氧乙締单硬脂酸醋，600转/分钟揽拌1小时，制成囊屯、 溶液；
[0053] (2)另取卵憐脂/胆固醇复配物(质量比2/l)30g，用丙酬制成质量浓度5%的囊材 溶液，加入囊材质量〇.15g的竹红菌甲素和0.3g单硬脂酸甘油醋，800转/分钟揽拌1.5小时 制成混合物溶液；
[0054] (3)将囊屯、溶液滴加到混合物溶液中（滴加速度为50滴/min) ,3000转/分钟揽拌1 小时;过0.4wii微孔滤膜，滤液在40°C和0.08个大气压下减压蒸出丙酬0.5小时，-50°c冷冻 干燥5小时，制得光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂46g。
[0化5] 实施例6
[0056] (1)将蛇毒多肤lOg，用50g的pH为5的憐酸缓冲液溶解，加入0.1?醋酸锋，500转/ 分钟揽拌揽拌4.5小时;加入0.05g吐溫60，800转/分钟揽拌0.5小时，制成囊屯、溶液；
[0057] (2)另取卵憐脂-胆固醇3:1质量比复配物lOg，用乙醇制成质量浓度1%的囊材溶 液，加入0.0 lg脱儀叶绿酸和0.05g司盘60，1500转/分钟揽拌0.5小时，制成混合物溶液；
[0058] (3)将囊屯、溶液滴加到混合物溶液中（滴加速度为60滴/min) ,4000转/分钟揽拌 0.5小时;过0.3皿微孔滤膜，滤液在60°C和0.02个大气压下减压蒸出乙醇1.2小时，-40°C冷 冻干燥7小时，制得光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂23g。
[0化9] 实施例7
[0060] 实施例1-6制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂的粒径和包封率实验
[0061] 方法:采用2010年中国药典第二部附录IXE粒度和粒度分布测定方法第=法光散 射法测定纳米粒径；用二氯甲烧溶解囊材，用等量水萃取，采用BCA试剂盒测定水萃取液中 的蛋白含量，计算样品中的蛋白量，包封率=样品中的蛋白量/蛇毒多肤用量X 100%。
[0062] 结果:光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂粒径范围在300~500nm之间，包封率在75~ 85%。结果见表1。
[0063] 运表明该采用实施例1~6法制得的光控蛇毒多肤锋纳米制剂粒径分布较均匀，具 有较高的包封率。
[0064] 表1光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂粒径分布和包封率
[0066] 实施例8
[0067] 实施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂的光控释药实验
[006引实验方法：取2g实施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂，加入到50mL pH= 7.5憐酸缓冲液中，揽拌转速50;rpm。每隔1小时取样ImL，并补回ImL抑=7.5憐酸缓冲 液，直至12h。将样品采用BCA试剂盒测定蛋白质浓度，计算累积释放率。同时测定实施例1、 2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂在30W白识灯照射下的累积释放率。
[0069] 实验结果:实施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂在无光照下释药缓 慢，8~IOh后累计释药80%，但光照后，其在5~化释药达90%，表明光照加速了药物释放。 结果见图1，图1为实施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂在光照下的累积释放 率(即累积释药率）。
[0070] 本发明的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂具有显著镇痛作用，通过W下实验得W证 实。
[0071] 实施例1、2、3制得的光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂对小鼠的镇痛实验
[007^ 方法:将昆明种小鼠置于(55 ± 0.5) °C热板上，观察和记录小鼠开始放在热板上至 添后足的时间作为痛反应潜伏期，选取痛反应潜伏期为10~25s范围内的雌性小鼠90只，随 机分为9组，每组10只。第I组腹腔注射生理盐水(O.lml/lOg)，为阴性对照组;第2组ip吗啡 lOmg/kg，为阳性对照组;第3~8组分别ip光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂(2mg/kg)无光照组 和光照组，光照组在给药后给予小鼠30W白识灯光照1小时；第9组ip蛇毒镇痛多肤原药组 2mg/kg。分别于给药后2,4h，她测定痛阔值小鼠祿后足时在热板上的停留时间为痛阔 值）。如小鼠在热板上停留60s后仍无痛反应，应立即取出，按60s计算。比较给药组和对照组 的差异情况。结果见表2。
