氟卡尼作为抗连接蛋白剂的用途和用于加强精神药物的作用的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及氟卡尼作为抗连接蛋白剂的用途。该抗连接蛋白剂有利地用于加强各 种精神药物的治疗作用。更具体地，本发明提供含有氟卡尼和莫达非尼的组合产品。
【背景技术】
[0002] 间隙连接(gap junction)参与细胞间通讯，其对于维持组织和器官的体内稳态是 重要的。间隙连接连通细胞的细胞质，使得能够交换离子(Ca+和K+)、第二信使(AMPc、GMPc、 IP3)、一些小代谢物(葡萄糖），并确保细胞间电耦联和代谢耦联。间隙连接是具有选择渗透 性的连接，其由质膜中含有的蛋白通道形成，并通过连接蛋白六聚物形成。连接蛋白六聚物 还可以形成半通道，连接细胞内外的空间。
[0003] 连接蛋白是质膜的整合蛋白，其几乎由每种细胞类型合成，不管多细胞生物在动 物界的系统发育中处于何种位置。在脊椎动物中，不产生连接蛋白的偶有的细胞是成年横 纹肌细胞、游动精子和循环血细胞。不像许多膜蛋白，连接蛋白具有短的半衰期(3至6小时 之间），其不被糖基化，且没有酶活性。目前，在哺乳动物中已确定了至少十三种不同的连接 蛋白；在人类中，对应于21种亚型。事实上，不同类型的连接蛋白可以存在于多种组织中，并 且大部分细胞合成多种连接蛋白。在到达细胞膜之前，连接蛋白组装为六分子集合，以形成 被称为连接子的中空管状结构，其利用高尔基小泡连接质膜。当建立细胞接触时，一个细胞 的连接子与其邻近细胞的连接子头尾相接地排列，建立约l〇nm长的连续亲水通道。该连接 通道跨过细胞间隙，建立相接触的两个细胞的细胞质之间的直接接触。
[0004]连接蛋白参与大量的生理过程，并且已描述了一些连接蛋白阻断剂（以下也称为 "连接蛋白阻断剂"或"抗连接蛋白剂"）的应用。
[0005] 例如，已提出抗连接蛋白剂用于治疗和/或预防以下病症：
[0006] -癌症（W02006/134494和W02006/049157)，
[0007] -某些心血管疾病(W02006/134494)，
[0008] -创伤（W02006/134494和W02009/097077)，
[0009] -疼痛(W02009/148613)，
[0010] -偏头痛（Durham和Garrett ,2009)，
[0011] -癫痫（Juszczak和Swiergiel，2009)，
[0012] -神经系统病症(W02006/134494)和神经退行性疾病（Takeuchi等人，2011)，
[0013] -局部缺血（Davidson等人，2013)，
[0014] _药物性肝损伤(Patel等人，2012)，
[0015]-感染性疾病(W02011/067607)，
[0016]-化疗剂诱导的细胞毒性(Tong X.等人，2013)，和
[0017] -炎性疾病(W02006/134494)。
[0018] 此外，本发明人之前描述，抗连接蛋白剂能够加强精神药物的治疗作用(W0 2010/ 029131)。特别地，其描述抗连接蛋白剂如甲氯芬那酸(MFA)的施用增加各种治疗精神病的 分子的治疗作用，能够降低活性剂量，从而降低这些治疗精神病分子的不良作用。已在广泛 的治疗精神病分子中（氯氮平、帕罗西汀、莫达非尼、地西泮、文拉法辛、艾司西酞普兰、安非 他酮和舍曲林)观察到这些协同作用。
[0019]因此，确定新的抗连接蛋白剂是最重要的，以突出新的旨在治疗各种疾病和障碍 的治疗工具，特别是与精神药物相组合。
