基于paqr3的降低胆固醇、脂肪合成的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及基于改变PAQR3功能的降低胆 固醇、脂肪合成和减肥的新方法。
【背景技术】
[0002] 胆固醇又称为胆酱醇，是存在于动物细胞膜中的一种类固醇物质，W游离胆固醇 和胆固醇醋的方式存在于细胞内，在维持细胞膜适当的膜透性和流动性方面发挥着重要的 作用。胆固醇的主体由环戊焼多氨菲构成，因此赋予了胆固醇分子较为刚性的结构性质。在 主体环的两端分别是一个极性的居基和一个非极性的碳水化合物链，因此，与其他膜脂成 分一样，胆固醇同时含有的极性和非极性的结构使其在磯脂双分子层结构中保持正确的体 位。
[0003] 胆固醇不仅是细胞膜的重要组分，也是体内许多重要物质（如维生素 D、胆汁酸、 肾上腺激素、性激素等）的合成前体。此外，胆固醇及其氧化固醇同源物还是许多重要生物 合成途径中的中间介质，如氧化固醇可W激活某些核受体，某些蛋白质需要胆固醇及其代 谢中间产物的共价修饰才W发挥作用。
[0004] 人体内的胆固醇主要来源于自身合成，食物的补充是次要来源。一个70kg体重 的成年人，体内大约有胆固醇100g,其中每天体内从头合成约600-900mg，从食物中吸收约 300-500mg。动物组织几乎所有器官都能合成胆固醇，但肝脏和小肠粘膜是胆固醇自身生物 合成的主要器官，其合成量大约分别占每日新合成胆固醇的50%和24%。其他组织如肾上 腺皮质、脾脏等也可W合成胆固醇。饮食来源的胆固醇主要来自于小肠对胆汁和食物胆固 醇的吸收，即小肠吸收水解的游离胆固醇后将其醋化，与载脂蛋白组成乳糜微粒进入淋己 和血液循环系统。饮食来源的胆固醇对质膜胆固醇的含量影响很小。
[0005] 胆固醇代谢奈乱会导致动脉粥样硬化等一系列必血管疾病的发生。血液中胆固醇 浓度过高引起高胆固醇血症，诱发动脉粥样硬化症。而动脉粥样硬化症又是引起冠必病、中 风、必肌梗死等必血管疾病的最常见原因。此外，血液脂肪酸和甘油H醋水平过高将会引起 高甘油H醋血症，对膜岛素抵抗及2型糖尿病的发生发挥着一定的促进作用。因此，降低胆 固醇成为了预防和治疗代谢性疾病的重要方案之一。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种基于PAQR3的降低胆固醇、脂肪合成的新方法。
[0007] 在本发明的第一方面，提供了一种PAQR3或PAQR3调节剂的用途，用于制备药物或 组合物，所述药物或组合物用于选自下组的一种或多种用途：
[000引 （1)调节PAQR3与Scap的相互作用；
[0009] 似调节PAQR3与SREBP的相互作用；
[0010] (3)调节SREBP或Scap在高尔基体的定位；
[0011] (4)调节SREBP和Scap的相互作用；
[001引 妨调节胆固醇和/或脂质的合成；和
[0013] (6)预防或治疗体内胆固醇和/或脂质异常所引起的疾病。
[0014] 在另一优选例中，所述PAQR3调节剂包括PAQR3枯抗剂和PAQR3激动剂。
[0015] 在另一优选例中，所述PAQR3枯抗剂选自下组：
[001引 （a)降低或抑制PAQR3的活性的物质；
[0017] 化）降低PAQR3的表达或稳定性的物质；
[0018] (C)保留PAQR3与SREBP和Scap中之一的结合功能但与SREBP和Scap中另一者 的结合功能丧失或下降的PAQR3的衍生蛋白或片段；和
[0019] (d)保留PAQR3与SREBP和Scap中至少一种的结合功能但铺定高尔基体膜功能丧 失或下降的PAQR3的衍生蛋白或片段。
[0020] 在另一优选例中，所述PAQR3激动剂是指具有选自下组功能的物质：
[00川 （a)增强PAQR3的活性；和/或
[002引 化）提高PAQR3的表达或稳定性。
[0023] 另一优选例中，所述PAQR3调节剂选自；抗体、多肤、sh-RNA、dsRNA、miRNA、反义寡 核巧酸、化合物或其组合。
