一种木瓜蛋白酶的提炼方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提炼方法，尤其涉及一种木瓜蛋白酶的提炼方法。
【背景技术】
[0002]木瓜蛋白酶简称木瓜酶，又称为木瓜酵素，是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品，它是一类含巯基(?SH)蛋白酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，其广泛的特异性对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，能催化各种蛋白质，水解成一系列长短不一的短肽或氨基酸，还能把蛋白水解物合成为类蛋白质，由于它的热稳定性好及天然卫生安全等特点，广泛应用于食品、皮革、纺织、日化和制药行业，提高产品质量与档次，降低成本。
[0003]目前，木瓜蛋白酶的提取纯化主要是采用沉淀法，但是这种方法工艺繁琐，产品中仍然混有其它的蛋白酶，纯度不高，不能达到制药工业的需求。随着人们对纯度和安全性提出进一步的要求，色谱技术应用于木瓜蛋白酶的纯化，如离子交换色谱、亲和色谱，该类填料特异性高，纯化倍数高，但分离速度受粒间扩散和低的轴向速率限制，压降大，分离时间长，处理量小，不能使用高的加料速度。而膜分离是一种根据分子的大小进行分离的技术，特点是表面积大、扩散路径短、操作压低、处理量大，但传统膜分离技术只有分离相对分子质量相差10倍以上的物系，不能满足生化分离的需要。
[0004]因此，为解决上述问题，特提供一种新的技术方案。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种木瓜蛋白酶的提炼方法。
[0006]本发明采用的技术方案是:
一种木瓜蛋白酶的提炼方法，包括以下步骤:
a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，然后浸入甲醛溶液，加入磷酸，待反应完全后，浸入到壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，最后用醋酸和去离子水洗涤；
b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离；
C、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。
[0007]优选地，所述步骤a中盐酸水解温度为20-23 °C，水解的时间控制在15_20小时之间。
[0008]优选地，所述步骤a中甲醛溶液、磷酸、壳聚糖溶液的质量比为20:0.5:10。
[0009]优选地，所述步骤a中醋酸与去离子水的质量比为1:1。
[0010]优选地，所述步骤a烘干的温度控制在40-50 V之间。
[0011]本发明的有益效果是:进行粗酶的分离，省去了反复沉淀步骤，使活力回收大大提高，由于原料本身不含有害物质，在操作过程中也没有引人有害杂质，得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加工。
【具体实施方式】
[0012]为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的保护范围的限定。
[0013]实施例1
一种木瓜蛋白酶的提炼方法，包括以下步骤:
a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，盐酸水解温度为20°C，水解的时间控制在15小时，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反应完全后，浸入到1ml壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，烘干的温度控制在40°C，最后用50ml醋酸和50ml去离子水洗涤；
b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离；
C、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。
[0014]实施例2
一种木瓜蛋白酶的提炼方法，包括以下步骤:
a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，盐酸水解温度为22°C，水解的时间控制在17小时，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反应完全后，浸入到1ml壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，烘干的温度控制在45°C，最后用50ml醋酸和50ml去离子水洗涤；
b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离；
C、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。
[0015]实施例3
一种木瓜蛋白酶的提炼方法，包括以下步骤:
a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，盐酸水解温度为23°C，水解的时间控制在20小时，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反应完全后，浸入到1ml壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，烘干的温度控制在50°C，最后用50ml醋酸和50ml去离子水洗涤；
b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离；
C、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。
[0016]本发明的有益效果是:进行粗酶的分离，省去了反复沉淀步骤，使活力回收大大提高，由于原料本身不含有害物质，在操作过程中也没有引人有害杂质，得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加工。
[0017]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作任何其他形式的限制，而依据本发明的技术实质所作的任何修改或等同变化，仍属于本发明所要求保护的范围。
【主权项】
1.一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于:包括以下步骤: a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，然后浸入甲醛溶液，加入磷酸，待反应完全后，浸入到壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，最后用醋酸和去离子水洗涤； b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离； C、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。2.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于:所述步骤a中盐酸水解温度为20-23°C，水解的时间控制在15-20小时之间。3.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于:所述步骤a中甲醛溶液、磷酸、壳聚糖溶液的质量比为20:0.5:10o4.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于:所述步骤a中醋酸与去离子水的质量比为1:1。5.根据权利要求1所述的一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于:所述步骤a烘干的温度控制在40-50 0C之间。
【专利摘要】本发明公开了一种木瓜蛋白酶的提炼方法，其特征在于：包括以下步骤：a、将尼龙膜先在盐酸中进行水解，然后浸入甲醛溶液，加入磷酸，待反应完全后，浸入到壳聚糖溶液中，室温反应后进行烘干，最后用醋酸和去离子水洗涤；b、利用超声波粉碎木瓜，然后再用步骤a中的尼龙膜进行粗酶分离；c、利用聚乙二醇和磷酸钾或甲基纤维素和葡聚糖进行双水相萃取，提纯精酶。本发明的有益效果是：进行粗酶的分离，省去了反复沉淀步骤，使活力回收大大提高，由于原料本身不含有害物质，在操作过程中也没有引人有害杂质，得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加工。
【IPC分类】C12N9/50
【公开号】CN105087528
【申请号】CN201510455067
【发明人】赵大全
【申请人】南通惠然生物科技有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年7月30日