[0020]在此背景下，本发明人现已证明，熟知的抗心律失常剂氟卡尼具有广泛的抗连接 蛋白活性。这是一个非常出乎意料的结果，因为迄今为止已描述氟卡尼干扰钠通道，特别是 心肌细胞上的钠通道，并且这些通道与大脑间隙连接并不相关。此外，已显示氟卡尼并不影 响心肌细胞细胞对的连接抗性(junctional resistance) (Daleau等人，1998)。
【发明内容】
[0021]在本发明的文本中，"氟卡尼"是指式N-(哌啶-2-基甲基)_2,5-双(2，2,2_二氟乙 氧基）苯甲酰胺的化合物。如本文所使用，该术语是指该化合物的任何形式，如其盐。优选 地，所述盐为醋酸氟卡尼。该术语还可以涵盖可以在人体内代谢的氟卡尼前体，和/或其衍 生物(例如，由一个或几个卤素取代和/或添加保护基而产生的化学衍生物）。
[0022] 如图5A和5B所公开，氟卡尼具有一个手性中心，意味着存在R和S对映体(S_( + )_氟 卡尼和氣卡尼）。图5显不R-氣卡尼（图5A，（R)_N_(哌啶_2_基甲基)_2，5_双(2，2，2_ 二氣乙氧基)苯甲酰胺)和S-氣卡尼（图5B，（S)-N_(哌啶_2_基甲基)_2，5-双(2，2，2-二氣乙 氧基)苯甲酰胺)的化学式。
[0023]如本文所使用，术语"氟卡尼"是指N-(哌啶-2-基甲基)-2，5-双（2，2，2-二氟乙氧 基)苯甲酰胺的外消旋体形式，以及其R和S对映体(分别为(R)-N-(哌啶-2-基甲基)-2，5-双 (2，2,2_二氣乙氧基）苯甲酰胺和(S)-N_ (哌啶_2_基甲基)-2，5_双（2，2,2_二氣乙氧基）苯 甲酰胺）。在本发明的一个优选的实施方案中，将使用氟卡尼的R对映体（(R)-N-(哌啶-2-基 甲基)-2,5_双(2,2,2_三氟乙氧基)苯甲酰胺）。
[0024]目前以外消旋体施用氟卡尼(Kroemer等人，1989;Lie等人，1989)。在人和啮齿动 物中施用后，氟卡尼的两种对映体的药代动力学参数已被大量描述，如下所述：
[0025] 在1989年，Kroemer等人出版了 13例接受长期口服氟卡尼治疗的患者的研究。确定 了 S-氟卡尼和R-氟卡尼的血衆水平，R-氟卡尼的血衆浓度显著尚于S-氟卡尼对映体的血衆 浓度(R/S比例=1.10)，这表明氟卡尼药物经历了适中的对映选择性处置[Kroemer等人， 1989]〇
[0026]在1989年，Gross等人比较了在两类人群中两种对映体的处置:施用50mg外消旋醋 酸氟卡尼后，金雀花碱/异喹胍（debrisoquine)的快代谢型（EM)和五名弱代谢型（PM) [Gross等人，1989] Aross等人所展示的数据表明R-氟卡尼的半衰期（12.9h)长于(P〈0.03) S-氟卡尼的半衰期(9.8h)。然而，两种对映体的肾清除率与在EM受试者中观察到的是可比 且相似的。R-氟卡尼的尿回收（15.6±3.711^)大于（？〈0.03)5-氟卡尼的尿回收（12.0± 3.7mg)。因此，在PM中观察到的对映选择性处置是由于R-氟卡尼较S-氟卡尼在代谢中的更 大损害。
[0027]在1991年，Alessi-Severini等人总结了药代动力学的关键发现，并得出结论在人 类中没有氟卡尼对映选择性处置的证据[Alessi-Severini等人，1991]，其引用了立体选择 性治疗监测的三份报告，所述报告发现R/S比例范围为0.67-1.39(平均值1.03±0.16)、 0.75-1.44(平均值1.04)和0.89-1.32(平均值1.10±0.13)，并且Gross等人1989年的研究 是不与总人口相关的。
[0028]在1998年，Hanada等人证明在大鼠中静脉施用氟卡尼外消旋体后，在一些组织中 不存在氟卡尼的两种对映体的对映选择性分布[Hanada等人，1998]。
