一种纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，特别涉及一种纳米脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]在当今社会癌症已经成为人类健康的第二号杀手，癌症的治愈一直以来都是全球的一大难题。目前化疗是治疗多种癌症的首选。然而抗肿瘤化疗药物具有许多缺陷，例如对机体严重的毒副损伤，肿瘤部位药物浓度低，长时间治疗产生的耐药性等。所以，目前亟待解决的问题是寻求新的能够消灭肿瘤细胞的治疗药物。
[0003]研究发现天然植物抗肿瘤药物的抗癌疗效显著，不良反应小，逐步成为抗肿瘤药物市场上的主角。白桦脂酸是一种五环三萜类化合物，广泛分布于多种植物中，如桦木科的白桦树皮，鼠李科的酸枣仁和豆科的皂角刺等。研究表明白桦脂酸具有诸多的生物学以及药理学活性，如抗肿瘤、抗疟疾、抗HIV和抗炎活性等。但是由于它的水溶性比较差，导致其生物利用率低。近年来，药物载体引起了研究者的广泛关注。其中，脂质体是一种由脂质双分子层构成的封闭囊泡，其是一种生物相容性很好，极具前景的药物载体。脂质体通常是通过提高药物的生物利用度、溶解度和滞留时间来提高许多水溶性以及脂溶性药物的治疗效果。但是常规的纳米脂质体又具有一系列的缺陷，例如稳定性差(易团聚，沉淀)，易被单核细胞吞噬系统捕获以及靶向性不强等。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种制备方法简单，稳定性好，光热转化性能良好且药物释放可控的近红外光响应的纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体及其制备方法。
[0005]本发明主要是利用乙醇注入法制备谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体，使其表面带有巯基官能团；然后采用化学还原法制备金纳米粒子;最后将谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体与金纳米粒子溶液按一定比例混合，在温和条件下进行避光孵育，得到光热转化性能良好且药物释放可控的纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体。
[0006]本发明的白桦脂酸纳米脂质体是一种在谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体表面形成一层纳米金球壳，其粒径大小为130-200nm的纳米载药系统，该纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体的表面等离子共振吸收波长在750-850nm区域内。
[0007]上述白桦脂酸纳米脂质体的制备方法如下:
[0008]1、制备谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体
[0009](I)按白桦脂酸:胆固醇:大豆卵磷脂的质量比=1:0.9?1.5:9?15的比例，将白桦脂酸、胆固醇和大豆卵磷脂在磁力搅拌下，溶解于无水乙醇中，且使每毫升无水乙醇中含上述三种溶质质量的总和为13.08?2 Img，得到类脂溶液；
[0010](2)按每毫升去离子水中含0.4?1.2mg谷胱甘肽的比例，将谷胱甘肽溶于去离子水中，得到谷胱甘肽溶液，在磁力搅拌下，将步骤(I)获得的类脂溶液匀速滴入到36?45°C的谷胱甘肽溶液中，且类脂溶液与谷胱甘肽溶液的体积比为1:2?4，得到脂质体悬液；
[0011](3)将步骤(2)得到的脂质体悬液置于摇床，26?30°C，110?140rpm，I?2.5小时，除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体。
[0012]2、制备纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体
[0013](I)通过化学还原法，以氯化金溶液与硼氢化钠溶液的体积比为100:0.5?3的比例，将240?260mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液，滴加到0.2?1.0mM的氯化金溶液中，边滴加边震荡混匀，直至颜色变为橙红色，即得到粒径为5-8nm的金纳米粒子溶液，置于4°C贮存，备用；
[0014](2)采用晶种生长法，将步骤(I)中得到的金纳米粒子溶液与步骤I获得的谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体按1: 2?6的体积比混合均匀，置于摇床，23?28°C，80?120rpm，避光孵育10?20小时，即得到金纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体；
[0015](3)以氯化金溶液与金纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体的体积比I?6:1的比例，向步骤⑵获得的金纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体中加入I?5mM氯化金溶液，充分混匀，并将其在室温下静置15?40min。随后将混合液置于0°C冰浴中3?lOmin，加入30?80mM硼氢化钠溶液，边滴加边摇晃均匀，并且氯化金溶液与硼氢化钠溶液的体积比为1000:40?90，将其置于摇床，23?28°C，80?120rpm，孵育4?9小时，即得到纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体。
[0016]本发明与现有技术相比具有如下优点:
[0017]1、制备得到谷耽甘妝修饰的白枠脂酸纳米脂质体表面带有疏基官能团，从而有利于脂质体与金纳米粒子进行结合，得到粒径大小在130-200nm的纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体，此粒径范围通过渗透和滞留增强效应更易于在肿瘤部位积累，达到更好的治疗效果。
[0018]2、制备的纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体与现有的药物载体相比，其在750-850nm处存在近红外吸收，具有良好的光热转化性能，使包载的白桦脂酸实现可控释放。
[0019]3、制备的纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体在近红外激光照射下，能很好的将化学药物治疗和光热治疗结合在一起，从而在癌症治疗方面达到理想的效果。
[0020]4、在常温、常压及温和条件下完成制备，操作简单，反应易控制，重复性高。
【附图说明】
[0021]图1是本发明实施例1所得纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体透射电子显微镜图。
[0022]图2是本发明实施例2所得纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体能谱图。
[0023]图3是本发明实施例3所得纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体紫外可见光谱图。
【具体实施方式】
[0024]实施例1
[0025]将6mg白桦脂酸(购自南京泽朗生物科技有限公司)、5.4mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)和54mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)，在磁力搅拌下，溶解于5mL无水乙醇中，得到的类脂溶液。将8mg谷胱甘肽溶于20mL去离子水中，得到谷胱甘肽溶液。在磁力搅拌下，将5mL类脂溶液缓慢匀速滴入到10mL，36°C的谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液。将其置于摇床，26°C，110rpm，l小时除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体。
[0026]通过化学还原法，将5yL，240mM的硼氢化钠(NaBH4)溶液，迅速滴加到ImL 0.2mM的氯化金溶液中，边滴加边震荡混匀，直至颜色变为橙红色，即得到粒径在5-8nm的金纳米粒子溶液，置于4°C贮存，备用。采用晶种生长法，将得到的金纳米粒子溶液与谷胱甘肽修饰的白桦脂酸纳米脂质体以1:2的体积比混合，置于摇床，23°C，80rpm，避光孵育10小时，即得到金纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体；
[0027]取100yL的金纳米粒子包覆的白桦脂酸纳米脂质体，向其中加入100yL的ImM氯化金溶液，充分混匀，并将其在室温下静置15min。随后将混合液置于0°C冰浴中3min，加入40yL的30mM硼氢化钠溶液，将其置于摇床，23°C，80rpm，孵育4小时，即得到纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体。
[0028]应用透射电子显微镜对纳米金球壳包覆的白桦脂酸纳米脂质体进行表征，如图1所示，从图片可以看出，在白桦脂酸纳米脂质体表面形成一层由金纳米粒子组成的致密壳体，粒径为130-200n