专利名称：苯并萘衍生物在生产用于治疗神经系统疾病的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及下式(Ⅰ)的化合物及其盐在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途。
其中-R1表示基团-COR6或CH2OH,R6表示基团
或基团OR7,R7表示氢原子、含1-20个碳原子的烷基、单羟基烷基或多羟基烷基；r＇和r″表示氢原子、低级烷基、单或多羟基烷基、选择性取代的芳基或氨基酸或氨基糖残基，或合在一起形成一个杂环，-R2表示氢原子、含1-15个碳原子的支链或直链烷基、含1-4个碳原子的烷氧基或环状脂族基团，-R3表示氢原子、羟基、含1-4个碳原子的支链或直链烷基、含1-10个碳原子的烷氧基、取代或未取代的环状脂族基团、硫代环状脂族基团或式-O-Si(CH3)2-R8的基团，R8表示直链或支链低级烷基，-R4和R5相同或不同，表示氢原子、低级烷基、羟基或低级酰氧基。
根据本发明，在含1-20个或1-15个碳原子的支链或直链烷基中，优选甲基、乙基、异丙基、丁基、叔丁基、己基、辛基、壬基、2-乙基己基和十二烷基。这些基团优选含有1-12个碳原子。
当为低级基团时，烷基通常含有1-6个碳原子。可以提到的低级烷基是，甲基、乙基、异丙基、丁基、叔丁基和己基。
单羟基烷基或多羟基烷基应理解为是指含1-6个碳原子和1-5个羟基的基团。
单羟基烷基中，所述基团优选含有1或3个碳原子，具体地讲，优选羟甲基、2-羟基乙基和2-或3-羟基丙基。
多羟基烷基中，优选含有3-6个碳原子和2-5个羟基的基团，例如2,3-二羟基丙基、2,3,4-三羟基丁基、2,3,4,5-四羟基戊基或季戊四醇残基。
芳基中，优选苯基、噻吩基或吡啶基，这些基团至少有一个氢原子选择性地被羟基、烷基、硝基、甲氧基或选择性取代的氨基取代。优选选择性取代的苯基。
氨基酸残基应理解为是指，从氨基酸如赖氨酸、甘氨酸或天冬氨酸之一衍生的残基，肽残基应理解为是指，通过氨基酸结合而得到的二肽或三肽残基。
氨基糖残基中，可以提到的是从葡糖胺、半乳糖胺和甘露糖胺衍生的残基。
优选地，应将杂环理解为是指，1-哌啶基、吗啉代、1-吡咯烷基或1-哌嗪基，这些基团在4-位选择性地被C1-C6烷基或以上所定义的多羟基烷基所取代。
含1-10个碳原子的烷氧基中，可以特别提到的是甲氧基、乙氧基、异丙氧基、己氧基和癸氧基。
环状脂族基具体应理解为是指，含1-10个碳原子的环状或多环烷基基团，这些基团选择性地被一个或多个卤原子或一个或多个羟基所取代。可以特别提到的是金刚烷基或1-甲基环己基。
优选的硫代环状脂族基团是1-金刚烷硫基。
卤原子中，优选氟或氯。
在多个试验中对化合物(Ⅰ)进行了研究，以测定其神经营养活性。化合物对星形细胞在培养基中生产NGF的影响从1-2日龄新生大鼠的大脑皮质中制备初级星形细胞培养物。解剖后，将皮质通过Bultex尼龙(83mM目)进行机械破碎。在12孔Corning平板中，以每孔1ml细胞制备物的量，在含有10％胎牛血清、2.5mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素的DMEM/F12培养基(Gibco,Brl 1∶1)(1个皮质/30ml)中培养细胞。将平板放在用5％CO2饱和的37℃保温箱中，每隔3天换一次培养基，使用培养第7天的培养物(80-90％汇合)。每孔用500ml上述培养基，用不同化合物处理40小时。在处理结束时，用免疫酶促试验检测分泌到培养基中的NGF，通过使用考马斯兰的Bradford技术评估膜蛋白质水平。NGF的检测用免疫酶促技术评估NGF水平。用溶解于50mM Na2CO3缓冲液(pH9.6)的抗-NGF单克隆抗体(0.67mg/ml)，在37℃将96孔板处理2小时。