[0029] 如在[Mehvar等人，2002]中所综述的，似乎在健康志愿者和患者中氟卡尼对映体 的肾清除都不是立体选择性的。
[0030] 因此，对于氟卡尼在药代动力学和代谢上缺乏立体选择性作用，文献是普遍一致 的。
[0031] 还描述了氟卡尼的两种对映体的物理化学性质。特别地，Turgeon等人描述了一种 用于确定人血浆中的抗心律失常剂氟卡尼的立体选择性分析方法。在使用光学活性试剂 (-)_氯甲酸甲酯衍生化之后，通过高效液相色谱(HPLC)在正相硅胶柱上实现对映体的拆分 [Turgeon等人，1990]。
[0032] 此外，Alessi-Severini等人描述了一种确定人血衆和尿中的(R, S)-醋酸氟卡尼 的立体定向性高效液相色谱方法。在i)使用蒸馏乙醚进行碱化的样品的单步提取，i i)蒸发 有机层并在80°C使用1-[(4_硝基苯基)磺酰基]-L-丙基氯将药物衍生化2h，和iii)使用由 乙腈:水:三乙胺(45:55:0.2)组成的流动相以lmL/min的流速在C18反相柱上通过高效液相 色谱(HPLC)之后，分离氟卡尼非对映体[Alessi-Severini等人，1990]。
[0033] 外消旋醋酸氟卡尼是一种广泛使用的lc类抗心律失常剂，其用于治疗各种类型的 心律失常。更具体地，其用于调节心脏的速度和节律。心脏的栗血行为由通过心脏肌肉的电 信号控制。这些电信号使得两对心腔（左和右动脉和心室)有规律地收缩，以产生规律的心 跳。如果心脏的电活动因任何原因受到干扰，可以引起各种类型的不规则心跳(心律失常）。 氟卡尼通过降低心脏肌肉细胞对电脉冲的敏感性帮助治疗心律失常。这调节心脏肌肉的电 传导，并降低心脏节律的紊乱。作为一种I类抗心律失常剂，氟卡尼干扰钠通道。
[0034] 重要的是，一些研究已证明，这些心血管作用不是由单个对映体介导的，两个对映 体都发挥心血管功能：
[0035] 在两种不同的动物模型中评价了氟卡尼及其对映体的抗心律失常作用，所述动物 模型为小鼠中氯仿诱导的心室纤维性颤动和犬中乌巴因诱导的心室性心动过速。两种对映 体在抑制这两种实验性心律失常方面尚度有效，并且似乎是基本上等效的。无论是在两种 对映体之间还是在对映体和外消旋氟卡尼之间，都没有发现显著差异[Banitt等人，1986]。
[0036] 评价了对映体对犬心脏浦肯野纤维中动作电位特征的作用，并证明它们发挥相似 的电生理作用[Kroemer等人，1989]。
[0037]使用鹿糖间隙方法（sucrose-gap method)研究了醋酸氟卡尼外消旋物及其两种 对映体对电压操纵性(voltage-operated)钠和钾通道的作用，以及对豚鼠迷走神经的无髓 鞘纤维的钠栗活动的作用。由对映体分别产生的作用中没有显著差异[Lie等人，1989]。 [0038]使用标准的微电极技术，在分离的犬浦肯野纤维中评估对映体的作用。结果表明 对于犬浦肯野纤维的基本电生理参数，氟卡尼对映体之间的作用没有显著差异[Smallwood 等人，1989]。
[0039] 总之，所有那些研究都没有提供证据以表明，施用单一对映体而非外消旋药物将 带来任何好处。
[0040] 因此，根据第一个方面，本发明涉及氟卡尼在体外和体内作为抗连接蛋白剂的用 途。特别地，本发明涉及氟卡尼用作抗连接蛋白剂，或者，换言之，用于阻断间隙连接的用 途。