[0024] 在另一优选例中，所述PAQR3枯抗剂选自；抗PAQR3抗体，针对PAQR3的反义寡核 巧酸、Sh-RNA或dsRNA，PAQR3的化学抑制剂。
[00巧]在另一优选例中，所述PAQR3枯抗剂为多肤，所述多肤包括SEQ ID NO. : 30所示的 氨基酸序列，W及任选地穿膜肤序列；优选地，所述穿膜肤序列为（但不限于）：
[0026] 服邸RQRRRo
[0027] 可W用于本发明中的穿膜肤序列可W为其它基于TAT的序列、W及多种其它用于 能够穿透细胞膜的多肤序列，如文献"穿膜肤的研究进展"（熊维德等，海峡药学，Vol 20 NO. 9 2008)中涉及的穿膜肤。
[0028] 在另一优选例中，所述PAQR3枯抗剂为多肤，所示多肤选自下组：
[002引 （A)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肤；
[0030] 度）具有与SEQ ID NO: 2中所示氨基酸序列> 80%同源性（优选地，> 90%的同 源性；等优选地> 95%的同源性；最优选地，> 97%的同源性）的多肤，且所述多肤具有与 SREBP的结合能力和/或具有与Scap的结合能力；
[0031] (C)将SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加 而形成的，且具有与SREBP结合能力和/或具有与Scap的结合能力的衍生多肤。
[0032] 在另一优选例中，含有所述PAQR3枯抗剂的药物用于：
[003引 （1)降低或阻断PAQR3与SREBP的相互作用；和/或
[0034] 似降低或阻断PAQR3与Scap的相互作用；和/或
[00对 做抑制SREBP的激活；和/或
[003引 （4)抑制SREBP下游基因的表达；和/或
[0037] 妨减少SREBP和/或Scap在高尔基体的定位；和/或
[003引 （6)降低或阻断SREBP和Scap的相互作用；和/或
[003引 （7)抑制胆固醇和/或脂质的合成；和/或
[0040] (8)预防或治疗体内胆固醇和/或脂质升高所引起的疾病。
[0041] 在另一优选例中，所述"胆固醇和/或脂质升高所引起的疾病"选自；肥胖、高胆固 醇血症、动脉粥样硬化、高甘油H醋血症、必肌梗死和脑卒中。
[004引在另一优选例中，含有所述PAQR3激动剂的药物用于：
[004引 （1)增强PAQR3与SREBP的相互作用；和/或
[0044] 似增强PAQR3与Scap的相互作用；和/或
[004引 做增强SREBP的表达或活性；和/或
[004引 （4)增强SREBP下游基因的表达；和/或
[0047] 妨增加 SREBP和/或Scap在高尔基体的定位；和/或
[004引 （6)增强SREBP和Scap的相互作用；和/或
[004引 （7)促进胆固醇和/或脂质的合成；和/或
[0050] 做预防或治疗体内胆固醇和/或脂质降低所引起的疾病。
[005。 在另一优选例中，所述"胆固醇和/或脂质降低所引起的疾病"选自：脂肪萎缩症 和肿瘤恶病质。
[0052] 在另一优选例中，所述 SREBP 选自；SREBP-Ia, SREBP-Ic 和 SREBP-2。
[0053] 本发明的第二方面提供了一种分离的复合物，所述复合物为PAQR3或PAQR3衍生 物与SREBP或Scap相结合所形成的二元复合物；或者，
[0054] 所述复合物为PAQR3或PAQR3衍生物与SREBP和Scap相结合所形成的H元复合 物。
[0055] 在另一优选例中，所述复合物的结构如式I所示：
[0056] B-A-C 式 I
[0057] 式中，
[0058] A 为 PAQR3 或 PAQR3 衍生物；
[0059] B 为无、或 SREBP ;
[0060] C 为无或 Scap,
[006。表示元件A与元件B和/或元件C之间的相互结合的结合力；
[0062] 且B和C不同时为无。
