生理盐 水组肿胀度X 100%
[0102] 肿胀度=右耳片重一耳片重
[0103] 表8雪胆炮制前后对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响（λ-土s,n==10)
[0105] 注：与空白组比较*P〈0. 05, #P〈0. 01 ;与等剂量雪胆生品比较，#P〈0. 05， ##Ρ〈0· 01。
[0106] 结果表明，与空白组比较，雪胆炮制前后对二甲苯所引起的小鼠耳廓肿胀均有一 定的抑制作用（ρ〈0.01)。与同剂量雪胆生品比较，雪胆炙品高剂量组对小鼠耳廓肿胀的抑 制作用具有显著性差异（Ρ〈〇. 05)，低剂量组无统计学差异，但结果显示雪胆炙品低剂量的 治疗效果更好。
[0107] 3. 2对鸡蛋清致大鼠足跖肿胀的影响
[0108] 昆明小鼠，雄性，60只，随机分为：生理盐水组、阿司匹林组（0.5g/kg)、雪胆生品 高剂量组（4g/kg)、雪胆生品低剂量组（(2g/kg)、雪胆炙品高剂量组（4g/kg)、雪胆炙品低 剂量组（(2g/kg)剂量组,每组10只,各组动物以相应药物0. 2ml/10g灌胃，每日一次,连续 3d，末次灌胃0. 5~Ih后自大鼠足跖中部皮下注入10%新鲜鸡蛋清0. lml，分别于注入后 l、2、3、4h用上述方法测定其右后足容积，计算足跖肿胀率，比较对照组和给药组的差异情 况，结果见表
[0109] 足跖肿胀率（％) =(肿胀后各时间点足容积一原始足容积）/原始足容 积 X 100%
[0110] 表9雪胆炮制前后对鸡蛋清致大鼠足跖肿胀的影响P士SJfi=IO)
[0112] 注：与空白组比较*P〈0. 05, #P〈0. 01 ;与等剂量雪胆生品比较，#P〈0. 05， ##Ρ〈0· 01。
[0113] 结果表明，与空白组比较，雪胆炮制前后对鸡蛋清所引起的大鼠足肿胀度在1~ 4h内均有一定的抑制作用（P〈0. 05~0. 01)，且止痛作用随着时间延长而增强；与等剂量雪 胆生品比较，雪胆炙品对大鼠足跖肿胀的抑制作用有显著差异（P〈〇. 05~0. 01)，炙品效果 更强，且起效快，作用时间长。
[0114] 试验例2本发明药物镇痛实验
[0115] 1实验动物
[0116] 清洁级昆明小鼠，体质量18~22g，由四川达硕动物实验中心提供。实验动物生产 许可证号：SCXK (川）2013-24。
[0117] 2实验试药
[0118] 生品：取雪胆样品，加10倍量水，提取2次，每次30min，过滤，滤液浓缩至含雪胆 0. 2g/ml和0. lg/ml，分别为高剂量组和低剂量组，待用。
[0119] 炮制品：取甘草片或碎块，加适量水，煎汤去渣，加入净雪胆，用文火炒至微干，取 出，瞭干。
[0120] 每IOOkg净雪胆，用甘草25kg。
[0121] 取上述炮制品，加10倍量水，提取2次，每次30min，过滤，滤液浓缩至含雪胆 0. 2g/ml和0. lg/ml，分别为高剂量组和低剂量组，待用。
[0122] 阿司匹林混悬液：阿司匹林（石家庄康力药业有限公司，批号120923)打粉，过 100目筛，用蒸馈水配制成浓度为0. 025g/mL的混悬液，备用。
[0123] 2.1热板法
[0124] 筛选合格小鼠：小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间（秒）作为该鼠的痛值 阀。凡舔后足时间小于5s或大于30s或跳跃者弃之。
[0125] 小鼠60只，雌性，雪胆生品高剂量组（4g/kg)、雪胆生品低剂量组（(2g/kg)、雪胆 炙品高剂量组（4g/kg)、雪胆炙品低剂量组（(2g/kg)剂量组，对照组（生理盐水），阳性对 照组用阿斯匹林〇. 5g/kg，给药前先测定每只小鼠的痛阈值两次，取两次的平均值为给药前 痛阈值。各组灌胃给药，灌胃体积为（l〇ml/kg)。连续给药3d，末次小鼠按剂量灌胃给药 30min后，将小鼠放入热板测痛仪内，热板温度为（55±0.5)°C，自小鼠投入热板至出现舔 后足的时间为该鼠的痛阈值，每隔30min(4次）测一次（60s仍无反应，以60s计），求出平 均痛阈值进行统计。
[0126] 痛阈提高率=(用药后平均痛阈值一用药前平均痛阈值）/用药前平均痛阈 值 X 100%
[0127] 表10雪胆炮制前后对热刺激所致小鼠疼痛的影响(.r±s，n=10)
[0129] 注：与空白组比较*P