[0041] 有21个基因编码人类中不同的连接蛋白亚型，并且描述了涉及间隙连接组成的连 接蛋白单体的不同组合。特别地，在人类中枢或周围神经系统的细胞上表达连接蛋白26(Cx 26)、30(Cx 30)、30.2(Cx30.2)、32(Cx 32)、36(Cx 36)、37(Cx 37)、40(Cx 40)、43(Cx 43)、 45(Cx 45)、46(Cx 46)、和47(Cx 47)(Nakase和Naus，2004)。
[0042] 本发明人观察到，氟卡尼对于抑制由他们所测试的所有连接蛋白构成的间隙连接 是有效的。特别地，如在以下实验部分中所公开，氟卡尼对于抑制由连接蛋白Cx40、Cx26、 Cx30、Cx32、和/或Cx43构成的间隙连接是有效的。重要的是，这种抗连接蛋白作用与在熟知 的抗连接蛋白剂如甲氟喹和甲氯芬那酸（MFA)中所观察到的抗连接蛋白作用是相似的 (Juszczak和Swiergiel，2009 ;Cruikshank等人，2004 ;Harks等人，2001)。对于神经胶质连 接蛋白Cx26、Cx30和Cx43甚至达到了更高的抑制水平(参见图1)。
[0043] 因此，本发明涉及氟卡尼作为抗连接蛋白剂的体外用途。优选地，该试剂可以用于 抑制由连接蛋白构成的间隙连接，所述连接蛋白选自：Cx23(SEQ ID N0:l)、Cx25(SEQ ID N0:2)、Cx26(SEQ ID N0:3)、Cx 30(SEQ ID N0:4)、Cx30.2(SEQ ID N0:5)、Cx30.3(SEQ ID N0:6)、Cx31(SEQ ID N0:7)、Cx31.1(SEQ ID N0:8)、Cx31.9(SEQ ID N0:9)、Cx32(SEQ ID N0:10)、Cx36(SEQ ID N0:ll)、Cx37(SEQ ID N0:12)、Cx40(SEQ ID N0:13)、Cx40.1(SEQ ID N0:14)、Cx43(SEQ ID N0:15)、Cx45(SEQ ID N0:16)、Cx46(SEQ ID N0:17)、Cx47(SEQ ID N0:18)、Cx50(SEQ ID N0:19)、Cx59(SEQ ID N0:20)、和Cx62(SEQ ID N0:21)。
[0044]在本发明一个优选的实施方案中，氟卡尼用于阻断在人类中枢或周围神经系统的 细胞中表达的一种或多种连接蛋白，所述连接蛋白选自：Cx 26(SEQ ID N0:3)、Cx 30(SEQ ID N0:4)、Cx 30.2(SEQ ID N0:5)、Cx 32(SEQ ID N0:10)、Cx 36(SEQ ID N0:ll)、Cx 37 (SEQ ID N0:12)、Cx 40(SEQ ID N0:13)、Cx 43(SEQ ID N0:15)、Cx 45(SEQ ID N0:16)、Cx 46(SEQIDN0:17#PCx47(SEQIDN0:18)。
[0045] 在一个更优选的实施方案中，氟卡尼用于阻断一种或多种连接蛋白，所述连接蛋 白选自：Cx40(SEQ ID N0:13)、Cx26(SEQ ID N0:3)、Cx30(SEQ ID N0:4)、Cx32(SEQ ID N0: 10)、和Cx43(SEQ ID N0:15)。
[0046] 在一个甚至更优选的实施方案中，氟卡尼用于阻断一种或多种连接蛋白，所述连 接蛋白选自：Cx26(SEQ ID N0:3)、Cx30(SEQ ID N0:4)和Cx43(SEQ ID N0:15)。
[0047] 由于其抗连接蛋白活性，氟卡尼可以用于治疗许多疾病和病症，所述疾病和病症 已知受益于抗连接蛋白分子治疗。
[0048] 这些疾病和病症包括但不限于:癌症、心血管疾病、创伤、疼痛、偏头痛、癫痫、神经 性病症和神经退行性疾病、感染性疾病、药物性肝