>[0082] 阿米洛利(含胍基团的吡嗪衍生物)已被用于轻微高血压的治疗，其很少报道有副 作用。阿米洛利通过直接阻滞上皮钠通道(ENaC)起效，因而抑制肾的最近的远曲小管、连接 小管和集合管中的钠的再吸收。这促进了钠和水从身体的流失，但不会消耗钾。如在本文中 所用的，术语"阿米洛利"是指阿米洛利和阿米洛利的盐，如阿米洛利盐酸盐。
[0083] 阿米洛利类似物，如在本文中所用的，是指具有与阿米洛利类似的生物活性但存 在稍有变化的化学结构的化合物。阿米洛利类似物的实例包括但不仅限于苯扎米尔、非那 米尔、5-(N-乙基-N-异丁基)-阿米洛利(EIPA)、苄普地尔、KB-R7943、5-(N-甲基-N-异丁基） 阿米洛利、5-(N，N-六亚甲基)阿米洛利和5-(N，N-二甲基)阿米洛利盐酸盐。其它的实例包 括:在C 5-NH2位置处和/或在胍基上(如图21所示)具有疏水性取代基的阿米洛利类似物，以 及苯扎米尔的甲基化类似物、含有形成于胍基团上的环的阿米洛利类似物、含有酰胍基的 阿米洛利类似物和含有形成于胍基团上的水增溶性基团的阿米洛利类似物，其中所述水增 溶性基团为N，N-二甲基氨基或糖基。在一些实施方式中，所述阿米洛利类似物并不阻滞人 类的Na+/Ca 2+离子交换器。在另外的实施方式中，所述阿米洛利类似物为Na+/Ca2+离子交换 器的弱抑制剂，并帮助维持较低水平的细胞内Ca2+。在另外的实施方式中，所述阿米洛利类 似物为Na+/Ca2+离子交换器的非常弱的抑制剂，具有l.lmM以下的IC5Q。在一些另外的实施方 式中，所述阿米洛利类似物并不阻滞ASIC2a和/或ASIC3通道。在一些实施方式中，所述阿米 洛利类似物具有比ASIC3通道和/或ASIC2通道更高的针对ASICla的选择性。
[0084] 如在本文中所用的，术语"阿米洛利类似物"是指阿米洛利类似物和阿米洛利类似 物的盐，如5- (N，N-二甲基)阿米洛利盐酸盐。
[0085] 在一些实施方式中，阿米洛利和/或阿米洛利类似物与其它的ASIC抑制剂，如 PcTxl及其衍生物结合使用。
[0086] 抑制剂的给药
[0087] 给药（或施用），如在本文中所用的，包括以任何适宜的次数，在任何适宜的条件 下，受治者接触抑制剂的任何的路径。给药可以是自主给药或通过他人，如医疗人员（例如， 医生、护士等)给药。给药可通过注射(除了别的以外，例如，静脉、肌肉、皮下、脑内、侧脑室、 硬膜外和/或鞘内）、口服(例如，采用胶囊、锭剂、流体组分等）、吸入(例如，鼻内和/或口内 吸入的气雾剂(小于约10微米的平均液滴直径））、经皮肤(例如，采用皮肤贴剂)和/或粘膜 (除了别的以外，例如，经过口腔、鼻腔和/或肺粘膜)吸收等来进行。粘膜给药可以，例如，利 用喷剂(如鼻喷剂）、吸入的气雾剂等来实现。喷剂可以是表面喷剂(液滴平均直径大于约50 微米)和/或空间喷剂(液滴平均直径为约10-50微米）。在一些实施例中，局部缺血可使局部 缺血受治者的血脑障壁产生变化，由此提高了功效，导入(例如，通过注射和/或吸收)受治 者血流的抑制剂借此可抵达脑部。给药可进行一次或多次，并可以与局部缺血诊断有关的 任何适宜的次数进行，以提供治疗。因此，给药可在局部缺血被发现之前(例如，预防性地）、 轻微的局部缺血发作之后、慢性局部缺血期间、完全中风之后等进行。在一些实施方式中， 阿米洛利或阿米洛利类似物通过静脉给药。在另外的实施方式中，阿米洛利或阿米洛利类 似物通过脑内给药。在另外的实施方式中，阿米洛利或阿米洛利类似物通过侧脑室给药。在 另外的实施方式中，阿米洛利或阿米洛利类似物通过肌肉给药。在另外的实施方式中，阿米 洛利或阿米洛利类似物通过鞘内给药。