[0063] 在另一优选例中，所述复合物为PAQR3、SREBP和Scap相结合所形成的H元复合 物。
[0064] 在另一优选例中，所述复合物的分子量> IOOKD ;优选地所述复合物的分子量 > 150 邸。
[0065] 在另一优选例中，所述复合物的分子量为100邸-350邸；优选地为150邸-300邸。
[0066] 在另一优选例中，所述PAQR3衍生物包括但不限于；PAQR3蛋白的活性片段、PAQR3 蛋白的截短形式。
[0067] 本发明的第H方面，提供了本发明第二方面所述的复合物的应用，用于筛选药物 或化合物，所述药物或化合物促进或抑制所述复合物的形成。
[0068] 在另一优选例中，当应用所述复合物筛选药物时，所述应用包括步骤：
[0069] (a)在测试组中，在待测物质存在下，培养细胞，并且设置无待测物质的对照组；
[0070] 化）检测测试组中所述复合物的含量Hl并与对照组中的复合物含量册进行比较， 其中当化显著高于册，则表示所述测试物为PAQR3的激动剂；当化显著低于册，则表示所 述测试物为PAQR3的枯抗剂。
[0071] 本发明的第四方面，提供了一种调节体内胆固醇和/或脂质水平的方法，包括步 骤；调节PAQR3的活性、表达水平或PAQR3与SREBP或Scap的相互作用。
[0072] 在另一优选例中，当需要降低体内胆固醇和/或脂质水平时，执行降低PAQR3的活 性或表达水平的步骤；
[0073] 当需要提高体内胆固醇和/或脂质水平时，执行增强PAQR3的活性或表达水平的 步骤。
[0074] 在另一优选例中，所述方法包括步骤；给需要的对象施用本发明第二方面所述的 复合物的激动剂。
[0075] 在另一优选例中，所述方法包括步骤；给需要的对象施用本发明第二方面所述的 复合物的抑制剂。
[0076] 本发明的第五方面，提供了一种蛋白或其调节剂的用途，所述的蛋白选自下组： PAQR3、Scap、SREBP或其组合，并且所述蛋白和/或其调节剂用于制备调控本发明第二方面 所述复合物形成的组合物。
[0077] 在另一优选例中，所述的组合物包括药物组合物。
[0078] 在另一优选例中，所述的调节剂包括枯抗剂或激动剂。
[0079] 在另一优选例中，所述"枯抗"指抑制本发明第二方面所述的复合物的形成。
[0080] 在另一优选例中，所述"激动"指促进本发明第二方面所述的复合物的形成。
[008。 在另一优选例中，所述调节剂包括PAQR3的衍生蛋白。
[008引在另一优选例中，所述PAQR3的衍生蛋白选自下组：
[008引 （A)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肤；
[0084] 度）具有与SEQ ID NO: 2中所示氨基酸序列> 80%同源性（优选地，> 90%的同 源性；等优选地> 95%的同源性；最优选地，> 97%的同源性）的多肤，且所述多肤具有与 SREBP的结合能力和/或具有与Scap的结合能力；
[0085] (C)将SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加 而形成的，且具有与SREBP结合能力和/或具有与Scap的结合能力的衍生多肤。
[0086] 本发明的第六方面，提供了一种药物筛选方法，所述方法包括检测本发明第二方 面所述的复合物是否形成的步骤和/或检测本发明第二方面所述的复合物的含量的步骤。
[0087] 在另一优选例中，所述方法包括步骤：
[008引 （a)设置具有待测物质的测试组，并且设置无待测物质的对照组；
[0089] 化）检测测试组中所述复合物的含量化并与对照组中的复合物含量册进行比较， 其中当Hl显著高于册，则表示所述测试物为PAQR3的激动剂；当Hl显著低于册，则表示所 述测试物为PAQR3的枯抗剂。
[0090] 本发明的第走方面，提供了一种治疗或预防体内胆固醇和/或脂质水平异常引起 的疾病的方法，包括