室温下将空平板与溶于相同缓冲液的1％胎牛血清保温1小时，用含200mM NaCl,10mM CaCl2,0.1％Triton X-100和0.5％NaN3的50mM Tris-HCl缓冲液(pH7.0)(缓冲液A)洗涤。然后，一式两份加入用提取缓冲液(50mM Tris-HCl,pH7,200mM NaCl,1％BSA,0.1％Triton X-100,4mg/ml抑酶肽，2mM EDTA,0.1mM氯化苄乙氧铵和0.05％NaN3)以9/10稀释的星形细胞培养基和NGF标准物(从10至320pg/ml)(0.1ml/孔)。在4℃将平板保温约16小时。用缓冲液A洗涤后，将平板在37℃下与同β-半乳糖苷酶偶联的二级抗NGF单克隆抗体(0.13-0.15U/ml)保温4小时。用缓冲液A洗涤后，37℃将平板与在含150mM NaCl,2mM MgCl2,0.1％NaN3和1％BSA的10mMHEPES(pH7.0)中制备的β-半乳糖苷酶底物氯酚红-β-D-吡喃半乳糖苷(2mg/ml)保温2至3小时。用Bio Kinetics Reader EL 340在570nm测量反应产物。结果本发明化合物增加了NGF的生产。在浓度为100nM时，与对照相比，最具活性的本发明化合物使NGF的生产增加达70％以上。化合物对背根神经节的轴突生成(neuritogenesis)和轴突生长的影响从14日龄大鼠胎中取出背根神经节(DRG)。在3种不同水平的髓(颈、胸和骶)上收集样品。在用5％CO2饱和的保温箱中，在含或不含待测化合物的条件下，于含有5％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基(Gibco,Brl)中将DRG培养24小时。然后将培养基用不含胎牛血清、但含有1μM抑制非神经元细胞增殖的阿糖胞苷(SIGMA)的相同培养基代替。
用BI0COM成像分析系统通过形态计量技术评估在培养48小时后，化合物对轴突生成和轴突生长的影响。结果在浓度为100nM时，与对照相比，数种本发明的化合物使背根神经节外植物的轴突生成提高了100％以上。
还评估了本发明化合物用于治疗神经系统自身免疫性疾病的治疗潜力。化合物对患有实验性自身免疫脑炎(EAE)的小鼠淋巴细胞增殖的影响EAE的诱导在第0天和第7天，对雌性SJL/J小鼠皮下注射在完全弗氏佐剂中乳化的髓磷脂碱性蛋白(MBP,400μg/小鼠)。在第一次免疫约20天后，将表现出临床症状的动物的淋巴结用于增殖试验。淋巴细胞增殖的测量取出神经节并通过金属筛将其机械破碎。将细胞在含有10％去补体胎牛血清、2.5mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和0.5％2-巯基乙醇的RPMI培养基(Gibco,Brl)中以250,000细胞/孔的量在TPP 96孔板中培养。将平板置于用5％CO2饱和的37℃的保温箱中。在培养的当天，在含或不含MBP(25μg/ml；抗原刺激)的条件下，将细胞用视黄酸的不同类似物处理96小时。通过测定在培养的最后16小时加入到培养基中的氚代胸苷的掺入量对增殖进行评估。结果结果分析表明，本发明化合物抑制从EAE小鼠得到的淋巴细胞增殖的IC50值为0.1-100nM。化合物通过激活的小神经胶质细胞对TNF-α(肿瘤坏死因子-α)生产的影响小神经胶质细胞的一级培养物从1日龄的新生大鼠皮质制备小神经胶质细胞。在TPP96孔平板中，将细胞在含有10％胎牛血清(失活的myoclone)、2.5mML-谷氨酰胺、4.5g/l L-葡萄糖和100U/ml青霉素和100μg/ml庆大霉素的DMEM培养基(Gibco,BRL)中培养。用视黄酸的不同类似物处理细胞并用1μg/ml脂多糖苷(LPS)进行刺激以诱导TNFα的生产。培养18小时后，收集培养基对TNFα进行检测。TNFα的检测用细胞系L929的细胞毒性试验确定在小神经胶质细胞培养上清液中的TNFα水平。通过MTT比色法肉眼观测试验。结果本发明的化合物通过激活培养中的小神经胶质细胞而减少了TNFα的生产，在浓度为10nM时的降低效果为50％。