[0088] 可施用治疗有效量(或简称"有效量"）的抑制剂。抑制剂的治疗有效量或有效量， 如在本文中所用的，为当向受治者给药时，在大量的受治者中降低了受治者的局部缺血导 致的损伤的程度、发生率和/或范围的所述抑制剂的任意的量。因此，治疗有效量可在，例 如，将各种量的所述抑制剂给药至测试的受治者的临床研究中确定(并且，通常会与对照组 的受治者相比较）。抑制剂的治疗有效量可通过一次注射或以〇. 1 _50mL每针的体积的多次 注射来给药。
[0089] 在一些实施方式中，所述抑制剂为阿米洛利、阿米洛利类似物或它们的盐，并以以 下范围内的一日量(作为单次剂量或多次剂量)给药:0.01-30mg/kg体重、0.01-10mg/kg体 重、0 · 01_3mg/kg体重、0 · 01-lmg/kg体重、0 · 01-0 · 3mg/kg体重、0 · 01-0 · lmg/kg体重、0 · 01-0 · 03mg/kg 体重、0 · 03_30mg/kg 体重、0 · 03-1 Omg/kg 体重、0 · 03_3mg/kg 体重、0 · 03-lmg/kg 体 重、0 · 03-0 · 3mg/kg体重、0 · 03-0 · lmg/kg体重、0 · l_30mg/kg体重、0 · 1-lOmg/kg体重、0 · 1-3mg/kg体重、0 · Ι-lmg/kg体重、0 · 1-0 · 3mg/kg体重、0 · 3_30mg/kg体重、0 · 3-10mg/kg体重、 0 · 3_3mg/kg体重、0 · 3-lmg/kg体重、l_30mg/kg体重、l-10mg/kg体重、l_3mg/kg体重、3-30mg/kg体重、3-1 Omg/kg体重或10-30mg/kg体重。在一个实施方式中，所述阿米洛利类似物 选自苯扎米尔、非那米尔、EIPA、苄普地尔、KB-R7943、5-(N-甲基-N-异丁基）阿米洛利、5-(N，N-六亚甲基）阿米洛利和5-(N，N-二甲基)阿米洛利盐酸盐。在另外的实施方式中，所述 阿米洛利类似物具有在(：54!12位置处和/或在胍基上的疏水性取代基。在另外的实施方式 中，所述阿米洛利类似物选自以下组中的阿米洛利类似物:苯扎米尔的甲基化类似物、含有 形成于胍基团上的环的阿米洛利类似物、含有酰胍基的阿米洛利类似物和含有形成于胍基 团上的水增溶性基团的阿米洛利类似物，其中所述水增溶性基团为N，N-二甲基氨基或糖 基。
[0090] 在另外的实施方式中，所述抑制剂为阿米洛利、阿米洛利类似物或它们的盐，并作 为配制为以下范围内的单次剂量的药物组合物给药:〇. l-1000mg/剂、0. l-300mg/剂、0.1-100mg/剂、0.1-30mg/剂、0· l-10mg/剂、0· l-3mg/剂、0.1-lmg/剂、0.1-0.3mg/剂、0.3-1 OOOmg/剂、0 · 3-300mg/剂、0 · 3-100mg/剂、0 · 3-30mg/剂、0 · 3-10mg/剂、0 · 3-3mg/剂、0 · 3-lmg/剂、l-1000mg/剂、l-300mg/剂、l-100mg/剂、l-30mg/剂、l-10mg/剂、l-3mg/剂、3-lOOOrng/剂、3-300mg/剂、3-100mg/剂、3-30mg/剂、3-10mg/剂、10-1000mg/剂、10-300mg/剂、 10-100mg/剂、10-30mg/剂、30-1000mg/剂、30-300mg/剂、30-100mg/剂、100-1000mg/剂、 100-300mg/剂或300-1 OOOmg/剂。