[0073] 结果：与阴性对照组相比，各给药组在给药后不同时间点出现的祿足的潜伏期均 明显延长。光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂组的小鼠出现祿足的潜伏期初期小于蛇毒镇痛多 肤原药组，但4h后显著变长;光照组4h释药显著加快。提示本发明的光控祀向蛇毒多肤锋纳 米制剂具有光照加强镇痛的作用。
[0074] 表2光控祀向蛇毒多肤锋纳米制剂对热板所致的小鼠痛阔的抑制实验
[0076]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂，其特征在于：由含中药光敏剂的囊壳和含蛇毒 镇痛多肽锌配合物的囊心组成。2. 根据权利要求1所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以 下步骤： (1) 将蛇毒多肽用磷酸或醋酸缓冲液溶解，加入锌盐，搅拌，加入乳化剂，继续搅拌，得 到囊心溶液； (2) 将囊材用有机溶剂，配成囊材溶液;加入中药光敏剂、乳化剂，搅拌，得到混合物溶 液； (3) 将囊心溶液滴加到步骤(2)的混合物溶液中，搅拌，过微孔滤膜，滤液，旋转蒸出溶 剂，冷冻干燥，得到光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂。3. 根据权利要求2所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤 (1)所述的蛇毒多肽为眼镜蛇毒或複蛇毒中分尚的镇痛多肽，分子量为7000~14000Da; 步骤(1)所述的乳化剂为吐温60、聚氧乙烯硬脂酸酯或蔗糖脂肪酸酯中的一种以上； 步骤（1)所述锌盐为醋酸锌;步骤(2)所述的囊材为卵磷脂/胆固醇复配物、聚乳酸乙醇 酸、聚乙丙交酯PLGA75、聚乙丙交酯PLGA50或聚乙丙交酯PLGA85的一种以上； 步骤(2)所述中药光敏剂为脱镁叶绿酸、姜黄素、竹红菌素的一种以上;步骤(2)所述乳 化剂为司盘60、单硬脂酸甘油酯或月桂酸单甘油酯中的一种以上。4. 根据权利要求3所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于:所述卵 磷脂/胆固醇复配物中卵磷脂:胆固醇质量比为(2~3): 1; 所述竹红菌素为竹红菌甲素或竹红菌乙素一种以上。5. 根据权利要求2所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤 (1)所述磷酸或醋酸缓冲液的用量为蛇毒多肽质量的3~5倍，所述磷酸或醋酸缓冲液的pH 为4~6;步骤（1)所述锌盐的用量为蛇毒多肽质量的0.5~2%;步骤（1)所述乳化剂的加入 量为蛇毒多肽质量的0.5~3% ; 步骤(2)所述中药光敏剂加入量为囊材质量的0.1~1 %，所述乳化剂加入量为囊材质 量的0.5~3%; 步骤(3)所述囊心溶液与混合物溶液的质量比为1: (1~20)。6. 根据权利要求2所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤 (1) 所述搅拌转速为200~500转/分钟，搅拌时间为4~8小时;步骤(1)所述继续搅拌的转速 为200~1000转/分钟，所述搅拌时间为0.5~2小时； 步骤(2)所述搅拌转速为500~2000转/分钟，搅拌时间为0.5~2小时； 步骤⑶所述搅拌转速为1000~5000转/分钟，所述搅拌时间为0.5~2小时。7. 根据权利要求2所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤 (2) 所述有机溶剂为乙醇、丙酮或二氯甲烷;步骤(2)所述囊材溶液的质量浓度1~5%。8. 根据权利要求2所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤 (3) 所述滴加的速度为20-80滴/min; 步骤(3)所述微孔滤膜的孔径为0.1~0.5μπι，所述旋蒸去除溶剂的条件为于40~60°C 和0.01~0.1个大气压下蒸出溶剂，所述冷冻干燥的条件为于-30~-50°c冷冻干燥4~8小 时。9.根据权利要求1所述光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂的应用，其特征在于:所述光控靶 向蛇毒多肽锌纳米制剂用作镇痛药物，具有防治中枢性疼痛的作用。
【专利摘要】本发明属于医药的领域，公开了一种光控蛇毒多肽锌纳米制剂及其制备方法和用途。所述方法为：(1)将蛇毒多肽用磷酸或醋酸缓冲液溶解，加入锌盐，搅拌，加入乳化剂，继续搅拌，得到囊心溶液；(2)将囊材用有机溶剂，配成囊材溶液；加入中药光敏剂、乳化剂，搅拌，得到混合物溶液；(3)将囊心溶液滴加到步骤(2)的混合物溶液中，搅拌，过微孔滤膜，滤液，旋转蒸出溶剂，冷冻干燥，得到光控靶向蛇毒多肽锌纳米制剂。本发明增强了蛇毒多肽的稳定性；并且制剂的结构稳定，用于镇痛药物。
【IPC分类】A61K38/17, A61K9/51, A61K47/22, A61P25/00, A61K47/14
【公开号】CN105497873
【申请号】CN201510962906
【发明人】叶勇, 方菲
【申请人】华南理工大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月17日