结果表明，本发明的化合物具有神经营养活性，可用于治疗创伤、局部缺血性、代谢性、感染性、酒精性、医原性或遗传性外周神经病，以及用于治疗影响运动神经元的疾病如肌萎缩侧索硬化和脊髓肌萎缩。还可将其用于制备治疗如下疾病的药物视网膜病、大脑衰老、多梗塞后的痴呆、血管性痴呆、橄榄体脑桥小脑萎缩和其它神经变性疾病如老年性痴呆、Pick病或杭廷顿氏舞蹈病。本发明的化合物还可用于预防脑血管意外事件或髓或颅创伤后的神经元死亡。
还证实了这些化合物对自身免疫原性疾病如多发性硬化、Guillain-Barre’s疾病和重症肌无力有效。
活性最强的化合物具有如下结构式
其中-R6表示基团
或基团OR7,R7表示氢原子、含1-20个碳原子的烷基、单羟基烷基或多羟基烷基；r＇和r″表示氢原子、低级烷基、单或多羟基烷基、选择性取代的芳基或氨基酸或氨基糖残基，或合在一起形成一个杂环，-R表示氢原子、羟基、含1-4个碳原子的支链或直链烷基或1-4个碳原子的烷氧基。
优选的化合物是6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘甲酸和6-[3-(1-金刚烷基)-4-羟基苯基]-2-萘甲酸，它们的酯(特别是其甲酯)和它们酰胺。
还可将该化合物与一种或多种如下化合物联用甾体或非甾体抗炎药、抗病毒剂(特别是疱疹药)、免疫抑制剂和免疫调节剂。可将该化合物与适宜的赋形剂混合制成任何适于经肠、胃肠外或局部给药的药物剂型，例如片剂、糖包衣片剂、明胶胶囊、胶囊、栓剂、贴剂、口服或可注射的溶液或混悬液。每日给药量可以是0.01-100mg活性成分。
权利要求
1．式(Ⅰ)化合物及其盐在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途，
其中-R1表示基团-COR6或CH2OH,R6表示基团
或基团OR7,R7表示氢原子、含1-20个碳原子的烷基、单羟基烷基或多羟基烷基；r＇和r″表示氢原子、低级烷基、单或多羟基烷基、选择性取代的芳基或氨基酸或氨基糖残基，或合在一起形成一个杂环，-R2表示氢原子、含1-15个碳原子的支链或直链烷基、含1-4个碳原子的烷氧基或环状脂族基团，-R3表示氢原子、羟基、含1-4个碳原子的支链或直链烷基、含1-10个碳原子的烷氧基、取代或未取代的环状脂族基团、硫代环状脂族基团或式-O-Si(CH3)2-R8的基团，R8表示直链或支链低级烷基，-R4和R5相同或不同，表示氢原子、低级烷基、羟基或低级酰氧基。
2．下式化合物在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途，
其中-R6表示基团
或基团OR7,R7表示氢原子、含1-20个碳原子的烷基、单羟基烷基或多羟基烷基；r＇和r″表示氢原子、低级烷基、单或多羟基烷基、选择性取代的芳基或氨基酸或氨基糖残基，或合在一起形成一个杂环，-R表示氢原子、羟基、含1-4个碳原子的支链或直链烷基或1-4个碳原子的烷氧基。
3．6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘甲酸、其酯和/或其酰胺在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途。
4．6-[3-(1-金刚烷基)-4-羟基苯基]-2-萘甲酸、其酯和/或其酰胺在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物及其盐在生产用于治疗外周神经病、中枢神经变性疾病以及神经系统自身免疫疾病的药物中的用途。
文档编号A61P37/00GK1221341SQ9719528
公开日1999年6月30日 申请日期1997年4月2日 优先权日1996年4月5日
发明者X·维热, J·贝纳维德斯, B·施鲁特, V·托潘 申请人:盖尔德马研究及发展中心