在一个实施方式中，所述阿米洛利类似物选自苯扎米尔、 非那米尔、EIPA、苄普地尔、KB-R7943、5-(N-甲基-N-异丁基）阿米洛利、5-(N，N-六亚甲基） 阿米洛利和5-(N，N-二甲基)阿米洛利盐酸盐。在另外的实施方式中，所述阿米洛利类似物 具有在C 5-NH2位置处和/或在胍基上的疏水性取代基。在另外的实施方式中，所述阿米洛利 类似物选自以下组中的阿米洛利类似物:苯扎米尔的甲基化类似物、含有形成于胍基团上 的环的阿米洛利类似物、含有酰胍基的阿米洛利类似物和含有形成于胍基团上的水增溶性 基团的阿米洛利类似物，其中所述水增溶性基团为N，N-二甲基氨基或糖基。在一些实施方 式中，配制所述药物组合物以用于静脉注射、脑内注射、侧脑室注射、鞘内注射或肌肉注射。
[0091] 所述抑制剂可以任意适宜的形式和以任意适宜的组合物被给药至受治者。在一些 实施例中，所述抑制剂可被配制为药学上可接受的盐。可配制所述组合物以包括，例如，液 体载体/溶剂(媒介）、防腐剂、一种或多种赋形剂、着色剂、调味剂、盐、消泡剂等。所述抑制 剂可在媒介中以在给药至局部缺血的受治者时提供用于治疗局部缺血的治疗有效量的所 述抑制剂的浓度而存在。
[0092] 在一些实施方式中，制得了具有更高水溶性或脂溶性的阿米洛利类似物。在某些 实施方式中，所述阿米洛利类似物在胍基处包含水增溶性基团（如N，N-二甲基氨基或糖基） 以改善水溶性(式13-16,图24)。在一些实施方式中，所述阿米洛利类似物具有5mM、10mM、 20禮、3〇111]\1、4〇111]\1、5〇111]\1、6〇111]\1、7〇111]\1、8〇111]\1、9〇111]\1、10〇111]\1或更高的水溶性。在另外的实施方式 中，所述阿米洛利类似物具有允许在单次10mL注射液中将10mg、25mg、50mg、100mg、150mg、 200mg、250mg、300mg、400mg或500mg的剂量静脉给药至人体的溶解度。在再另外的实施方式 中，所述阿米洛利类似物具有允许在单次2mL注射液中将10mg、25mg、50mg、100mg、150mg、 200mg、250mg、300mg、400mg或500mg的剂量通过侧脑室给药至人体的溶解度。
[0093] 阿米洛利类似物的合成与筛选
[0094]本申请的另一个方面涉及新的阿米洛利类似物的合成与筛选。阿米洛利类似物的 合成路线是基于所需的类似物结构而设计的。之后筛选新合成的阿米洛利类似物对于ASIC 家族成员（如ASICla和ASIC2a)的抑制效果。可获得一种或多种ASIC抑制剂，特别是如上所 述的ASICla抑制剂。可以任意适宜的方式获得所述抑制剂，其中，如通过筛选一组候选抑制 剂(例如，两个以上化合物的库)和/或通过的合理设计。
[0095] 筛选可包括任意适宜的测定ASIC蛋白与所述组的候选抑制剂之间的相互作用的 检测系统。其中，示例性的检测系统可包括利用培养基中生长的细胞（"培养的细胞"）和/或 利用有机体的生化测定(例如，结合法(binding assay))。
[0096] 在一些实施方式中，基于细胞的测定系统被用于测定在细胞中各个候选抑制剂对 离子流(例如，酸敏感离子流)的效果。在一些实施方式中，所述离子流为钙和/或钠的流。在 一些实施方式中，所述测定系统采用表达ASIC家族成员（如ASICla或ASIC2a)的细胞或表达 两种以上的不同的ASIC家族成员（如ASICla和另外的ASIC家族成员）的两种以上的不同组 的细胞，以确定各个抑制剂对此家族成员的选择性。所述细胞可内源性地或通过引入外来 的核酸来表达各个ASIC家族成员。在一些实施例中，除了别的以外，所述测定系统可利用离 子敏感或膜电势敏感染料(例如，钙敏感染料，如Fura-2)，或凭借对膜电势和/或细胞内离 子(例如，钙)浓度的变化敏感的基于基因的报告系统，来电生理学地测定离子流(如通过膜 片钳）。所述测定系统可被用于测试候选抑制剂对ASIC家族成员（尤其是ASICla)的选择性 和/或特异性抑制作用。
[0097] 可向具有神经损伤的受治者(如局部缺血的受治者)施用一种或多种ASIC抑制剂， 以测试用于治疗神经损伤的所述抑制剂的效力。所述局部缺血的受治者可以是人或动物。 在一些实施例中，所述局部缺血的受治者可提供局部缺血和/或中风的动物模型系统。示例 性的动物模型系统包括具有实验引发的局部缺血的啮齿动物(除了别的以外，小鼠和/或大 鼠）。除了别的以外，所述局部缺血可以是机械性(例如，外科手术)和/或通过药物的给药而 引发的。在一些实施例中，所述局部缺血可由血管阻塞，如由大脑中动脉阻塞而引发。
[0098] 本申请的另一个方面涉及用于减轻神经系统损伤的药物组合物。所述药物组合物 包含有效量的阿米洛利、阿米洛利类似物或它们的药学上可接受的盐；以及药学上可接受 的载体，其中将所述药物组合物配制为用于静脉、鞘内或侧脑室注射。
[0099] 在一些实施方式中，所述药物组合物包含阿米洛利类似物或其药学上可接受的 盐，其中所述阿米洛利类似物选自苯扎米尔、非那米尔、EIPA、苄普地尔、KB-R7943、5-(N-甲 基-N-异丁基)阿米洛利、5-(N，N-六亚甲基)阿米洛利和5-(N，N-二甲基)阿米洛利盐酸盐。
[0100] 在另外的实施方式中，所述药物组合物包含阿米洛利类似物或其药学上可接受的 盐，其中所述阿米洛利类似物选自苯扎米尔的甲基化类似物、含有形成于胍基团上的环的 阿米洛利类似物、含有酰胍基的阿米洛利类似物和含有形成于胍基团上的水增溶性基团的 阿米洛利类似物，其中所述水增溶性基团为N，N-二甲基氨基或糖基。
[0101] 在另外的实施方式中，所述药物组合物进一步包含一种或多种其它的ASIC抑制 剂。在一个实施方式中，所述一种或多种其它的ASIC抑制剂包括PcTxl或PcTxl衍生物。
[0102] 本申请的另一个方面涉及一种用于减轻神经系统损伤的药物组合物。所述药物组 合物包含有效量的阿米洛利类似物或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载体。
[0103] 在一些实施方式中，将所述药物组合物配制为用于静脉、鞘内、侧脑室或肌肉注 射。
[0104] 在一个实施方式中，所述阿米洛利类似物为苯扎米尔的甲基化类似物。在另一个 实施方式中，所述阿米洛利类似物包含形成于胍基团上的环。在另一个实施方式中，所述阿 米洛利类似物包含酰胍基。在再一个实施方式中，所述阿米洛利类似物包含形成于胍基团 上的水增溶性基团，其中所述水增溶性基团为N，N-二甲基氨基或糖基。
[0105] 在另外的实施方式中，所述药物组合物进一步包含一种或多种其它的ASIC抑制 剂。在一个实施方式中，所述一种或多种其它的ASIC抑制剂包括PcTxl或PcTxl衍生物。
[0106] 如在本文中所用的，"药学上可接受的载体"包括任意和全部的溶剂、分散介质、包 膜、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂、甜味剂等。所述药学上可接受的载体可由广泛 的材料来制备，所述材料包括但不仅限于:调味剂，甜味剂，以及其它的材料，如为了制备特 定的治疗组合物而可能会需要的缓冲剂和吸收剂。这些具有药学活性物质的介质和药剂的 使用是本领域公知的。除了任何常规介质或药剂与活性组分不相容之外，其在所述治疗组 合物中的用途是可预期的。可选地，可将阿米洛利和/或阿米洛利类似物混合于包含不与所 述阿米洛利和/或阿米洛利类似物相忌的补充活性组分的药物组合物中。
[0107] 在一些实施方式中，将所述药物组合物配制为用于静脉注射。在另外的实施方式 中，所述药物组合物包含配制为用于静脉注射的阿米洛利和/或阿米洛利类似物。在另外的 实施方式中，所述药物组合物包含配制为用于侧脑室注射的阿米洛利和/或阿米洛利类似 物。在另外的实施方式中，所述药物组合物包含配制为用于鞘内注射的阿米洛利和/或阿米 洛利类似物。在另外的实施方式中，所述药物组合物包含配制为用于肌肉注射的阿米洛利 和/或阿米洛利类似物。适于注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(水溶性的情况下)或 分散液及供无菌注射用溶液或分散液的临时配制的无菌粉剂。对于静脉给药，适宜的载体 包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL?(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在 所有的情况下，注射用组合物为无菌的，且为达到易于以注射液存在的程度的液体。所述注 射用组合物在制造和储存的条件下必须是稳定的，且必须防微生物(如细菌和真菌)的污染 行为而保留下来。所述载体可以是含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液态 聚乙二醇等）和它们的适宜的混合物的溶液或分散介质。例如，通过包膜（如卵磷脂）的使 用，在分散液的情况下通过维持所需的粒度，以及通过表面活性剂的使用，可保持适当的流 动性。可通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗坏血酸、硫柳汞 等)来实现对微生物作用的防范。在许多情况下，优选在所述组合物中包含等渗剂，例如，糖 类、多元醇（如甘露醇、山梨醇）、氯化钠。所述注射用组合物的持久吸收可通过在所述组合 物中包含延迟吸收的药剂，例如，单硬脂酸铝和明胶而实现。
[0108] 无菌注射溶液可通过将所需量的阿米洛利和/或阿米洛利类似物混入适当的溶剂 中，然后过滤灭菌来制备。通常地，分散液通过将活性化合物混入含有基本的分散介质和所 需的以上所列举的那些其它成分的无菌载体来制备。在供无菌注射溶液的制备的无菌粉剂 的情况下，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥，其由之前的无菌过滤溶液生成活性组 分加任意额外的所需组分的粉剂。
[0109] 在一些实施方式中，所述药物组合物以干燥的形式被提供，并被配制为片剂或胶 囊的形式。可根据常规工序采用本领域公知的固态载体来配制片剂。本发明中使用的硬和 软胶囊可由任何药学上可接受的材料，如明胶或纤维素衍生物来制备。
[0110] 在某些实施方式中，将所述药物组合物配制为即刻释放、缓释、延迟释放或它们的 组合。缓释，又称持久释放、延时释放或长效释放、控释(CR)、改良释放(MR)或者持续释放 (CR或Contin)，是用于医用片剂或胶囊以缓慢溶解并随着时间的推移释放所述活性组分的 机制。持久释放的片剂或胶囊的优点在于其通常可比同样药物的立刻释放的剂型吸收少， 以及在于其保持了药物在血流中更稳定的水平，因而延长了药物活性的持续时间。
[0111] 在一个实施方式中，通过在不溶物(如丙烯酸类或甲壳素）的基质中包埋所述